SNT 2439-2010 鱼鳃霉病检疫技术规范

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４３９—２０１０鱼鳃霉病检疫技术规范犘狉狅狋狅犮狅犾狅犳狇狌犪狉犪狀狋犻狀犲犳狅狉犫狉犪狀犮犺犻狅犿狔犮狅狊犻狊狅犳犳犻狊犺２０１００１１０发布２０１００７１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布食品伙伴网书书书中华人民共和国出入境检验检疫行　业　标　准鱼鳃霉病检疫技术规范ＳＮ／Ｔ２４３９—２０１０中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６　６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６　印张０．５　字数９千字２０１０年４月第一版　２０１０年４月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２０７０１　定价１４．００元食品伙伴网书书书前　　言本标准的附录Ａ为规范性附录，附录Ｂ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国湖南出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局。本标准主要起草人：唐连飞、张利峰、郑腾、朱中武、吴愈柏、江为民。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２４３９—２０１０食品伙伴网鱼鳃霉病检疫技术规范１　范围本标准规定了鱼鳃霉病的现场检疫、实验室检验和结果判定。本标准适用于鱼鳃霉病的检疫。２　规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ／Ｔ１８０８８　出入境动物检疫采样３　器材和试剂３．１　器材３．１．１　小动物解剖器具。３．１．２　灭菌试管（供采集样品用）。３．１．３　载玻片和盖玻片。３．１．４　培养皿。３．１．５　接种环或接种针。３．２　设备３．２．１　恒温箱（能控制温度在２５℃～３０℃的全温恒温箱）。３．２．２　普通显微镜。３．３　试剂３．３．１　沙保劳（Ｓａｂｏｕｒａｕｄ）氏葡萄糖琼脂培养基（配方见附录Ａ中第Ａ．１章）或玉米粉琼脂培养基（配方见附录Ａ中第Ａ．２章）。３．３．２　乳酸苯酚溶液（配方见附录Ａ中第Ａ．３章）。４　现场检疫４．１　临床检查仔细检查全群鱼的健康状况，观察鱼是否有厌食、游动迟缓、鳃盖张开，鱼浮于水面而体表却无其他明显变化等异常表征。鱼鳃霉病的分布及症状参见附录Ｂ。４．２　解剖检查对在临床检查中发现有异常表征的鱼进行解剖检查，出现下列ａ）或（和）ｂ）病变的，可怀疑为鱼鳃霉病：ａ）　鱼鳃黏液多，鱼鳃出血、淤血或缺血，出现红色或暗红色、灰色斑点或斑块，呈现花斑鳃；ｂ）　鱼鳃坏死、腐烂脱落，出现鱼鳃缺损。５　采样５．１　有临床症状的鱼的采样对有临床症状的鱼，挑选临床症状明显的活鱼或濒临死亡的鱼，每一批次取１０尾～２０尾鱼的鱼鳃１犛犖／犜２４３９—２０１０食品伙伴网作为样本。５．２　外表健康无临床症状的鱼的采样对外表健康无临床症状的鱼，按ＧＢ／Ｔ１８０８８规定，采取鱼鳃组织作为样本，采样数量如下：ａ）　亲鱼、观赏鱼及鱼苗每批次采１５０尾；ｂ）　批量总数小于或等于２５０尾的，采２３尾；ｃ）　批量总数为２５１尾～５００尾的，采２５尾；ｄ）　批量总数为５０１尾～１０００尾的，采２６尾；ｅ）　批量总数为１００１尾～５０００尾的，采２７尾；ｆ）　批量总数大于５０００尾的，采３０尾。６　实验室检验６．