DB11-T 379-2006 豆芽中4-氯苯氧乙酸钠 6-苄基腺嘌呤 2,4-滴 赤霉素 福美双的

ICS67.080.20B31备案号：19170-2006北京市地方标准DBDB11/T379—2006豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定Determinationof4-chlorphenoxyaceticsodium,6-benzylaminopurine,2,4-D,gibberellicacidandthiramresiduesinsoybeansproutandmungbeansprout2006-07-25发布2006-09-01实施北京市质量技术监督局发布DB11/T379—2006I目次前言................................................................................II1范围...................................................................................124-氯苯氧乙酸钠残留量的测定.............................................................136-苄基腺嘌呤残留量的测定...............................................................342,4-滴（2,4-二氯苯氧乙酸）残留量的测定.................................................55赤霉素残留量的测定.....................................................................76福美双残留量的测定.....................................................................9DB11/T379—2006II前言本标准由通州区质量技术监督局提出。本标准起草单位：北京市海淀区产品质量监督检验所（国家食品质量安全监督检验中心）。本标准主要起草人：曹红、金瑛、刘艳琴、许华、王浩、田艳玲、林立。DB11/T379—20061豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定1范围本标准规定了豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定方法。本标准适用于豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的残留量分析。24-氯苯氧乙酸钠残留量的测定2.1原理试样中的4-氯苯氧乙酸钠用稀碱提取后，在酸性条件下用固相萃取柱将样品中的4-氯苯氧乙酸吸附，使其与基体干扰物分离，再用甲醇洗脱并用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法峰面积定量。2.2试剂与材料2.2.1氢氧化钠（AR）。2.2.2盐酸（AR）。2.2.3磷酸（AR）。2.2.4冰醋酸（AR）。2.2.5甲醇（HPLC）。2.2.6氢氧化钠溶液（0.01mol/L）：称取0.40g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000mL。2.2.7亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]溶于少量水中，并用水稀释至100mL。2.2.8乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌[Zn(CH3COO)2]溶于少量水中，然后加入3mL冰醋酸并加水稀释至100mL。2.2.9磷酸盐缓冲液（0.01mol/L）：称取1.56g的磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）加水溶解，并定容至1000mL，用50%的磷酸溶液调节pH值至4.0。2.2.104-氯苯氧乙酸标准溶液：精密称取4-氯苯氧乙酸（含量≥99%）0.1g(精确到0.0001g)，用甲醇溶解并移入100mL容量瓶中，稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.00mg4-氯苯氧乙酸。临用时甲醇稀释浓度为每毫升相当于0.10mg4-氯苯氧乙酸。2.2.11固相萃取小柱（3mL/500mg）：ODS-C18小柱，用时先经10mL甲醇洗脱活化，再用10mL水洗去残留甲醇，保持萃取柱润湿状态待用。2.2.12本标准所用水为经纯水制备系统制备后的水。2.3仪器与设备2.3.1高效液相色谱仪（带紫外检测器，配ZORBAXSBC18色谱柱）。2.3.2超声波仪。2.3.3酸度计。2.3.4组织捣碎机。2.3.5Milli-Q纯水制备系统。2.4分析步骤2.4.1试样制备称取捣碎混匀的豆芽样品20g（精确至0.1g）于100mL容量瓶中，加入40ml氢氧化钠溶液振摇，然后分别加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液各5mL，混匀，超声提取30min，用氢氧化钠溶液稀释至DB11/T379—20062刻度，过滤。取50.0mL的滤液，用浓磷酸调pH至2.5，然后以3mL/min的流速通过活化的ODS-C18小柱。先用3.0mL水洗去水溶性杂质后，再用甲醇洗脱并定容至3.0mL，过0.45μm滤膜后，供液相色谱分析。2.4.2标准曲线的制备准确吸取每毫升相当于0.10mg的4-氯苯氧乙酸0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL于100mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。制成浓度依次为0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、4.00mg/L的标准使用液，供液相色谱分析。2.4.3色谱条件色谱柱：ZORBAXSBC18柱（4.6mm×250mm×5μm）（或相当型号色谱柱）。检测波长：228nm。流动相：甲醇+0.01mol/L磷酸盐缓冲液（50+50）(V/V)。流速：1.0mL/min。柱温：30℃。