Agilent-1260高效液相色谱仪标准操作规程

1目的规范Agilent1260高效液相色谱仪维修、保养、校正操作。2范围本公司化验室Agilent1260高效液相色谱仪的维修、保养。3责任仪器负责人负责本规程的实施。4内容4.1系统组成本系统由G1311C输液泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G4212BDAD检测器和M8307AA色谱工作站组成。4.2开机前准备4.2.1根据实验要求配制流动相，经0.45μm滤膜过滤，超声3～5min。4.2.2配制对照品溶液和样品溶液（也可在平衡系统时配制），经0.22μm微孔滤膜过滤。4.3进样前准备4.3.1打开计算机，进入Windows系统。打开各模块电源（不分先后），待各模块自检完成后，双击桌面上的HPLC（联机）图标，自动进入化学工作站联机界面。4.3.2选择“视图-方法和运行控制”，也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗，正常情况会默认进入此界面。选择“视图-系统视图”，即可显示仪器控制视图；选择“视图-样品视图”，即可显示样品信息视图。4.3.3轻轻旋开泵模块上的冲洗阀（逆时针转约1圈，不可用力太过），右击“四元泵”图标，单击“方法”，设置“流量”为5ml/min，A通道设到100%，单击“确定”。4.3.4右击“四元泵”图标，单击“控制“，选中“打开”，点击“确定”，则系统开始排气，直到管路内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止（一般为5分钟）；切换通道同法继续冲洗，直到所有要用通道均无气泡为止（只需排所用到的通道即可）。4.3.5右击“四元泵”图标，单击“方法”，设置“流量”为0ml/min，单机“确定”，轻轻旋紧冲洗阀（顺时针），设置“流量”为方法所需流速，冲洗色谱柱20～30min。4.3.6设置“流量”为0ml/min，把冲洗液换成流动相，排气后，运行方法，待柱压基本稳定后，打开检测器等，观察基线情况。4.3.7单击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标，输入溶剂瓶A、B内流动相的实际体积（为保护泵和色谱柱，请按实际体积输入）和停泵的体积单击“确定”，如果各溶剂瓶溶剂体积小于停泵体积，泵将自动停止，避免气泡进入系统。4.4方法的建立4.4.1选择“方法-新建方法”，点击“编辑完整方法”编辑新方法。选择“方法信息”、“仪器/采集”、“数据分析”，单击“确定”，进入“方法注释”界面，此项可以忽略不写，单击“确定”，进入“选择进样源/位置”界面。4.4.2自动进样器参数设定：进样方式选择“Als”，单击“确定”，进去“方法设定”界面。4.4.3选择“四元泵”选项，设置“流量”为方法所需流速，在溶剂“B”、“C”、“D”处输入流动相所占比例（A=100-B-C-D），也可在右侧“时间表”项下选择“添加”，编辑梯度。在“停止时间”项下输入样品运行时间，在“压力限值”输入柱子的最大耐高压，以保护色谱柱。选择“进样器”输入进样体积，选择“TCC”输入所需柱温或选“不控制”。选择“VWD输入检测波长”。编辑完毕之后，单击“确定”，进入“运行时选项表”界面，选中“数据采集”和“标准数据分析”，单击“确定”。4.4.4选择“方法-保存方法/方法另存为”，保存方法。4.4.5通过在线改变数据采集或者在线/离线改变数据分析参数而变更方法，可以通过选择“方法-保存方法/方法另存为”，保存新的参数到现在的方法中或者另存为新方法。4.4.6选择“方法-调用方法”，调用已有方法。方法一经调用便立即生效。4.5进样4.5.1单针进样（1）选择“单针进样”图标。（2）右击“运行控制”，单击“样品信息”，输入“操作者名称”、数据存储目录路径中的子目录，子目录即为数据图谱存储的文件夹，点击“确定”，自动弹出“E:\---不存在，要创建它吗？”