液质联用操作规程完整

WORD格式整理专业知识分享液质联用仪操作规程第1页共8页SOP·I-Xevo-TQSFSIDC1．适用范围本设备配备ACQUITYUPLC液相色谱仪、TQSMS/MS质谱仪，适用于食品、药品中各种有机物的定性、定量分析，是一种具有高灵敏度的检测仪器，仪器由主机、计算机和数据处理软件等组成。2.职责2.1操作人员按照本规程操作仪器，认真填写实验使用记录。2.2保管人员负责对仪器进行定期维护和保养。2.3科室负责人负责监督检查规程的执行。3．操作程序日常操作步骤：准备UPLC—→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告。注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。建立新方法和project的操作步骤：准备UPLC—→建立新的project—→用标准品调谐—→编辑质谱方法—→编辑UPLC方法—→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告。3.1开机：3.1.1彻底开机顺序（仪器已关闭）确定MS及其它仪器电源电缆已连接，开氮气发生器、开氩气，小表0.1mpa。打开计算机电源等待windows正常启动电脑界面右下角网络图标红叉。打开UPLC自动进样器电源，等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！。打开UPLC泵电源，等约30s或者是有响声。打开质谱电源，等待5min，离子源透视镜里面亮。打开Masslynx软件，masslynx主界面-----左侧instrument----Masstune---界面菜单栏vacuum---pump同样界面左侧偏上diagnostics---vacuum---analyserMS1turbospeed[%]要在5分钟内升到80。至少抽真空4个小时查看真空状态主界面massconsole---界面左侧xevotqmsdetector加号展开---msdisplay碰撞室真空度达WORD格式整理专业知识分享液质联用仪操作规程第2页共8页SOP·I-Xevo-TQSFSIDC到7.xe-5mbar。3.1.2日常开机顺序（仪器未关闭）开氮气发生器、开氩气，小表0.1mpa，打开Masslynx软件，进入工作站。3.2建立项目点击file下的projectwizard,出现对话框，单击yes出现对话框，输入project,location为C:\MSDATA,单击next,选择createexistingprojectastemplate,并以c:\masslynx\default.pro为模板，单击finish.点击OK。3.3准备UPLC系统准备液相的一般流程：准备流动相准备样品灌注二元泵灌注自动进样器建立液相方法平衡液相3.3.1.准备流动相用0.22um的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天，缓冲盐一定要是可挥发的，而且浓度不要大于10mM。3.3.2.样品要求所有样品都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22um的膜过滤。3.3.3灌注二元泵在Masslynx主界面，单击MSConsole,进入UPLC交互显示界面，点击左栏AcquityUPLCSystemControlStartUpSystem，单击QSM，选择需要用到的流动相位置，如A和B，选择sealwash，时间设为3分钟。单击SM，选择StrongWash5cycles,Samplesyringe20单击EquilibratetoMethod，将流速设为0,单击Start开始灌注.时间大约为9min左右。设定流速，平衡液相在Masslynx主界面，单击InletMethod图标，打开液相方法编辑窗口，单击statusACQUITYAdditionalStatus，进入液相控制台，单击A或B或流速的位置，出现流速、比例设定对话框,设定液相流速与比例，单击对勾，开始平衡液相，如果后面要做调谐，可设定流速0.2ml/min,有机相与水相的比例为50:50。WORD格式整理专业知识分享液质联用仪操作规程第3页共8页SOP·I-Xevo-TQSFSIDC3.4准备质谱3.4.1.计算化合物单同位素质量数Masslynx主界面单击ToolsMolecularWeightCalculator,输入化合物的分子式（大写-注意Cl、Br等正确的输入方法）,注意选单同位素Monoiso,IonMode:离子化模式，+ve正离子，-ve负离子,单击Calculate。3.4.2用Intellistart进行自动调谐在Masslynx主界面单击MSTune图标，打开调谐窗口，单击IonModeES+或ES-，单击APIGas图标打开氮气，单击打开高压选择MSMode图标，设定液相流速0.2ml/min,水：乙腈的比例为50:50。把标准品调谐液放入质谱仪塑料瓶位置处的A（或B或C）号位(注:浓度在200ppb左右)单击Fluidics,选择Reservoir为A,FlowState为LC模式，点击Purge图标。Purge结束后，将FlowState改为Combine模式，设定Function为MS1scan，Mass为计算出化合物的质量数，span为5，点击进样，开始进样，直到离子的响应比较稳定。保存调谐文件：FileSaveAs至已建的项目下。在Masslynx主界面，选择MsConsoleXevoTQMSDetector选择Intellistart，选择SampleTuneandDevelopMethod，ES+单击Start图标，出现Intellistart自动调谐编辑窗口，选择SwitchtoAdvancedmode，输入Compoundname(化合物名称)，MolecularMass/Formula(分子量或分子式)AdductA+（[M+H]+，选择LoadExistingSampleTune,在SampleTuneName方框后的“。。。”