实验活动生物安全标准操作规程

杭州余杭邦尔医院检验科生物安全管理制度47文件编号：YHBE-JYK-SWAQ-15生物安全管理制度实验活动生物安全标准操作规程编制人：钟剑生效日期：2018年1月1日审核人：王再岭版本号/修订号：1/3批准人：张延亮发布部门：检验科共页1、实验室工作人员进入实验室工作时，根据实验室生物安全个人防护的配备原则穿着适应的工作服或防护服、鞋套或专用鞋等；2、在进行可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性材料的操作时，应戴手套(一次性手套)，必要时戴防护眼镜，穿隔离衣。3、严禁在实验室中穿凉鞋、拖鞋、露趾和机织物面的鞋。实验室工作人员手上有皮肤破损或皮疹时应戴乳胶手套或双层手套.4、实验室工作人员工作结束或者离开实验室，防护用品应先消毒、后摘除，随后必须洗手，根据医院感染科六步法洗手要求，在感应水龙头下流水肥皂洗手或使用酒精擦手。5、标本采集时工作人员应遵循生物安全的要求，操作者均要穿工作服、戴手套、口罩。6、应使用与仪器匹配的真空采血管及一次性试管。尽量避免开盖以防微生物气溶胶的吸入，标本直接上机，构成全封闭系统。7、对产生气溶胶、高浓度或大容量感染性材料的样本进行高风险实验操作时（包括离心、混匀、超声物化和剧烈搅拌等），实验室应使用密封的离心机转子、安全的离心杯和样本存储容器，并只允许在生物安全柜或负压罩中开闭、装卸和操作。8、相关制度文件：生物安全制度微生物管理杭州余杭邦尔医院检验科生物安全管理制度48生物安全柜操作规程1、目的规范生物安全柜的操作与维护工作，确保仪器正常运作，以保障工作人员的安全。2、适用人员临床微生物实验室检验人员。3、该SOP变动程序本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。4、内容（1）操作流程①操作前准备，在开始工作之前开启紫外灯消毒15分钟，实验人员应戴上乳胶手套，将准备放到安全柜的容器和材料的表面在移入前用70%酒精擦拭表面消毒，以去除污染。正式工作前让安全柜风机至少运行3～5分钟使安全柜内的空气进行净化。②关闭消毒紫外灯，开启生物安全柜风机和照明灯，并将前窗开至合适的高度，并确认生物安全柜的运行是否处于正常状态。将本次操作所需的全部物品放入生物安全柜，洁净和污染物品分开放置。③正式操作时，实验人员应将双臂缓缓伸入安全柜内，至少静止1分钟，使柜内气流稳定后再进行操作。操作时应尽量减少双臂剧烈运动和频繁在操作窗口进出。④实验操作完成后应及时对实验物品进行清理，并对污染物和实验废弃物进行必要的包装及消毒后才能拿出安全柜。所有开放性容器，必须加盖或密封后取出。⑤工作完全后，关闭玻璃窗，保持风机继续运转10～15分钟，同时打开紫外灯，照射30分钟。(2)操作要求①每次使用前应检查生物安全柜的正常指标，包括风速、气流量和负压在正常范围。若出现异常应停止使用，进行检修工作。杭州余杭邦尔医院检验科生物安全管理制度49②使用生物安全柜时，不要打开玻璃观察窗。③开始工作之前，要准备一张实验工作所需要的材料清单，先将工作所需物品放人，这样可以避免双臂在操作中频繁横向穿过气幕而破坏气流。放人生物安全柜的物品表面应用70％乙醇进行消毒，以去除污染。④打开风机5～l0分钟，待安全柜内的空气得到净化并且气流稳定后再开始操作。开始操作前，要先调整好凳子或椅子的高度，以确保操作者的脸部在工作窗口之上。然后将双臂伸人安全柜静止至少1分钟，使安全柜内气流稳定后再开始操作。⑤生物安全柜上装有窗式警报器和气流警报器两种警报器。当窗式警报器发出警报时，表明操作者将滑动窗移到了不当的位置，应将滑动窗移到适宜的位置；当气流警报器报警时，表明安全柜的正常气流模式受到了干扰，操作者或物品已处于危险状态，应立刻停止工作，通知实验室负责人，并采取相应的处理措施。⑥安全柜内不放与本次实验无关的物品。柜内物品摆放应做到清洁区、半污染区与污染区基本分开，操作过程中物品取用方便，且三区之间无交叉。物品应尽量靠后放置，但不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。