2.4.4测定吸取10.0μL标准使用液和试样液分别注入液相色谱仪，按照2.4.3项条件进行检测，以保留时间定性，标准曲线法定量。标样及试样图谱见图1及图2。2.5计算按式（1）计算。12.110001000××××=mfAX…………………………………………………………………………（1）式中：X—试样中4-氯苯氧乙酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A—从标准曲线上求出的试样液中4-氯苯氧乙酸的质量，单位为微克（μg）；f—试样的稀释倍数；m—试样的取样量，单位为克（g）；1.12—4-氯苯氧乙酸转换为4-氯苯氧乙酸钠的系数。计算结果保留两位有效数字。2.6精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。2.7检测限在本试验条件下，豆芽中4-氯苯氧乙酸钠的定量检测限为0.10mg/kg。图14－氯苯氧乙酸标样色谱图DB11/T379—20063图2豆芽样品中4－氯苯氧乙酸色谱图36-苄基腺嘌呤残留量的测定3.1原理豆芽中残留的6-苄基腺嘌呤经酸化甲醇提取后，高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法峰面积定量。3.2试剂与材料3.2.1乙酸（AR)。3.2.21%乙酸溶液。3.2.3乙腈（HPLC）。3.2.4甲醇（HPLC）。3.2.5酸化甲醇溶液：每100mL甲醇+水（60+40）(V/V)中加入乙酸50μL，混匀。3.2.66-苄基腺嘌呤标准溶液：精密称取6-苄基腺嘌呤0.1g（精确到0.0001g）（含量≥99.0%）于100mL容量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度。此溶液每毫升相当于1.00mg6-苄基腺嘌呤。临用时用甲醇稀释浓度为每毫升相当于0.010mg6-苄基腺嘌呤。3.2.7固相萃取小柱（3mL/500mg）：ODS-C18小柱，用时先经10mL甲醇洗脱活化，再用10mL水洗去残留甲醇，保持萃取柱润湿状态待用。3.2.8本标准所用水为经纯水制备系统制备后的水。3.3仪器与设备3.3.1高效液相色谱仪（带紫外检测器，配ZORBAXSBC18色谱柱）。3.3.2Ultra-Turrax搅拌器。3.3.3离心机（4500r/min）。3.3.4旋转蒸发仪。3.3.5组织捣碎机。3.3.6Milli-Q纯水制备系统。3.4分析步骤3.4.1试样制备称取捣碎混匀的豆芽样品10g（精确至0.1g）于50mL聚丙烯离心管中，加入15mL酸化甲醇溶液，用Ultra-Turrax搅拌器混匀3min,然后以4500r/min离心10min，上清液转入100mL梨形瓶中，样品再用15mL酸化甲醇溶液提取，再次离心，合并上清液。上清液用旋转蒸发仪蒸发，以去除甲醇，剩余水相以3mL/min的流速通过活化的ODS-C18小柱，先用3.0mL水洗去水溶性杂质后，再用甲醇洗脱并定容至5.0mL，过0.2μm有机膜滤过后，供液相色谱分析。3.4.2标准溶液系列的配制准确吸取每毫升相当于0.010mg的6-苄基腺嘌呤0mL、0.20mL、0.40mL、0.80mL、1.0mL、DB11/T379—200642.0mL、5.0mL于25mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。配制成浓度依次为0mg/L、0.08mg/L、0.16mg/L、0.32mg/L、0.40mg/L、0.80mg/L、2.00mg/L的标准溶液系列，供液相色谱分析。3.4.3色谱条件色谱柱：ZORBAXSBC18柱（4.6mm×250mm×5μm）（或相当型号色谱柱）。检测波长：267nm。流动相：甲醇+乙腈+1%乙酸溶液（60+5+35）(V/V)。流速：1.0mL/min。柱温：30℃。3.4.4测定准确吸取10.0μL标准系列溶液和试样溶液分别注入液相色谱仪中，按照3.4.3条件进行检测，以保留时间定性，峰面积外标法定量。标样及试样图谱见图3及图4。3.5计算按式（2）计算。10001000×××=mfAX……………………………………………………………………………………（2）式中：X—试样中6-苄基腺嘌呤的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A—从标准曲线上求出的试样溶液中6-苄基腺嘌呤的质量，单位为微克（μg）；f—试样的稀释倍数；m—试样的取样量，单位为克（g）；计算结果保留两位有效数字。3.6精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。3.7检测限在本试验条件下，豆芽中6-苄基腺嘌呤的定量检测限为0.02mg/kg。min01234567mAU01020304050604.1616-benzylaminopurine图36－苄基腺嘌呤标样色谱图DB11/T379—20065min01234567mAU0204060801001201406-benzylaminopurine图4豆芽样品中6－苄基腺嘌呤色谱图42,4-滴（2,4-二氯苯氧乙酸）残留量的测定4.1原理试样中2,4-滴用有机溶剂提取，用三氟化硼甲醇溶液将2,4-滴衍生成2,4-滴甲酯，液-液萃取，凝胶渗透色谱净化除去干扰物质，以气相色谱电子捕获检测器测定。根据色谱峰保留时间定性，外标法峰面积定量。4.2试剂与材料4.2.1乙腈（AR）。4.2.2甲醇（AR）。4.2.3正己烷（AR）。4.2.4环己烷（AR）。4.2.5乙酸乙酯（AR）。4.2.6pH2的酸性水溶液：用50％稀硫酸调节水的pH为2。4.2.7氯化钠（AR）。4.2.850g/L氯化钠溶液。4.2.9无水硫酸钠：650℃灼烧4h后,保存于干燥器中。4.2.10三氟化硼乙醚溶液：47％(V/V)。4.2.11衍生剂(14％三氟化硼甲醇溶液)：量取29.5mL三氟化硼乙醚溶液，用甲醇定容至100mL。4.2.122,4-滴标准使用液：精密吸取1mL2,4-滴的甲醇标准溶液（浓度100μg/L），用甲醇溶解并定容至100mL。此溶液浓度为每毫升相当于1.00μg2,4-滴。4.2.13本标准所用水除另有规定外，均为蒸馏水。4.3仪器与设备4.3.1气相色谱仪：配有电子捕获检测器。4.3.2凝胶渗透色谱净化系统。4.3.3组织捣碎机。4.3.4恒温水浴锅。4.3.5旋转蒸发器。4.3.6电动振荡器。4.3.7顶空分析用20mL玻璃瓶，配套的铝盖和密封垫（或密封紧密的密封瓶）。4.4分析步骤4.4.1提取称取捣碎混匀的豆芽样品50