植物生理学-实验6-种子生活力的测定

实验六植物种子生活力的快速测定实验目的1.了解种子生活力快速测定的方法2.理解TTC/BTB/染料法测定种子生活力的原理?种子生活力（seedviability）：指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。?种子活力（seedvigor）：TTC法1.凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。2.当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被NADH或NADPH还原时，可产生红色的三苯甲腙（TTF），胚便染成红色。3.如种胚死亡便不被染色；如种胚生活力下降，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，染色较浅；故可根据种胚染色的部位或深浅来鉴定种子的生活力。实验原理TTC还原反应如下：氯化三苯基四氮唑三苯甲腙BTB溴麝香草酚蓝法1.活细胞呼吸释放CO2，CO2溶于水成H2CO3解离，使种胚周围环境酸度增加，用BTB来反映酸度的改变；2.BTB变色范围为pH6.0-7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为pH7.1）。3.本实验观察种胚周围的黄色晕圈。染料染色法1.有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不染色。2.而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使胚部染色。所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命力。染料染色法TTC法材料、设备及试剂（一）材料：小麦种子（二）仪器设备：1.小烧杯；2.刀片；3.镊子；4.培养箱（三）试剂：1.0.12％-0.5％TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后，呈中性，pH7±0.5，不宜久藏，应现用现配）。2.5％红墨水（酸性大红G）3.BTB溶胶BTB法1.煮沸的1％BTB琼脂胶约15-20ml，冷却倒胶至培养皿（1/2皿）；2.取30粒完好的小麦种子，种胚向下插入胶(不软不硬)；3.将培养皿置于35℃下培养1hr，对光观察，如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。实验步骤TTC/红墨水染色法1.将种子用温水（30℃）浸泡2-6h，使种子充分吸胀；2.随机取小麦种子30粒，沿种胚中央准确切开，取其一半TTC备用，另一半红墨水法备用；3.将TTC备用的一半种子浸于5mlTTC中，于恒温箱（30-35℃）中保温30min；4.将红墨水法的另一半种子用5ml红墨水浸5min（室温）；5.染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出TTC/红墨水，再用清水冲洗种子1-2次，观察种胚被染色的情况。不同方法测定种子生活力统计表方法供试粒数有生活力种子粒数无生活力种子粒数有生活力种子占供试粒数的%TTC30红墨水30BTB30数据记录与处理?沿种胚中央准确切开，同粒TTC/红墨水法各一半?TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。?染色结束后立即进行鉴定，因放久会褪色。注意事项?显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中?染色时间不能太长，否则不易区分。注意事项?溶胶倒至培养皿1/2处；?取完好小麦种子，将种胚向下插入BTB琼脂胶。注意事项思考题三种方法测定种子生活力的理论依据有何不同?