⑦操作时应按照从清洁区到污染区进行，以避免交叉污染。为防可能溅出的液滴，可在台面上铺一用消毒剂浸泡过的毛巾或纱布，但不能覆盖住安全柜格栅。⑧柜内操作期间，严禁使用酒精灯等明火，以避免产生的热量产生气流，干扰柜内气流稳定；且明火可能损坏HEPA滤器。接种环可使用高温电热消毒灯消毒。⑨工作时尽量减少背后人员走动以及快速开关房门，以防止安全柜内气流不稳定。⑩在实验操作时，不可打开玻璃视窗，应保证操作者脸部在工作窗口之上。在柜内操作时动作应轻柔、舒缓，防止影响柜内气流。(3)物品摆放与污染预防措施①生物安全柜内尽量少放仪器和物品，只摆放本次工作需要的物品。②摆放的物品不要阻塞后面气口处的空气流通。所有物品应尽量放在工作杭州余杭邦尔医院检验科生物安全管理制度50台后部靠近工作台后缘的位置，尤其是容易产生气溶胶的仪器，如离心机、涡旋振荡器等，应尽量往安全柜后部放置。要注意生物安全柜前面的空气栅格不要被吸管或其他材料挡住，因为这样会干扰气流的正常流动，可能造成物品的污染和操作者的暴露。③操作时废物袋以及盛放废弃吸管的容器等必须放在安全柜内而不应放在安全柜之外，因其体积较大可放在一侧，但要注意体积不要太大，以免影响气流。污染的吸管、容器等应先在放于安全柜中装有消毒液的容器中消毒1小时以上，方可转入医疗废物专用垃圾袋中进行高压灭菌等处理。④洁净物品和使用过的污染物品要分开放在不同区域，工作台面上的操作应按照从清洁区到污染区的方向进行，以避免交叉污染。为吸收可能溅出的液滴，可在台面上铺一消毒剂浸湿的毛巾或纱布，但要注意不要盖住生物安全柜格栅。⑤在柜内的所有工作都要在工作台中央或后部进行，并且通过观察窗能看见柜内的操作。操作者不要频繁移动及挥动手臂，以免破坏定向气流。⑥工作用纸不允许放在生物安全柜内。⑦尽量减少操作者背后人员的走动以及快速开关房间的门，以防止对生物安全柜的气流造成影响。（4）明火的使用①禁止在柜内使用本生灯。它产生的热量会改变气流方向，也可能破坏滤板。可使用微型的电烧灼器进行细菌接种，但最好使用无菌的一次性接种环。一般情况下，生物安全柜内形成几乎没有微生物的环境，因此一般不需要使用酒精灯，以免对气流产生影响。（5）消毒与灭菌①大多数生物安全柜允许24小时连续工作，实际上连续工作有助于控制实验室中灰尘和颗粒的水平。向房间中排风或通过套管接口与专门排风管连接的Ⅱ级A1型和Ⅱ级A2型生物安全柜，在不使用时可以关闭。其他通过硬管连接的生物安全柜如Ⅱ级B1型和Ⅱ级B2型生物安全柜，必须与房间通风系统联动，以维持房间空气的平衡。在工作完成后，应至杭州余杭邦尔医院检验科生物安全管理制度51少让安全柜继续工作5分钟来完成“净化”的过程，亦即应留出将污染的空气排出安全柜的时间。在操作结束后，应使用适宜的消毒剂(如70％乙醇)擦拭生物安全柜的台面和内壁(不包括送风滤器的扩散板)。②紫外灯对于生物安全柜不是必需的，实际上紫外灯的存在反而会阻挡安全柜内的气流。如果用紫外灯，必须每周清理紫外灯表面的灰尘和污垢。当安全柜重新检测时应同时检测紫外灯的强度，以确保它能可靠地发挥作用。室内有人时紫外灯应关闭，以防皮肤和眼睛无意间暴露在紫外线下受到损伤。③当生物安全柜内发生感染性材料洒溢时，应在生物安全柜处于工作状态下进行处理。（6）生物安全柜的维护根据生物安全柜的设计允许其连续运行工作，但应注意生物安全柜的维护与检测，以确保安全柜处于正常运行状态，一旦发现生物安全柜出现故障就应立即停止使用，并与供应商联系，派专业人员进行维修。①平时在使用过程中应从以下几方面注意进行维护：a.紫外灯：实验后应去除灯管上的灰尘，保持灯管清洁，定期进行照度检测，及时更换灯管，保持消毒效果。b.明火：生物安全柜工作面可以保持洁净的无菌状态，一般尽量不用明火，以免对下降气流产生干扰，接种还等的消毒可采用高温电热消毒灯。c.清洁与消毒：具体见5.消毒与灭菌d.高效过滤器：高效过滤器是生物安全柜的核心部件，应尽量保持实验室干燥和洁净，延长高效过滤器的使用寿命，要求定期进行检测，防止产生泄露，一旦有泄露就必须立即由专业技术人员进行更换。