DB21 2394-2014 食品安全地方标准 鸡肝和鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺的检测 超高效液相色谱

DB21辽宁省地方标准DB21/2394-2014食品安全地方标准鸡肝和鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺的检测超高效液相色谱串联质谱法2014-12-29发布2015-06-29实施辽宁省卫生和计划生育委员会发布DB21/2394-2014前言本标准由辽宁省卫生和计划生育委员会发布。本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心。本标准主要起草人：张秀芹、何为、杜柏林、刘雪红、刘笑、苗翠、徐丽佳、张天姝、韩春晓、李云龙、杨慧杰。DB21/2394-2014辽宁省食品安全地方标准鸡肝和鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺的检测超高效液相色谱串联质谱法1范围本标准规定了鸡肝、鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺残留量的超高效液相色谱串联质谱检测方法。本标准适用于鸡肝、鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺残留量的检测。2原理试样中的金刚烷胺和金刚乙胺，采用1%三氯乙酸和甲醇混合溶液提取，混合型阳离子交换回相萃取（MCX）小柱净化，采用液相色谱串联质谱仪测定，基质添加外标法定量。3试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1金刚烷胺、金刚乙胺对照品纯度≥99.0%。3.1.2甲醇(色谱纯)3.1.3盐酸3.1.4氨水3.1.5异丙醇3.1.6三氯乙酸3.2试剂配制3.2.11%三氯乙酸：取1g三氯乙酸加入100mL水，完全溶解。3.2.2提取液：1%三氯乙酸+甲醇，以体积比1：1混匀。3.2.3洗脱液：氨水：甲醇：异丙醇（V:V:V）＝5：90：5。3.2.4复溶液：甲醇：水：甲酸(V:V:V)＝10：90：0.2。3.2.52%盐酸水溶液：取2mL盐酸加入98mL的水中，混匀。3.2.6高纯氮气：纯度99.99%。3.2.7高纯氩气：纯度99.99%。3.3标准品3.3.1金刚烷胺对照品纯度≥99.0%。3.3.2金刚乙胺对照品纯度≥99.0%。3.4标准溶液配制DB21/2394-20143.4.1金刚烷胺、金刚乙胺标准贮备液(100.0μg/mL):取标准品各10mg，用甲醇溶解并定容至100mL。贮存于－20℃冰箱中，有效期30天。3.4.2金刚烷胺、金刚乙胺工作液配制：工作液用甲醇稀释，现用现配，上机用标准品浓度根据样品浓度配制。4仪器和设备4.1离心机：高速低温离心机，离心转速10000rpm/min。4.2分析天平：感量0.01g和感量0.00001g。4.3移液器及配套枪头：单道10µL～1000µL。4.4绞肉机。4.5超声波发生器。4.6涡旋振荡器。4.7液相色谱－串联质谱仪：配有电喷雾电离源。4.8SPE小柱：WatersOasisMCX（60mg/3mL）。4.91mL注射器。4.100.22µm水性滤膜。5分析步骤5.1试样的制备取新鲜鸡肉、鸡肝脏组织，去除脂肪和筋膜后，分别绞碎并均质，－20℃贮存备用。5.2仪器参考条件5.2.1色谱条件色谱柱：C18柱，50×2.1mm,1.7um.流动相：A相:0.2%甲酸水溶液B相：甲醇柱温:30℃。进样量：5μL洗脱程序见表1。DB21/2394-2014表1洗脱程序时间min流速(mL/min)A相%B相%――0.3901010.320803.10.320803.20.390104.00.390105.2.2质谱条件离子源：电喷雾离子源电离方式：正离子电离ESI+。监测模式：MRM毛细管电压：3.5KV脱溶剂温度：350℃脱溶剂气流量：600L/H锥孔气流量：50L/H质谱采集参数见表2。表2金刚烷胺、金刚乙胺质谱采集参数化合物母离子（m/z）子离子（m/z）锥孔电压(V)碰撞能量(eV)金刚烷胺（amantadine）152.0152.0＞135.03628152.0＞92.93618金刚乙胺（Rimantadine）180.0180.0＞163.03628180.0＞80.936285.3标准曲线配制取空白样品6份，每份约2.00g，加入适量的标准品，制备成含金刚烷胺1.0ng/g、3ng/g、5ng/g、10ng/g、30ng/g和50ng/g，含金刚乙胺0.2ng/g、0.5ng/g、1.0ng/g、5.0ng/g、20ng/g和50ng/g的样品，按照5.1进行前处理，得到标准添加曲线。5.4试样溶液制备及测定称取样品2.00g（精确至0.01g）于50mL离心管中，组织样品加入10mL的提取液，先涡旋30s，使样品与提取液混合均匀，然后超声30min。4℃低温离心，7000rpm/min离心10min，上清液待用。ＭＣＸ小柱在净化之前分别用3mL甲醇和3mL水进行活化，取5mL提取液过柱，再依次用3mL2%盐酸和3mL甲醇淋洗，流速每分钟不超过1mL。取5mL洗脱液进行洗脱，50℃水浴氮气吹干。取1mLDB21/2394-2014复溶液进行溶解。用0.22µm水膜过滤，上机。平行测定次数不少于两次。6分析结果表述样品中金刚烷胺、金刚乙胺的含量以微克每千克计，按以下公式计算：X(μg/kg)=MAsfVCAi………………………………(1)式中：Ai－样品的峰面积；C－标准溶液浓度（ng/mL）；V－定容体积（mL）；f－样品稀释倍数；As－标液峰面积；M－样品质量（g）。7偏差在同一实验室由同一操作人员完成的两个平行测定的相对偏差不大于15%。8其他8.1定性每种被测组分选择1个母离子、2个以上子离子，在仪器最佳工作条件下，以保留时间和离子比率相结合进行定性。样品图谱中各组分定性离子的相对离子丰度与浓度接近的对照品工作液中对应的定性离子的相对离子丰度进行比较，若偏差不超过规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。相对离子丰度偏差范围见表3。表3相对离子丰度偏差范围相对丰度%允许偏差%＞50±2020～50±2510～20±30≤10±508.2定量取同种基质的空白样品，加入适当浓度的标准溶液，按样品测定步骤进行操作，吹干后加入1mL复溶液溶解残留物，此为标准品溶液，用单点或曲线对样品进行定量，试样溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。如果样品中含有待测物质，建议用单个标准品进行定量。DB21/2394-2014100空白吸光度值萃取液吸光度值）标准吸光度值（或试样8.3检出限和定量限本标准金刚烷胺检测限为0.5μg/kg,定量限为1.0μg/kg。金刚乙胺检测限为0.2μg/kg，定量限为0.5μg/kg。DB21/2394-2014附录A图1：金刚烷胺和金刚乙胺的总离子流色谱图（2.72min为金刚烷胺，3.06min为金刚乙胺）图2：金刚烷胺和金刚乙胺的选择离子流色谱图（2.72min为金刚烷胺，3.06min为金刚乙胺）