１　显微镜检查取小块疑似鳃霉病鱼鳃组织，在灭菌蒸馏水中漂洗，以除去淤泥和黏液。在载玻片上滴一滴蒸馏水，取少量鳃丝制作压片，镜检。若发现有霉菌菌丝，结合临床症状和病理变化即可确诊为鳃霉病。６．２　鳃霉菌分离取鳃组织用沙保劳氏葡萄糖琼脂培养基或玉米粉琼脂培养基进行鳃霉菌分离培养。用灭菌镊子取少许鳃丝，经５０μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬ氯霉素溶液漂洗后在培养皿中剪碎，均匀涂布于培养基上，２５℃～３０℃培养５ｄ～７ｄ，如生长出霉菌，再结合显微镜观察后即可确诊为鳃霉病。鳃霉菌在沙保劳氏葡萄糖琼脂培养基或玉米粉琼脂培养基上生长良好，发育很快。培养２ｄ时菌落呈白色绒毛状或棉花丝样，３ｄ～４ｄ后菌落中心为黄色，菌落背面呈黄褐色。在干净的载玻片中央滴一滴乳酸苯酚溶液，用接种环或针挑取少许霉菌置于液滴中，将菌丝体摊开，勿成团，轻轻盖上盖玻片进行显微镜观察。鳃霉菌菌丝无隔，不分枝或分枝很少（见附录Ｂ）。７　结果判定７．１　经６．１或６．２观察或分离到鳃霉菌的结合临床症状和病理变化确诊为鳃霉菌病。７．２　现场检疫判为可疑的但６．１或６．２未观察或分离到鳃霉菌的确定为非鳃霉菌病。２犛犖／犜２４３９—２０１０食品伙伴网附　录　犃（规范性附录）主要试剂的配制方法犃．１　沙保劳（犛犪犫狅狌狉犪狌犱）氏葡萄糖琼脂培养基葡萄糖　４０ｇ蛋白胨　１０ｇ琼脂粉　１８ｇ～２０ｇ蒸馏水　１０００ｍＬ将以上成分倒入烧杯或三角烧瓶内，先加少量蒸馏水加热溶解。待完全溶解后补足蒸馏水至所需要的总体积，并加入氯霉素至终浓度为５０μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬ，用四层纱布过滤，按要求定量分装于小烧瓶或中试管内，塞以棉塞，再于棉塞外加包牛皮纸和油纸各一层，挂上标签，于１２１℃灭菌１０ｍｉｎ～１５ｍｉｎ后保存备用。犃．２　玉米粉琼脂玉米粉　６０ｇ琼脂粉　１５ｇ～１８ｇ蒸馏水　１０００ｍＬ将玉米粉加入蒸馏水中，搅匀，文火煮沸１ｈ，纱布过滤，加琼脂后加热熔化，补足水量至１０００ｍＬ。分装，１２１℃灭菌２０ｍｉｎ。犃．３　乳酸苯酚溶液苯酚　１０ｇ乳酸（密度１．２１ｋｇ／ｍ３）　１０ｇ甘油　２０ｇ蒸馏水　１０ｍＬ将以上试剂溶解混匀。犛犖／犜２４３９—２０１０食品伙伴网书书书犛犖／犜２４３９—２０１０附　录　犅（资料性附录）鱼　鳃　霉　病　　鱼鳃霉病（犅狉犪狀犮犺犻狅犿狔犮狅狊犻狊ｏｆＦｉｓｈ）在全世界分布较广，美国、印度尼西亚、日本、以色列和欧洲等都有发生，在我国南方和北方（包括台湾省）均有散在性发生。每年５月～１０月的夏秋季节（温度高于２０℃时）多暴发流行，尤以５月～７月为甚，其流行与水质的恶化密切相关。鱼鳃霉病的病原为鱼鳃霉菌属霉菌，其生物学分类为真菌门、卵菌纲、水霉目、水霉科、鳃霉菌属，菌丝无隔。寄生在鱼鳃鳃弓和鳃小片的血管内的鳃霉菌，其菌丝沿血管生长，不分枝（见图Ｂ．１）；寄生在鳃小片组织中的鳃霉菌菌丝分枝（图Ｂ．２），菌丝充满鳃丝。鳃霉菌菌丝产生的孢子释放到水中或沉淀于底部腐质上，与鱼体接触后附着在鳃部发育成菌丝。图犅．１　寄生在血管中的霉菌菌丝（分离培养，２０×）菌丝无隔，不分枝图犅．２　寄生在鳃小片组织中的鳃霉菌菌丝（分离培养，２０×）菌丝无隔，分枝　　本病的临床表现和病理变化是鱼不摄食，游动迟缓，出现浮头、鳃盖张开；鳃上黏液增多，鳃瓣出现充血、出血和淤血。如果菌丝堵塞血管，鳃瓣失去正常鲜红色，呈粉红或苍白色。鳃因出血、淤血和缺血而呈现花斑状。病程进一步发展，鳃丝呈坏疽性崩解，坏死部位腐烂脱落，鱼鳃出现缺损。０１０２—９３４２犜／犖犛书号：１５５０６６·２２０７０１定价：　　１４．００元食品伙伴网