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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖/犜2235—2008进出口食品中嘧菌环胺残留量检测方法气相色谱质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犮狔狆狉狅犱犻狀犻犾狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犌犆犕犛犿犲狋犺狅犱20081118发布20090601实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布食品伙伴网书书书前 言本标准的附录A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人:丁慧瑛、谢文、陈笑梅、将晓英、周旭、姚亮、卫锋。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖/犜2235—2008食品伙伴网进出口食品中嘧菌环胺残留量检测方法气相色谱质谱法1 范围本标准规定了食品中嘧菌环胺残留量的气相色谱质谱检测及确证方法。本标准适用于大米、大豆、小菘菜、甜豌豆、梨、柑桔、花生、茶叶、牛肉、鸡肉、虾肉、蜂蜜中嘧菌环胺残留量的检测和确证。2 方法提要试样中残留的嘧菌环胺经正己烷丙酮(1+1)提取,用凝胶渗透色谱柱和丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱净化,气相色谱质谱检测和确证,外标法定量。3 试剂和材料除另有说明外,所用的有机试剂均为色谱纯,水为蒸馏水。3.1 正己烷。3.2 丙酮。3.3 环己烷。3.4 乙酸乙酯。3.5 甲醇。3.6 氨水:分析纯。3.7 盐酸:分析纯。3.8 0.1mol/L盐酸溶液:量取9mL盐酸,加适量水稀释至1000mL。3.9 氯化钠:分析纯。3.10 无水硫酸钠:分析纯,650℃灼烧4h,在干燥器内冷却至室温,贮于密封瓶中备用。3.11 丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱:3mL,500mg或相当者。3.12 嘧菌环胺(Cyprodinil)标准物质:纯度大于99%,分子式:C14H15N3相对分子质量:225.3CAS号:121552612。3.13 嘧菌环胺标准溶液:准确称取适量的嘧菌环胺标准物质,用丙酮配成浓度为100μg/mL的标准储备液。根据需要用丙酮稀释至适当浓度的标准工作液。标准储备液在0℃~4℃冰箱中保存,有效期为12个月,标准工作液在0℃~4℃冰箱中保存,有效期为6个月。4 仪器和设备4.1 气相色谱质谱仪:配有电子轰击源(EI)。4.2 旋涡混合器。4.3 离心机:转速大于5000r/min。4.4 氮吹仪。4.5 旋转蒸发器。4.6 均质器。4.7 固相萃取装置。4.8 多功能食品搅拌机。4.9 粉碎机。1犛犖/犜2235—2008食品伙伴网4.10 凝胶渗透色谱仪。5 试样制备和保存5.1 试样制备5.1.1 茶叶、粮谷类取代表性样品约500g,经粉碎机粉碎并通过2.0mm圆孔筛,混匀,装入洁净容器内密封,标明标记。5.1.2 蔬菜、水果及坚果类取代表性样品约500g,将其可食部分先切碎,经多功能食品搅拌机充分捣碎均匀,装入洁净容器内密封,标明标记。5.1.3 畜、禽、水产品类取代表性样品约500g,将其可食部分切碎后,用多功能食品搅拌机充分捣碎均匀,装入洁净容器内密封,标明标记。5.1.4 蜂产品类取代表性样品约500g,未结晶的样品将其用力搅拌均匀,有结晶析出的样品可将样品瓶盖塞紧后,置于不超过60℃的水浴中温热,等样品全部融化后搅匀,迅速冷却至室温。在融化时应注意防止水分挥发。装入洁净容器内密封,并标明标记。5.2 试样保存茶叶、粮谷、蜂产品、坚果类等试样于4℃以下保存;蔬菜、水果、蓄、禽、水产品类等试样于-18℃以下保存。在制样过程中,应防止样品受到污染或发生嘧菌环胺残留量的变化。6 检测步骤6.1 提取6.1.1 虾肉称取20g(精确至0.01g)试样,加入10mL水混匀,加入30mL正己烷丙酮(1+1)混合溶液,以10000r/min均质0.5min,加入5g氯化钠,摇匀,并于4000r/min离心3min。吸取上层有机相于浓缩瓶中,残渣中加入30mL正己烷丙酮(1+1)混合溶液,重复提取一次,合并上层有机相,在45℃水浴中减压浓缩至近干。准确加入10.0mL环己烷乙酸乙酯(1+1)溶解残渣,供凝胶色谱净化。6.1.2 蜂蜜称取20g(精确至0.01g)试样,加入20mL水混匀,加入30mL正己烷丙酮(1+1)涡旋混匀1min,加入5g氯化钠,摇匀,并于4000r/min离心3min。吸取上层有机相于浓缩瓶中,残渣中加入30mL正己烷丙酮(1+1)混合溶液,重复提取一次,合并上层有机相,在45℃水浴中减压浓缩至近干。准确加入10.0mL环己烷乙酸乙酯(1+1)溶解残渣,供凝胶色谱净化。