，单击“确定”，再选择“手动”或“前缀/计数器”（区别:“手动”--每次做样之前必须给出新名字，否则仪器会将上次的数据覆盖掉；“前缀/计数器”在“前缀”框中输入前缀，如20120505，在“计数器”框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名如20120505000001、20120505000002等）。“样品位置”填写进样瓶的位置。（3）点击界面中的“开始”运行方法，中间停止采样点“结束”。4.5.2序列进样（1）选择“序列-序列参数”，设置同单针进样。（2）选择“序列-序列表”，在表格中可进行“插入”、“剪切”、“复制”、“粘贴”、“追加行”等操作，表格中必须填写“样品瓶”、“样品名称”、“方法名称”、“进样次数”、“数据文件”、“进样量”等信息，其他信息可选择编辑。编辑完成后，单击“确定”。在“序列”菜单中选择“序列模板另存为”，为新建序列命名。在“序列”菜单中选择“调用序列模板”，序列模板被调出。（3）右击“仪器”，单击“运行序列”，开始序列进样。4.6数据分析编辑4.6.1选择“视图-数据分析”，进入数据分析界面。4.6.2右击“文件”，选择“调用信号”，选中所需的数据文件名，单击“确定”数据被调出。4.6.3右击“图形”，选择“信号选项”，进行色谱图优化，直到色谱图的显示比例合适为止。选择“化合物名称”，即可将命名的化学物名称添加到当前的色谱图中。4.6.4右击“积分”，选择“积分事件”，设置合适积分参数“斜率灵敏度”、“峰宽”、“最小峰面积”、“最小峰高”等。点击“积分”菜单中的“积分”，则数据被积分。如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。单击保存图标将积分参数存入方法。4.6.5建立校正曲线（1）选择“文件-调用信号”，选中所需的标样数据文件名，点击确定，调出建立校正表所需的色谱图并对色谱图进行图形优化和积分优化。选择“校正-校正设置”，其中“参考峰/其他峰”分钟栏留空，修改“%”以改变确认保留时间范围内的峰都被认为是参考/其他峰，“含量单位”填写样品含量单位，选择缺省校正曲线方法，“确定”退出。（2）建立校正表：选择“校正-新建校正表”，出现“新建校正表”菜单，“确定”即可。出现“校正表”表格，在图谱中选择需要校正的色谱峰，“化合物”栏填写化合物名称，“含量”栏填写色谱峰对应物质含量。（3）打印带校正表的报告：选择“报告-设定报告”，在“定量设置”中计算模式选择外标法，“报告设置”中报告格式选择完整报告，点击“确定”。4.6.6光谱（1）查看光谱：选择“文件-调用信息”，选中数据文件，点击确定。选择“光谱-选择光谱”，通过游标定位到信号中的任何位置，显示一个光谱。“选择峰顶点光谱”:峰顶点强度最高的光谱。“选择平均光谱”:得到峰中许多光谱的平均光谱；“选择峰光谱”：选择并显示峰光谱的峰组中所有光谱。（2）查看等吸收图：选择“光谱-等吸收线图”可以查看当前色谱图的2D吸收等高图。（3）查看3D：选择“光谱-3D图”可以查看当前色谱图的3D吸收全扫描图。（4）峰纯度检查：选择“光谱-选择峰纯度”，再选择待考察峰，显示峰纯度图形报告。如峰峰纯度值大于设定的纯度阈值，则色谱图中会用绿色框标记此峰，否则为红色框。4.7打印报告4.7.1选择“报告-设定报告”选项，进入如下画面。点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角，选中“外标法”，其它选项不变。选择“类型”，点击“确定”。4.7.2从“报告”菜单中选择“打印”或者点击，则报告结果将打印到屏幕上。如想输出到打印机上，则在上图中左下角“目标”处，将打印机选上。若要生成其他格式的报告，则选定“文件”，然后选择相应的格式即可。4.8关机4.8.1进样结束之后，关闭检测器的灯后冲洗系统，可以延长检测器灯的寿命。4.8.2若流动相不含缓冲盐溶液，可直接用90%甲醇溶液冲洗系统和反相色谱柱30min，并用90%甲醇溶液封存，两端用堵头封紧。若流动相含有缓冲盐溶液，则先用10%甲醇溶液冲洗30min，再用90%甲醇溶液冲洗20min，最后用90%甲醇溶液封存，两端用堵头封紧（适用于反相色谱柱）。4.8.3冲洗完毕之后，将泵流速降至0ml/min，关闭工作窗口，退出化学工作站，关闭电脑。关闭所有模块电源开关，填写仪器使用记录。