DB34T 2406-2015 大米中17种农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.040C53DB34安徽省地方标准DB34/T2406—2015大米中17种农药残留量的测定液相色谱-串联质谱法Determinationof17pesticidesresiduesinricebyliquidchromatographytandemmassspectrometry文稿版次选择2015-07-14发布2015-08-14实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T2406—2015I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、农业部农产品质量安全风险评估实验室（合肥）、安徽科威农药重金属残留检测中心。本标准起草人：高同春、孙明娜、段劲生、王梅、董旭、肖青青、褚玥、杨通。DB34/T2406—20151大米中17种农药残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了大米中多菌灵等17种农药（参见附录A和附录D）残留量的液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于大米中多菌灵、吡虫啉、三环唑、氯虫苯甲酰胺、稻瘟灵、戊唑醇、咪鲜胺、苯醚甲环唑、阿维菌素、吡蚜酮、丙环唑、丙溴磷、井冈霉素A、肟菌酯、噻呋酰胺、噻嗪酮、烯啶虫胺残留量的测定。方法的检出限为0.001～0.05mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样用乙腈提取，提取液经氮吹浓缩后，经固相萃取柱净化，将净化液吹至近干后用流动相定容，液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）定性确证和定量检测，外标法定量。4试剂与材料4.1水为GB/T6682规定的一级水。4.2甲苯：分析纯。4.3乙腈：色谱纯。4.4甲醇（色谱纯）4.5乙腈+甲苯：（3+1，体积比）。4.65mmol/L5mM乙酸铵+0.01％甲酸溶液：称取0.375g乙酸铵加800mL水的水中配成浓度为的乙酸铵溶液，再加入0.2mL甲酸（4.7）后，过0.22μm水相滤膜。4.70.22μm微孔过滤膜。4.8固相萃取柱或相当者（氨基填料，500mg/3mL）。4.9农药标准品（纯度≥95％）。4.10标准储备溶液：DB34/T2406—20152分别称取17种农药标准品，用乙腈配制成1000mg/L的上述17种农药的各自标准储备溶液，于0～4℃下避光保存，有效期3个月。4.11基质混合标准工作溶液：将17种标准储备液用空白样品基质溶液配制成不同浓度的基质混合标准工作溶液，待用。基质标准工作液现配现用。5仪器和设备5.1液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。5.2万分之一分析天平。5.3匀浆仪。5.4离心机，转速不低于3000r/min。5.5氮吹仪。5.6固相萃取真空装置。5.7移液器。6分析步骤6.1试样的制备与贮藏将不少于1000g大米（已脱壳）混匀，四分法取样，放入食品加工机粉碎，过20目筛，制成试样，放入试样瓶中密封，做上标记，并置于-20℃条件下保存，待测。6.2提取称取试样3.0g（精确至0.01g）,加入5mL水，30mL乙腈，匀浆2min,加入5.0g氯化钠，离心5min（5000转/分），取上清夜15mL，浓缩至约1mL,待净化。6.3净化固相萃取柱先用4mL乙腈+甲苯（3:1，V:V）预淋，当液面达到硫酸钠顶部时，迅速将试样浓缩液转入柱上，更换收集瓶收集，再用乙腈+甲苯（3:1，V:V）3次洗涤试样瓶，每次2mL，用25mL乙腈+甲苯（3:1，V:V）洗脱，45℃浓缩至近干，氮气吹干，1.5mLLCMS流动相定容，过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。6.4测定条件6.4.1液相色谱条件a)色谱柱：XR-C18，2.2μm,150mm×2.0mm(内径)或相当者；b)流动相：A：含5mmol/L的乙酸铵和0.02％甲酸的水溶液；B液：甲醇；流动相梯度洗脱条件见表1；c)流速：400μL/min；d)柱温：40℃；e)进样量：5μL。DB34/T2406—20153表1流动相梯度洗脱程序时间min流速mL/min流动相A（含5mmol/L的乙酸铵和0.02％甲酸的水）％流动相B（甲醇）％10.4901040.45050200.42575220.4595250.4595260.49010300.490106.4.2质谱条件a)离子源：电喷雾离子源（ESI），450℃；b)扫描方式：正负离子扫描；c)检测方式：多反应监测（MRM）；d)干燥气温度：250℃；e)干燥气流速：20L/min；f)雾化器流速：3.0L/min；g)离子源接口电压：ESI+，+4.5kV；ESI-，-3.5kVh)17种农药监测离子对、保留时间、碰撞电压及碰撞能量参见附录B。6.5液相色谱-质谱/质谱测定6.5.1定性测定在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰度50％,允许±20％偏差；相对丰度20～50％,允许±25％偏差；相对丰度10～20％,允许±30％偏差；相对丰度≤10％,允许±50％偏差）。6.5.2定量测定本方法采用外标校准曲线法单离子定量测定。为了减少基质对定量测定的影响，需用空白样液来制备所使用的一系列基质标准工作溶液，用基质标准工作溶液按浓度由小到大的顺序，分别进样来绘制标准曲线。并且保证所测试样中农药的响应值均在仪器的线性范围内。混合基质标准溶液的液相色谱质谱/质谱多反应监测（MRM）色谱图参见附录C。6.6平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行测定。