DB34T 1032-2009 饲料中林可霉素的测定-高效液相色谱法

DB34安徽省地方标准DB34/T1032—2009饲料中林可霉素的测定-高效液相色谱法2009-10-21发布2009-10-21实施安徽省质量技术监督局发布食品伙伴网—2009前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准起草人：明文庆、许世富、刘发全、丁在亮、汤春莲、陈文帮、张莉、刘红云、蔡东东。本标准首次发布。食品伙伴网—2009饲料中林可霉素的测定-高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中林可霉素的测定--高效液相色谱法。本标准适用于饲料中林可霉素的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法3试样的制备按GB/T14699.1采样，选取有代表性的饲料样品至少500ｇ，四分法缩减至100ｇ，经粉碎，全部过1ｍｍ孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。4方法原理试样中的林可霉素加入超纯水超声提取30min，过滤。滤液再过0.45μm的滤膜，以乙腈-水-三乙胺(10∶90∶0.3，磷酸调pH值至3.5)为流动相，流速为1mL／min，波长214nm。用高效液相色谱仪(带紫外检测器)测定。5试剂与材料5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。5.2林可霉素对照品纯度≥98.0%。5.3乙腈(色谱纯)。5.4三乙胺。5.5林可霉素标准贮备液（0.5mg/mL）：准确称取25mg林可霉素对照品，用超纯水溶解并稀释至50mL量瓶中，贮存于0℃～8℃冰箱中，有效期30d。5.6林可霉素标准工作液：分别吸取林可霉素标准贮备液0.02mL、0.04mL、0.1mL、0.2mL、1mL、2mL于10mL棕色容量瓶中，用超纯水定容，标准工作液系列浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL，4℃保存，有效期7d。6仪器与设备6.1分析天平，感量0.00001g和感量0.01g。6.2超声波发生器。6.3高效液相色谱仪(配紫外检测器)。6.4涡旋混合器。6.5饲料粉碎机。6.6振荡摇床。食品伙伴网—20097分析步骤7.1试样提取称取样品10±0.05g，加入50mL超纯水超声提取30min，过滤。滤液再过0.45μm的滤膜，滤液上HPLC分析。7.2色谱条件色谱柱：C18(5μm，4.6×150mm)；检测波长：214nm；流动相：乙腈-水-三乙胺(10∶90∶0.3)，磷酸调pH值至3.5；流速：1.0mL/min；进样体积：20μL。7.3定量测定林可霉素标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积进行计算。8结果计算8.1计算公式结果按下式计算：X=1000mAs1000VACs×××××…………………………………………………………………（1）式中：X——样品中林可霉素含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；Cs——林可霉素对照品的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；A——供试品溶液峰面积；As——对照品溶液峰面积；V——加入提取液体积，单位为毫升（mL）；M——试样质量，单位为克（g）。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度本方法林可霉素的检出限为5.0mg/kg。9.2准确度本方法回收率均为80％～110％。9.3精密度本方法的批内变异系数CV≤10％，批间变异系数CV≤15％。食品伙伴网—2009附录A（资料性附录）色谱图A.1林可霉素对照溶液色谱图图A.1林可霉素对照溶液色谱图A.2样品中添加林可霉素色谱图注：1——林可霉素图A.2样品中添加林可霉素色谱图食品伙伴网