FV1000激光共聚焦使用手册

11开机激光器电脑空压机559KeyTemper灯停止闪烁再Keyon电动台488/515KeyGFPPACKeyUCD汞灯电源X-cite荧光开后闪烁需等待开关之间30minLaser显微镜电脑扫描气垫控制盘&手柄调节荧光亮度：X-cite左侧滑轮，光狭小—暗DIC（微分干涉）Polarizer、棱镜手动；激光选488：选明场；选TD488Pinhole50-100,若样品厚需变大，击两次返回AUTOFocus*2快预览；XYrepeat开始扫描LUT对比度，background校正（人为改变，一般不用）TimeScanDevice(multiareatimelapse)打开后电动台自动找原点，极位移动，选点Add60*100*需用油镜激光405440488515559单向扫描8—10us/pixelautosize1:1分辨率512*512GFP500—600，100带宽，干扰大时可减小1、2通道有光栅（S），3固定滤色镜，虚拟通道可无限，将色近的分开phase1,2HV800，可以调高激光器功率，鼠标点后滚轮调节Gain放大倍数（一般1，极弱光才用）PMT负压，把PMT调高，使背景变黑光线内液体，勿重压，插到底横线位置3个带Key，先“1”后Keyon不用的波长激光可以不开2个带interlock(勿动)死机：关软件关PCA&UCD,10s后重开—开软件（勿关激光）(右侧进风后侧出风散热勿贴壁)22激光共聚焦显微镜FV1000-光谱扫描型-(倒置显微镜IX81)简易使用说明书33启动系统3显微镜镜下观察微分干涉差观察4荧光观察5取图的操作界面6如何取图XY平面单标7XY平面双标同步扫描方式10序列扫描方式13XY平面单标+微分干涉差16XYZ扫描双标19XYL光谱扫描212D操作界面24图像分析打开文件243D图像的叠加25比例尺的使用263D图像的重建273D图像的旋转29Unmixing31保存图像35保存到CD-R36关闭系统37附录38内容441.打开计算机.2.打开激光器.(打开钥匙开关.)2-1.多线氩离子(458nm,488nm,514nm)ON(打开电源开关后,打开钥匙开关.)2-2.氦氖绿(543nm)ON2-3.氦氖红(633nm)ON•打开汞灯电源开关.•登陆WindowsXP系统.•双击快捷方式：打开FV10-ASW应用软件.*系统软件的启动需要等待一定时间.开启系统5231UserID:AdministratorPassword:fluoviewUserID:AdministratorPassword:Administrator55微分干涉差观察1.使用手控面板选择物镜.(参照Memo.)2.插入起偏镜.3.插入微分干涉滑块.4.点击FV10-ASW软件中的图标.5.标本聚焦.Memo按照7-1的操作转换物镜的倍率之后，对：●物镜●各物镜对应的DIC元件*进行操作.*DIC元件1234Note1.使用TD滑块控制卤素灯的光强.Note2.检查滤色片转盘的位置是否为“6.DICT”.如果不是,用手柄按下DICT图标.Note1显微镜镜下观察手控面板用此旋钮进行微分干涉法对比度的调节.66荧光观察123显微镜镜下观察Handswitch1.使用手控面板选择物镜.2.点击FV10-ASW软件中的图标.3.使用手控面板选择荧光滤色片.(参照Memo.)4.标本聚焦.Note2Notes1&3Note1.选择第3步后,显微镜进入荧光观察状态.注意此时汞灯的机械快门要打开.(建议通常机械快门要放在关闭的位置().)Note2.检查DIC滑块是否拉出.Memo关于荧光滤色片NIBA：蓝色激发/绿色荧光（例：FITC、EGFP等）WIG：绿色激发/红色荧光（例：Rhodamine、DsRed等）Note3.观察之前，检查汞灯的机械快门要放在开启的位置().77图像的拇指索引明场观察(显微镜镜下观察)荧光观察(显微镜镜下观察)染料选择光路图取图条件的保存调出取图条件TwinScanner设定取图的操作界面扫描的按钮选择XYZ,XYT或XYL每个通道的调节共聚焦的孔径大小卤素灯的光强调节Kalman方式图像显示窗口内存中所显示的文件扫描模式扫描速度像素数缩放和平移激光输出的调节Lambda扫描的设定物镜聚焦时间间隔和时间计数(用于XYT或XT扫描)λ扫描带宽选择88获取单张图像（XY平面）（荧光图像）例：绿色荧光染色（FITC）1.点击FV10-ASW软件中的按钮2.关闭汞灯快门.3.同时,点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)123染料选择后的显示界面如何取图(XY平面-单标)99Memo扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描)456[1]探测器的灵敏度调节(HV)[2]共聚焦的孔径大小调节(C.A.)[3]激光输出的调节(Laser)[1][2][3]调节方法(例:HV调节):点击滑块,HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述如何取图(XY平面-单标)4.点击XYRepeat按钮开始扫描.5.调节绿色(FITC)图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)6.点击Stop按钮停止扫描.(参照Memo.)101078910如何取图(XY平面-单标)7.选择AutoHV,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalmanaccumulation方式.更多的信息，参照附录2.)8.