处调用开始保存的调谐文件，在DevelopMRMMethod前的方框打钩，并在方框出输入MRM方法的文件名，路径为已建的项目下。在PrintReport前方框打钩，ConeVoltage，CollisionEnergy处为默认值，Fluidics下的FlowPath选择Combined模式，SampleReservoir和SampleFlowRate参数与Fuldics下Combined模式下的进样参数保持一致。单击右边的WORD格式整理专业知识分享Start开始自动调谐。调谐成功，会有绿勾出现，查看intellistart报告液质联用仪操作规程第4页共8页SOP·I-Xevo-TQSFSIDC3.4.3查看intellistart中自动生成的质谱方法：从MassLynx主窗口，单击MSMethod，出现MSMethod编辑对话框,选择Fileopen,选择Intellistart中保存的质谱方法的文件，双击方法,如发现自动调谐生产的质谱方法中部分参数有误，则可以在Channels窗口手动修改参数，填写relentinonwindow中的end时间，此时间必须与液相色谱方法运行时间保持一致，选择AutoDwell,单击OK，点击FileSaveAs,保存质谱方法文件。3.5建立液相方法3.5.1编辑液相方法在液相方法编辑窗口，单击Inlet，输入溶剂名称，runtime及梯度洗脱程序，梯度洗脱程序中最后阶段时间必须与runtime符合，单击OK,选择FileSaveAs保存方法，单击LoadMethod，平衡液相。3.5.2建立样品列表在Masslynx主窗口，选择FileNew建立一个空白的表samplelist。输入文件名FileName，样品信息FileText，双击MSFile，选择质谱方法，双击InletFile,选择液相方法，在Bottle中输入样品瓶的位置，在InjectVolume中输入进样体积，可右键Add,增加样品表的行数，保存样品表：FileSaveAs。3.6数据采集和处理3.6.1.选中要采集的样品，单击RunStart,选择AcquireSampleDataonly,，单击OK开始进样并采集。3.6.2在采集过程中，可查看色谱图，点击Chromatogram窗口，点击Real-timeUpdateicon.如果不能见整个TIC图，单击DefaultRange图标。如果方法中包括多个通道，可通过DisplayMass查看如果方法中包括多个检测器或多个Function,可通过DisplayTIC查看3.6.3处理多个Function的数据WORD格式整理专业知识分享如果质谱方法中有多个Function，如有三个Function，如想看第二个Function，MSScan的数据。液质联用仪操作规程第5页共8页SOP·I-Xevo-TQSFSIDC3.6.3.1在色谱图窗口，点击DisplayTIC，选中MSScan，选择Addtrace，单击OK。3.6.3.2如想查第二个Function,DaughterScan质谱图，在色谱图中，选择DisplayTIC,选择ScanWaveDSAddtrace，单击OK。3.6.3.3.选择ProcessCombinespectra.分别用右键输入信号和本底噪音.单击OK.得到DaughterScan的质谱图，单击ProcessSmooth…，单击OK。3.7数据处理-外标定量法3.7.1在Masslynx主页面单击Targetlynx/Editmethod，出现定量方法编辑对话框，单击新建方法图标，新建一个定量方法。3.7.2单击Addnewcompound(添加新的化合物)图标，添加一个新的化合物。3.7.3单击菜单栏update,选中QuantitationIon和CompoundName（前面打勾）在Masslynx主页面，打开中等偏下低浓度标准品的色谱图，Display/Masschromatogram选出要定量的化合物的离子对，一般强度高的化合物用来做为定量离子，另一个离子对则作为确证离子，用鼠标右键在定量离子对色谱图上拉一下，则compoundname,AcquisitionFunctionNumber,QuantificationTrace,PredictedRetentionTime和RetentionTimewindow将自动输入到定量方法中。注意：在色谱图上拉的时候，要遵循两个原则，拉的位置要以色谱峰的峰尖左右对称，拉的宽度要超过峰的起点和终点。3.7.4单击工作曲线图标，在工作曲线设置页面，填入ConcentrationUnits:浓度单位，例如ng/ml,ug/kg，ppb,ppm等。ConcentrationofStandard:Level–选择Conc.A。PolynomialType–选择Linear.（可根据自己行业的规定）CalibrationOrigin_选择exclude(排除原点)，include(包含原点)，force(强制过原点)WORD格式整理专业知识分享WeithtingFunction(权重)_1/x（根据自己行业规定）PropagateCalibrationParameters_如果所有的化合物均用相同的工作曲线的参数，选Yes液质联用仪操作规程第6页共8页SOP·I-Xevo-TQSFSIDC3.7.5打开积分参数列表，选中ApexTrackEnabled（打勾，YES），IntegrationWindowExtent输入2，选中PropagateIntegrationParameters(打勾)，如果色谱峰并不是很对称的色谱图，可先在色谱图上先设定参数，积分，好积分参数满意之后，process/integrate…/copy,在Targetlynx方法中Edit/Past就可将其粘贴到Targetlynx方法中。建议用ApexTrack积分方法，Smooth方法建议用smoothiteration1,smoothwidth2。重复上面的过程，把其他