您好,欢迎访问三七文档
书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖/犜2497.26—2010进出口危险化学品安全试验方法第26部分:巨噬细胞功能试验犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊—犘犪狉狋26:犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿犪犮狉狅狆犺犪犵犲犳狌狀犮狋犻狅狀20100302发布20100916实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言 SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分:———第1部分:体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验;———第2部分:空斑形成细胞(PFC)试验;———第3部分:大型溞繁殖试验;———第4部分:酿酒酵母有丝分裂重组试验;———第5部分:睾丸细胞UDS试验;———第6部分:哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验;———第7部分:小鼠耳肿胀试验;———第8部分:腘窝淋巴结试验;———第9部分:血清溶血素测定试验;———第10部分:T淋巴细胞增殖功能测定试验;———第11部分:种系突变试验;———第12部分:单细胞凝胶电泳分析试验;———第13部分:荧光原位杂交试验;———第14部分:SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳试验;———第15部分:PCRSSCP实验;———第16部分:WesternBlot实验;———第17部分:哺乳动物行为毒理学试验;———第18部分:DNA加合物的检测方法;———第19部分:NorthernBlot实验;———第20部分:Bradford法测定蛋白质含量;———第21部分:琼脂糖凝胶电泳试验;———第22部分:DNA的Tm值测定方法;———第23部分:细胞器的分离实验方法;———第24部分:细胞免疫功能体外检测方法;———第25部分:体液免疫功能试验;———第26部分:巨噬细胞功能试验;———第27部分:流式细胞术检测凋亡;———第28部分:穿梭质粒在突变检验中的应用;———第29部分:生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T2497系列标准的第26部分。本部分修改采用《免疫学实验技术》中的免疫毒理学研究方法,其有关技术内容与上述方法完全一致,在部分文本格式上按GB/T1.1做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位:中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人:李晶、王利兵、王华、冯智劼、于智睿、李学洋。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖/犜2497.26—2010进出口危险化学品安全试验方法第26部分:巨噬细胞功能试验1 范围SN/T2497.26的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中巨噬细胞功能试验的试验原理、试验方法和试验结果。本部分适用于检测进出口危险化学品的免疫毒性的巨噬细胞功能试验。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T2497.26的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本部分。GB14924.1 实验动物 配合饲料通用质量标准GB14925 实验动物 环境及设施3 试验原理巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统的主要细胞,具有活跃的吞噬功能。能清除体内抗原物质及变性的细胞,在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。巨噬细胞受抗原刺激后活化,可使其吞噬功能明显增强。4 试验方法4.1 试验动物BALB/C小鼠、ICR、昆明品系小鼠,雌或雄,20g~22g。试验动物饲养条件应符合GB14924.1和GB14925的有关规定。4.2 试剂4.2.1 白色念珠菌悬液:接种于沙氏培养基的白色念珠菌,28℃培养18h~24h,生理盐水洗,配成1×107个/mL细胞悬液。4.2.2 6%无菌淀粉。4.2.3 Hank’s液(含5%小牛血清)。4.2.4 0.03%美兰(4℃存放)。4.3 试验步骤4.3.1 体内法试验前3天,小白鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1mL,诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。试验时,每只小鼠腹腔注射白色念珠菌菌液1mL,轻揉腹部,使菌液在腹腔中分布均匀,利于吞噬。30min后,将小鼠拉颈处死,固定,打开腹腔暴露肠管,用接种环取出腹腔液,均匀涂布于载玻片上,然后再滴一小滴0.03%冷美兰,盖上盖玻片。高倍镜下进行观察,计数。4.3.2 体外法将6%的消毒淀粉液1mL注入小鼠腹腔。72h后,拉颈处死小鼠,剖腹,吸取腹腔液,1000r/min1犛犖/犜2497.26—2010离心5min,收集巨噬细胞。以Hank’s液洗涤,1000r/min离心5min,重复二次。计数巨噬细胞,以Hank’s液配制l×106个/mL细胞悬液。取华氏管,加入等量的1×106个/mL的巨噬细胞悬液及1×107个/mL白色念珠菌菌液。37℃,温育30min(中间摇动试管二次)。500r/min离心5min,弃上清液。轻轻振荡试管,取悬液一滴加至载玻片,取冷美兰一滴,混匀后,加盖玻片。高倍镜观察并计数。5 试验结果按式(1)、式(2)、式(3)计算评价巨噬细胞的吞噬功能:吞噬百分率=100个巨噬细胞内发生吞噬的巨噬细胞数100×100%……………(1)吞噬指数=发生吞噬的100个巨噬细胞内含有的白色念珠菌数100(发生吞噬的巨噬细胞数)×100%………(2)杀菌率=被吞入的白色念珠菌中死亡数被吞入的白色念珠菌数×100%……………………(3) 注:杀死的细菌呈蓝色,活菌不着色。2犛犖/犜2497.26—2010书书书0102—627942犜/犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行 业 标 准进出口危险化学品安全试验方法第26部分:巨噬细胞功能试验SN/T2497.26—2010中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址www.spc.net.cn电话:68523946 68517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16 印张0.5 字数5千字2010年5月第一版 2010年5月第一次印刷印数1—1600书号:155066·220932 定价14.00元
本文标题:SNT 2497.26-2010 进出口危险化学品安全试验方法 第26部分巨噬细胞功能试验
链接地址:https://www.777doc.com/doc-8045532 .html