DB34 T 818-2008 饲料中盐酸克伦特罗的测定-胶体金免疫层析法

ICSDB34备案号：安徽省地方标准DB34/T818—2008饲料中盐酸克伦特罗的测定——胶体金免疫层析法2008-08-01发布2008-08-01实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T818—2008I前言本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省质量技术监督局批准。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。本标准起草人：许世富、蔡东东、汤春莲、明文庆。本标准于2008年8月1日首次发布。DB34/T818—20081饲料中盐酸克伦特罗的测定——胶体金免疫层析法1范围本标准规定了用胶体金免疫层析法检测饲料中的盐酸克伦特罗。本标准适用于饲料中盐酸克伦特罗的快速检测。本标准检测限为10µg/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理本试验为竞争抑制法。将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移。在移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗－BSA偶联物的结合，使检测线不显颜色，结果为阳牲；反之，检测线显红色，结果为阴性。4试剂和材料除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。4.1胶体金免疫层析快速检测装置组成4.1.1盐酸克伦特罗全抗原的偶联率为1：10～1：20（BSA：CL）。4.1.2抗盐酸克伦特罗抗体、多抗或单杭。多抗可以由兔或羊血清获得，效价应大于5000（间接ELISA法），或有效抗体含量应大于0.05mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。单抗由鼠腹水获得，效价应大于15000（间接ELISA法），或有效扰体含量应大于0.5mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。抗体相对亲和力为3.56×109（结合率下降50％时，相对应的抗体浓度的例数）。4.1.3样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。4.1.4金释放垫：玻璃纤维片，免疫金释放时间小于5min，释放效率大于80％。4.1.5NC膜：孔径为0.45μm，4cm毛细管时间不小于140s。4.1.6吸水纸。4.1.7底板。4.1.8塑料盒。4.2塑料吸管。4.3离心机。4.4提取液。4.5阴性对照取空白样品依法制备。DB34/T818—200824.6阳性对照取盐酸克伦特罗标准溶液用甲醇稀释为10µg/L。5实验步骤5.1样品制备取饲料约0.5g，装入1.5mL离心管，加提取液1mL，浸泡5min～10min，搅动2次，4000rpm离心5min～10min，取上清液。5.2溶液制备5.2.1盐酸克伦特罗储备液准确称取盐酸克伦特罗对照品适量，用甲醇溶解后稀释成1mg/mL的储备液，－18℃冰箱中贮存备用。5.2.2盐酸克伦特罗标准溶液取盐酸克伦特罗系列储备液，用前用甲醇稀释。5.3样品检测5.3.1从包装袋中取出盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测装置，置于平整的台面上待测。检测装置应即开即用。5.3.2用塑料吸管（4.2）垂直滴加3滴无气泡上清液（约60μL～80μL）于加样孔内，每批需做阴性对照和阳性对照各一孔，加样方法同样本。5.3.3加样后5min～10min内观察结果。6结果判断6.1方法确认阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说明检测装置有效，可进行检测；如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带，出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测装置失效，不能进行检测。6.2测定结果待检样品出现红色条带为阴性（不含盐酸克伦特罗或盐酸克伦特罗的含量＜10μg/kg）；待检样品不出现红色条带为阳性（盐酸克伦特罗的含量≥10μg/kg）。7结果确认阳性样品应用气相色谱－质谱法（GC/MS）方法进行确认。