6.7空白实验除不称取试样外，均按上述步骤测定。DB34/T2406—201547结果计算7.1标准曲线使用基质标准工作溶液进样，绘制基质标准工作曲线。待测物残留的响应值应在检测方法的线性范围之内。7.2结果计算和表述试样中17种农药的残留量按公式（1）计算：10001000mVcXii..................................(1)式中：X——试样中被测组分的残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；C——从标准曲线上得到的被测组分溶液质量浓度，单位为纳克每毫升（μg/mL）；V——试样定容体积，单位为毫升（mL）；m——试样溶液所代表试样的重量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值。8方法准确度和精密度8.1准确度本方法在1.0μg/kg～50.0μg/kg间添加浓度的回收率在77％～102％之间。8.2精密度本标准精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，获得重复性和再现性的值是以95％的可信度来计算，本标准方法的精密度数据参加附录D。DB34/T2406—20155AA附录A（资料性附录）17种农药中英文名称、方法检出限表A.117种农药中英文名称、方法检出限序号中文名称英文名称分子量检出限（μg/kg）1多菌灵carbendazim191.212吡虫啉imidacloprid225.6103三环唑tricyclazole189.254氯虫苯甲酰胺chloantraniliprole483.115稻瘟灵isoprothiolane290.3106戊唑醇tebuconazole307.857咪鲜胺prochloraz376.7108苯醚甲环唑difenoconazole406.2109噻嗪酮buprofezin305.4110阿维菌素abamectin887.13011吡蚜酮pymetrozine217.3512丙环唑propiconazole342.21013丙溴磷profenofos373.61014井冈霉素Avalidamycin497.55015肟菌酯trifloxystrobin408.3116噻呋酰胺thifluzamide528.1517烯啶虫胺nitenpyram270.75DB34/T2406—20156BB附录B（资料性附录）17种农药监测离子对、保留时间、碰撞电压及碰撞能量表B.117种农药监测离子对、保留时间、碰撞电压及碰撞能量序号名称保留时间ESI模式定量离子定性离子碰撞电压1(V)碰撞能量碰撞电压2(V)1多菌灵5.46+192.1/160.1192.1/160.1;192.1/132.130;3017;3030;242吡虫啉4.91+256.1/175.1256.1/175.1;256.1/209.116;1617;1530;203三环唑6.00+190.0/163.0190.0/163.0;190.0/136.021;2121;2630;244氯虫苯甲酰胺11.67+484.0/452.9484.0/452.9;484.0/285.824;2419;1630;305稻瘟灵3.97+291.1/231.1291.1/231.1;291.1/189.114;1411;2125;206戊唑醇8.51+308.1/70.1308.1/70.1;308.1/125.022;2222;3827;237咪鲜胺9.84+376.0/308.0376.0/308.0;376.0/266.019;1911;1721;298苯醚甲环唑21.10;21.29+406.1/251.0406.1/251.0;406.1/337.030;3025;1727;249噻嗪酮22.48+306.1/201.1306.1/201.1;306.1/116.130;3011;1622;1210阿维菌素23.86+890.5/305.2890.5/305.2;890.5/567.324;2426;1530;4111吡蚜酮4.15+256.1/175.1256.1/175.1;256.1/209.111;1120;4513;1512丙环唑18.88;19.08+342.3/159.1342.3/159.1;342.3/205.110;1330;2014;1213丙溴磷22.06+373.1/302.8373.1/302.8;373.1/345.019;1915;2015;2614井冈霉素A0.62+498.2/178.0498.2/178.0;498.2/336.119;2025;2523;2015肟菌酯21.65+409.3/186.0409.3/186.0;409.3/145.030;3020;4516;1216噻呋酰胺16.96-526.9/166.0526.9/166.0;526.9/359.8520;2025;2019;3017烯啶虫胺3.97+271.2/224.1271.2/224.1;271.2/237.114;1415;2020;20DB34/T2406—20157CC附录C（资料性附录）空白基质17种农药标准试样多反应监测（MRM）色谱图（50μg/L）4.755.005.255.505.756.006.2501000002000003000004000005000006000007000008000009000001000000192.10160.10(+)多菌灵/5.4654.254.504.755.005.255.500250005000075000100000125000256.10209.10(+)吡虫啉/4.9111.多菌灵2.吡虫啉(carbendazim)(imidacloprid)5.255.505.756.006.256.506.75050000100000150000200000250000300000190.00136.00(