一般可通过高效过滤器的使用寿命显示或定期检测风速等了解其使用寿命，一旦达到使用寿命就应及时更换。e.报警：一旦出现故障报警，就应立即分析原因，及时进行维修。②生物安全柜的现场检测生物安全柜现场安装完后，应进行生物学检测验证，其验证的目的是为了杭州余杭邦尔医院检验科生物安全管理制度52保证生物安全柜在使用中的安全性，主要包括：a.对工作人员的保护，防止实验操作过程中产生的感染性微生物气溶胶对工作人员的威胁。b.对实验对象的保护，防止生物安全柜以外的污染物进入安全柜，对实验对象造成污染。c.交叉污染保护，防止操作过程中产生的气溶胶造成对实验对象的交叉污染。具体检测项目和要求可参照中华人民共和国医药行业标准YY0569—2005((生物安全柜》和中华人民共和国医药行业标准WS233—2002((微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》中的相关规定。杭州余杭邦尔医院检验科生物安全管理制度53高速离心机操作规程1、目的：规范高速离心机的操作与维护工作，确保仪器正常运作，以保障工作人员的安全。2、适用人员：临床微生物实验室检验人员。3、该SOP变动程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。4、操作方法：（1）开机前准备①选择合适的转头，离心管或离心瓶；样品仔细倾入离心管或离心瓶中，带盖平衡②平衡好的待离心管，对称的放入转头的孔中。（2）开机打开电源，开盖，把转头在离心机的驱动轴上安放好。（3）设置离心机的操作参数①核查显示板上显示的速度、时间、温度、加速、减速等参数。上部为运行状态，下部为参数设置值。②按键移光标到所需设置参数处，用数字键获取所需数值，按ENTER确定。（4）离心机运行按START键（5）关机①离心机运行到设置的时间，或按STOP。②离心机完全停转后，开盖，取出样本。安放好离心转头和盖，离心机门关好，关闭电源。（6）注意事项①应按照操作手册来操作离心机。②除工作温度，运转速度和时间外，请不要随意更改机器的工作参数，以杭州余杭邦尔医院检验科生物安全管理制度54免影响机器性能。③使用前应检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染或弄脏。如污染明显，应重新评估离心操作规范，检查离心转子和离心桶是否有腐蚀或细微裂痕。发现疑问立即停止使用，并与厂方联系。④转速设定不得超过最高转速，以确保机器安全运转。⑤使用中如出现0.00或其他数字，机器不运转，应关机断电，10秒后重新开机，待所设转速显示后，再按运转键。⑥离心机放置的高度应当使小个子工作人员也能够看到离心机内部，以正确放置十字轴和离心桶。⑦离心管和盛放离心标本的容器应当由厚壁玻璃制成，或最好为塑料制品，并且在使用前应检查是否破损。⑧用于离心的试管和标本容器应当始终牢固盖紧（最好使用螺旋盖）。⑨离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。⑩离心桶和十字轴应按重量配对，并在装载离心管后正确平衡。⑾操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。⑿空离心桶应当用蒸馏水或乙醇（异丙醇，70％）来平衡。盐溶液或次氯酸盐溶液对金属具有腐蚀作用，因此不能使用。⒀对于危险度3级和4级的微生物，必须使用可封口的离心桶（安全杯）。⒁当使用固定角离心转子时，必须小心不能将离心管装得过满，否则会导致漏液。⒂每次使用后，要清除离心桶.转子和离心机腔的污染。⒃使用后应当将离心桶倒置存放使平衡液流干。⒄当使用离心机时，可能喷射出可在空气中传播的感染性颗粒。如果将离心机放置在传统的前开式的Ⅰ级或Ⅱ级生物安全柜内，这些粒子由于运动过快而不能被安全柜内的气流截留。而在Ⅲ级生物安全柜内封闭离心时，可以防止生成的气溶胶广泛扩散。但是，良好的离心操作技术和牢固加盖的离心管可以提供足够的保护，以防止感染性气溶胶和可扩散粒子的产生。（7）消毒与维护杭州余杭邦尔医院检验科生物安全管理制度55①空离心桶