点击XY按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone按钮,“2DView-LiveImage(x)”2D界面就出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.)MemoFV10-ASW专用的图形格式OIF格式:创建“一个含(16-bitTIFF)的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.OIB格式:创建单个的OIF格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.1111123获取单张图像（XY平面）（荧光图像）例：绿色荧光（Alexa488）＋红色荧光（Alexa546）二重染色同步扫描如何取图(XY平面-双标)1.点击FV10-ASW软件中的按钮2.关闭汞灯快门.3.同时,点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)染料选择后的显示界面1212456如何取图(XY平面-双标)Memo扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描)[1]探测器的灵敏度调节(HV)[2]共聚焦的孔径大小调节(C.A.)[3]激光输出的调节(Laser)[1][2][3]调节方法(例:HV调节):点击滑块,HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述4.点击XYRepeat按钮开始扫描.5.调节绿色(AlexaFluor488)图像和红色(AlexaFluor546)图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)6.点击Stop按钮停止扫描.(参照Memo.)131378910如何取图(XY平面-双标)7.选择AutoHV,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalmanaccumulation方式.更多的信息，参照附录2.)8.点击XY按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone按钮,“2DView-LiveImage(x)”2D界面就出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.)MemoFV10-ASW专用的图形格式OIF格式:创建“一个含(16-bitTIFF)的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.OIB格式:创建单个的OIF格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.1414123获取单张图像（XY平面）（荧光图像）例：绿色荧光（Alexa488）＋红色荧光（Alexa546）二重染色序列扫描(这里介绍线序列扫描.)如何取图(XY平面-双标)1.点击FV10-ASW软件中的按钮2.关闭汞灯快门.3.同时,点击按钮4.关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)染料选择后的显示界面15154567如何取图(XY平面-双标)4.点击序列扫描,并选择线序列方式.5.点击XYRepeat按钮开始扫描.6.调节绿色(AlexaFluor488)图像和红色(AlexaFluor546)图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)7.点击Stop按钮停止扫描.(参照Memo.)[1]探测器的灵敏度调节(HV)[2]共聚焦的孔径大小调节(C.A.)[3]激光输出的调节(Laser)[1][2][3]调节方法(例:HV调节):点击滑块,HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述1616891011如何取图(XY平面-双标)8.选择AutoHV,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalmanaccumulation方式.更多的信息，参照附录2.)9.点击XY按钮取得一幅图像.10.点击SeriesDone按钮,“2DView-LiveImage(x)”2D界面就出现.11.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.)MemoFV10-ASW专用的图形格式OIF格式:创建“一个含(16-bitTIFF)的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.OIB格式:创建单个的OIF格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.17171234获取单张图像（XY平面）（荧光图像＋微分干涉）例：绿色荧光（FITC）+DIC图像如何取图(XY平面-单标+微分干涉差)1.点击FV10-ASW软件中的按钮关闭汞灯快门.同时,点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)2.4.选择TD1.染料选择后的显示界面1818567如何取图(XY平面-单标+微分干涉差)Memo扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描)[1]探测器的灵敏度调节(HV)[2]共聚焦的孔径大小调节(C.A.)[3]激光输出的调节(Laser)[1][2][3]调节方法(例:HV调节):点击滑块,HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述5.点击XYRepeat按钮开始扫描.6.调节绿色(FITC)图像和微分干涉差的图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)7.点击Stop按钮停止扫描.(参照Memo.)1919891011如何取图(XY平面-单标+微分干涉差)8.选择AutoHV,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalmanaccumulation方式.更多的信息，