基因工程的基本过程(2)

基因工程的基本过程享学课堂为什么要获得目的基因为什么要把目的基因与载体结合受体细胞是指什么为什么要进行检测基因工程的基本操作程序第一步：获取目的基因1.从基因文库中获取目的基因。方法：基因文库的构建模式图通过对受体菌的培养而储存基因第一步：获取目的基因1.从基因文库中获取目的基因。2.利用PCR技术合成DNA方法：PCR：聚合酶链式反应，是以DNA变性、复制的某些特性为原理设计的。前提条件是必须对目的基因有一定的了解，需要设计引物。PCR原理图PCR的过程(1)以DNA片段作模板，在90℃高温下，分开成为单链DNA。(2)以DNA小段寡聚核苷酸做引物，在50℃的温度下，找到可以配对的正链和负链，形成互补结合。(3)在70℃高温下，合成一条与模板DNA单链（正链或负链）互补结合的DNA新链。(4)以上三个步骤周而复始，即反应体系的温度从90℃-50℃-75℃，目的基因的量不断增加反应体系中经历：变性——淬火——合成——重复。结果：目的基因的量成指数形式扩增（2n)高温的作用是？引物是怎样获得的？四种脱氧核苷三磷酸（4XdNTP)酶高温DNA聚合酶（Taq酶），原料第一步：获取目的基因1.从基因文库中获取目的基因。2.利用PCR技术合成DNA3.mRNA差异显示法获得目的基因（反转录）方法：由mRNA反转录形成cDNA•mRNADNA单链•DNA单链RNA–DNA杂交分子•RNA–DNA杂交分子单链DNA•单链DNA双链DNA逆转录使RNA降解复制核酸酶H??形成氢键第一步：获取目的基因1.从基因文库中获取目的基因。2.利用PCR技术合成DNA3.mRNA差异显示法获得目的基因（反转录）4.采用DNA合成仪人工合成长度不是很大的DNA片段。5.用机械的方法，如超声波把打成片段。方法：原核生物基因表达的调控阻抑物与乳糖结合后构象发生了改变，因而不能与操纵基因结合，使得结构基因进行转录。乳糖代谢基因表达调控图解：(有乳糖时)第二步：基因表达载体的构建核心目的基因与载体结合成为重组基因需要哪两种工具总结：表达载体需由哪几部分组成•复制原点•启动子•目的基因•终止子•标记基因它们的作用是？第三步：将目的基因导入受体细胞将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入微生物细胞什么叫转化常用的转化方法有哪些？具体过程？第四步：目的基因的检测与鉴定首先：其次：最后：还要：检测与鉴定哪些环节具体方法？DNA分子杂交技术基因探针：核酸分子探针是指特定的已知核酸片段，能与互补核酸序列杂交，用于对待测核酸样品中特定基因顺序的探测。满足：（1）必须是单链（2）带有容易被检测出来的标记物。编码区上游编码区下游RNA聚合酶结合位点RNA聚合酶结合位点编码蛋白质调控调控原核细胞真核细胞1.3基因工程的应用转基因生物目的基因目的基因来源抗虫植物Bt毒蛋白基因苏云金芽胞杆菌（如：抗虫棉）蛋白酶抑制剂基因植物淀粉酶抑制剂基因植物凝集素基因抗病植物病毒外壳蛋白基因（如：转基因烟草）病毒的复制酶基因几丁质酶基因请继续把表格完成1.3基因工程的应用抗逆转基因植物抗冻蛋白基因鱼抗除草剂基因转基因玉米富含赖氨酸的蛋白质编码基因转基因延熟番茄控制番茄果实成熟的基因转基因矮牵牛植物花青素代谢有关的基因转基因鲤鱼外源生长激素基因人转基因牛肠乳糖酶基因人转基因牛（羊）抗凝血酶基因、血清白蛋白基因、生长激素基因、a-抗胰蛋白酶转基因烟草发光基因萤火虫1.3基因工程的应用工程菌细胞因子、抗体、疫苗、激素、白细胞介素-2、干扰素、乙肝疫苗基因治疗腺苷酸脱氨酶基因功能正常的基因反义基因自杀基因器官移植的供体动物被导入某种调节因子的器官供体基因组谢谢