高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸-学生用

实验饮料中苯甲酸的测定——高效液相色谱法【实验目的】掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸的原理和方法;熟悉实验操作步骤、高效液色谱仪及紫外检测器的使用；了解饮料中苯甲酸测定方法的注意事项。【实验原理】提取饮料中苯甲酸，将提取液过滤后，经反相高效液相色谱分离，紫外检测器测定吸光度，根据保留时间定性，外标峰面积定量。【仪器与试剂】1.仪器高效液相色谱仪，配有紫外检测器；分析天平，感量为0.1mg，0.45μm水系微孔。2.试剂（1）甲醇：色谱纯（2）乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000ml，经微孔滤膜过滤。（3）氨水（1+1）：氨水与水等体积混合。（4）标准溶液：1.0mg/ml苯甲酸标准储备液：准确称取0.118g苯甲酸钠（精确到0.0001g），用水溶解并定容至100ml。于4℃贮存，保存期为6个月。0.2mg/ml苯甲酸标准中间液：准确吸取苯甲酸标准储备液10.0ml于50ml容量瓶中，用水定容。于4℃贮存，保存期为3个月。苯甲酸标准系列工作溶液：准确吸取苯甲酸标准中间液0ml、0.05ml、0.25ml、0.50ml、1.00ml和2.50ml，用水定容至10.0ml，配制成质量浓度分别为0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L和50.0mg/L的标准系列工作溶液。临用现配。（5）20g/L碳酸氢钠溶液（6）实验用水：一级水（超纯水）【实验步骤】1.样品处理：称取20g样品（精确至0.001g），放入小烧杯中，超声5min以除去二氧化碳，用氨水（1+1）调pH约7。加水定容至50ml容量瓶中，经0.45um滤膜过滤，滤液用于色谱分析。2.参考色谱条件：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5um）；流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸胺=55:45；流速：0.8ml/min；检测波长：UV230nm；进样量：20μl。3.标准曲线绘制及样品测定（1）标准曲线的绘制：将苯甲酸标准系列工作溶液，取20μl分别注入高效液相色谱仪，以标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。（2）样品分析：在相同的色谱条件下，取20μl样品处理液注入，高效液相色谱仪，以保留时间定性，以峰面积通过标准曲线计算出待测液中苯甲酸的质量浓度。。【数据处理】样品中苯甲酸的含量按照下式计算：X=ρ×V/m式中，X——样品中待测成分含量，g/kg；ρ——由标准曲线上计算的待测物浓度，mg/ml；V——样品定容体积，ml；m——样品质量，g。【注意事项】1.饮料类食品中，国家标准允许最大使用量：苯甲酸≤0.2g/kg。