荧光探针汇总

——仅供参考1.Fluo-3AM（钙离子荧光探针）原理Fluo-3AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3AM的荧光非常弱，进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内，和细胞内游离的钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光。生理意义细胞内钙离子增多是细胞损伤的结果，因此此探针能表征细胞损伤程度激发波长506nm发射波长526nm（绿色）备注推荐使用2.Mag-fura-2AM（钙离子荧光探针）原理Fura-2AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura-2?AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura-2，从而被滞留在细胞内。Fura-2可以和钙离子结合，结合钙离子后在330-350nm激发光下可以产生较强的荧光，而在380nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340nm和380nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度，可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，荧光探针的渗漏，细胞厚度差异等一些误差因素。生理意义细胞内钙离子增多是细胞损伤的结果，因此此探针能表征细胞损伤程度激发波长为340nm和380nm发射波长510nm（蓝色）备注仪器滤光片不适用3Fluo-4-AM（钙离子荧光探针）原理Fluo4是一种将Fluo3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl替换成了电子吸引力更强的F，它的最大激发波长会向短波长处偏离10nm左右。所以用氩激光器激发时，Fluo4的荧光强度比Fluo3强1倍。由于Fluo4与钙离子的亲和力和Fluo3近似，所以使用上和Fluo3也基本相同生理意义细胞内钙离子增多是细胞损伤的结果，因此此探针能表征细胞损伤程度激发波长494nm发射波长516nm（绿色）备注用激光器激发时荧光强度强，因此不推荐4.DCFH-DA（活性氧荧光探针）原理DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。生理意义检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度激发波长485nm发射波长520nm（绿色）备注推荐使用5.DHR123（活性氧荧光探针）原理本身无荧光,在超氧化酶存在时可被过氧化氢(H2O2)氧化,转变成发射绿色荧光的罗丹明123(Rhodamine123),因此广泛应用于检测细胞内活性氧(ROS),如过氧化物,次氯酸和过氧亚硝基阴离子等。生理意义检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度激发波长507nm发射波长529nm（绿色）备注氧化后成罗丹明123，荧光强度可能受到线粒体膜电位的影响6.RhodamineI23（线粒体膜电位荧光探针）原理细胞膜通透的阴离子绿色荧光染料,能够迅速被活线粒体摄取,而无细胞毒性。生理意义标记线粒体膜电位激发波长488nm发射波长515~575nm（绿色）生理意义检测线粒体膜电位备注正在使用7.Hoechst33342（DNA荧光探针）原理Hoechst33342是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测。Hoechst染料可透过细胞膜在聚AT序列的富集区域的小沟处与DNA结合并对DNA染色而发出强烈的蓝色荧光。——仅供参考生理意义标记双链DNA激发波长355nm发射波长465nm（蓝色）备注正在使用8.FDA原理FDA可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。生理意义反映细胞膜完整性和细胞活力激发波长495nm发射波长520nm（绿色）备注正在使用9.PI（DNA荧光探针）原理它不能透过完整的细胞膜，但能透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的膜而将细胞核染红，与细胞核中的DNA结合的PI发出的荧光，与未结合的PI相比，强度会增强20-30倍。生理意义检测死细胞及凋亡晚期细胞激发波长530nm发射波长615nm（红色）备注尝试过，但效果不好10.EB（核酸荧光探针）原理EB，不能透过细胞完整的细胞膜。溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致与DNA结合的染料呈现荧光，其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。生理意义检测死细胞激发波长545nm发射波长605nm（红色）备注有强致癌性，不推荐11.DAPI（DNA荧光探针）原理DAPI可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，产生比自身强20多倍的荧光，且对活细胞无毒副作用。和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。生理意义标记凋亡和死细胞的DNA激发波长364nm发射波长454nm（蓝色）备注与Hoechst功能相近，可以尝试12.CalceinAM原理Calcein-AM由于在Calcein(钙黄绿素)的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein(钙黄绿素)留在细胞内,发出强绿色荧光，且细胞毒性很低，适合用于活细胞染色。生理意义检测细胞膜完整性激发波长494nm发射波长517nm（绿色）备注跟FDA功能类似，细胞毒性很低，可以长时间标记细胞，但价格比较贵13.BCECF-AM(pH荧光探针)原理BCECF-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，BCECF-AM没有荧光，进入细胞后被细胞内的酯酶水解成BCECF，从而被滞留在细胞内。BCECF在适当的pH值情况下可以被激发形成绿色荧光。生理意义检测细胞内pH激发波长490nm发射波长526nm（绿色）备注感觉意义不大14.Tubulin-TrackerRed(微管红色荧光探针)原理Tubulin-Tracker?Red探针为荧光染料AlexaFluor555标记的抗α-Tubulin小鼠单克隆抗体(克隆号为DM1A)，可以识别α-Tubulin的425-450aa。可以用于人、小鼠、大鼠、牛、猪、豚鼠和禽类(avian)——仅供参考样品α-Tubulin的检测。生理意义标记细胞内微管激发波长555nm发射波长565nm（红色）备注红色荧光比较难拍，且价格较贵，作为筛选用可行性不大，可做机制研究用15.Lyso-TrackerRed(溶酶体红色荧光探针)原理Lyso-TrackerRed为采用MolecularProbes公司的DND99进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针，可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中，从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。中性红(Neutral?Red)和吖啶橙(AcridineOrange)也都可以对溶酶体进行荧光染色，但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。生理意义标记细胞溶酶体激发波长577nm发射波长590nm（红色）备注红色荧光比较难拍，且价格较贵，作为筛选用可行性不大，可做机制研究用16.Golgi-TrackerRed(高尔基体红色荧光探针)原理?Golgi-Tracker?Red为采用Molecular?Probes公司的BODIPY?TR进行了荧光标记的C5-ceramide。Ceramide或其类似物可以选择性地和高尔基体结合，因此荧光标记的ceramide可以用作高尔基体特异性的荧光探针。生理意义标记细胞高尔基体激发波长589nm发射波长617nm(红色)备注红色荧光比较难拍，且价格较贵，作为筛选用可行性不大，可做机制研究用17.ER-TrackerRed(内质网红色荧光探针)原理ER-TrackerRed为采用MolecularProbes公司的BODIPYTR进行了荧光标记的glibenclamide。Glibenclamide即glyburide，中文名为格列苯脲，是一种2型糖尿病治疗药物，可以结合主要定位在内质网上的sulphonylurea受体。因此荧光标记的glibenclamide就可以用作内质网特异性的荧光探针。ER-TrackerRed对于细胞的毒性极低。生理意义标记细胞内质网激发波长587nm发射波长615nm备注红色荧光比较难拍，且价格较贵，作为筛选用可行性不大，可做机制研究用18.Mito-TrackerGreen(线粒体绿色荧光探针)(绿色)原理Mito-Tracker?Green为采用Molecular?Probes公司的carbocyanine进行了荧光标记的一种Mito-Tracker，可以用作线粒体特异性的荧光探针。和rhodamine?123或JC-1相比，Mito-TrackerGreen对于线粒体的染色不依赖于线粒体膜电位。生理意义标记细胞线粒体激发波长490nm发射波长516nm备注与罗丹明123不完全相同，可以考虑一试19.DiI（细胞膜红色荧光探针）原理最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。DiI是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。生理意义标记细胞膜激发波长549nm发射波长565nm（红色）备注红色荧光比较难拍，且价格较贵，作为筛选用可行性不大，可做机制研究用