6.1.3 大米、大豆、花生、茶叶、小菘菜、甜豌豆、梨、柑桔、牛肉、鸡肉称取5g(茶叶称取2g)(精确至0.01g)试样,加入5mL水混匀(茶叶、大米和花生需放置0.5h),加入15mL正己烷丙酮(1+1)混合溶液,以10000r/min均质0.5min,加入5g氯化钠,摇匀,并于4000r/min离心3min。吸取上层有机相于浓缩瓶中,残渣中加入15mL正己烷丙酮(1+1)混合溶液,重复提取一次,合并上层有机相,在45℃水浴中减压浓缩至近干。准确加入10.0mL环己烷乙酸乙酯(1+1)溶解残渣,供凝胶色谱净化。6.2 净化6.2.1 凝胶色谱净化6.2.1.1 凝胶色谱净化条件a) 凝胶净化柱:400mm×25mm(内径);填料:BioBeads,SX3,38μm~75μm,或相当者(在使2犛犖/犜2235—2008食品伙伴网用前需先做淋洗曲线);b) 流动相:环己烷乙酸乙酯(1+1);c) 流速:5.0mL/min;d) 样品定量环:5mL;e) 收集时间:20min~25min。6.2.1.2 凝胶色谱净化步骤将提取液转移到离心管中,4000r/min离心3min,将上清液转移到凝胶渗透色谱仪的样品瓶中,按6.2.1.1条件净化,将收集液在45℃以下水浴减压浓缩至近干,加入5mL甲醇溶解后,加入5mL水混匀。6.2.2 丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱净化将丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱安装在固相萃取装置上,加入5mL甲醇,弃去流出液,再加入5mL0.1mol/L盐酸溶液,弃去流出液。加入6.2.1所得溶液,加入10mL甲醇水(1+1),弃去流出液,抽真空至尽干,再加入10mL氨水甲醇(5+95),收集10mL流出液。在45℃水浴中减压浓缩至近干。准确加入0.5mL丙酮溶解残渣并定容,供GCMS检测。6.3 检测6.3.1 气相色谱质谱条件a) 色谱柱:DB5ms石英毛细管柱,30m×0.25mm(内径)×0.25μm(膜厚),或相当者;b) 色谱柱温度:50℃(1min)20℃/→min300℃(10min);c) 进样口温度:250℃;d) 接口温度:280℃;e) 载气:氦气,纯度大于等于99.999%。流速:1.0mL/min;f) 进样量:2μL;g) 进样方式:脉冲不分流进样,脉冲压力25psi,延时0.75min,0.75min后开阀;h) 离子源:电子轰击源(EI);i) 电离能量:70eV;j) 溶剂延迟时间:8min;k) 检测方式:选择离子监测方式;l) 选择离子及相对丰度:见表1。表1 选择离子和相对丰度选择离子(m/z)224(定量)225226210相对丰度/%10061.79.011.36.3.2 定量根据样液中嘧菌环胺含量的情况,选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中嘧菌环胺响应值应在仪器检测的线性范围内。标准工作溶液和样液等体积穿插进样检测。在上述色谱条件下,嘧菌环胺的保留时间约为10.5min,标准品的总离子流色谱图参见附录A中图A.1。6.3.3 确证对标准溶液及样液均按6.3.1规定的条件进行检察,如果样液与标准溶液在相同的保留时间有峰出现,则对其进行质谱确证,在扣除背景后的样品谱图中,所选择离子全部出现,同时所选择的离子的离子丰度比与标准品相关离子的相对丰度一致,波动范围符合表2的最大容许偏差之内(见表2),可判定样品中存在嘧菌环胺。被确证的样品可判定为嘧菌环胺阳性检出。嘧菌环胺标准品的质谱图参见附录A中图A.2。3犛犖/犜2235—2008食品伙伴网表2 质谱相对离子丰度最大容许偏差相对离子丰度(基峰)/%容许的相对偏差/%>50±10>20~50±15>10~20±20≤10±506.3.4 空白试验除不加试样外,均按上述检测步骤进行。6.4 结果计算用色谱数据处理软件或按式(1)计算试样中,嘧菌环胺的残留含量:犡=犃×犮×犞犃s×犿……………………………(1) 式中:犡———试样中嘧菌环胺残留量,单位为毫克每千克(mg/kg);犃———样液中嘧菌环胺的峰面积;犮———标准工作液中嘧菌环胺的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);犞———最终样液定容体积,单位为毫升(mL);犃s———标准工作液中嘧菌环胺峰面积;犿———最终样液所代表的试样量,单位为克(g)。7 方法检测低限和回收率7.1 检测低限本方法的检测低限:蜂蜜和虾肉为0.0004mg/kg,其他样品为0.01mg/kg。7.2 回收率样品的添加浓度及回收率的实验数据见表3。表3 样品的添加浓度及回收率的实验数据样品添加浓度/(mg/kg)回收率/%大米0.0177.5~1120.0277.5~1070.0577.8~102甜豌豆0.0178.2~1130.0277.5~1100.0579.6~104小松菜0.0175.1~1020.0279.5~1100.0575.8~96.4梨0.0176.7~1120.0279.5~1070.0577.6~108样品添加浓度/(mg/kg)回收率/%柑桔0.0169.1~1120.0276.0~1080.0580.2~110花生0.0178.5~1140.0279.5~1110.0579.4~108茶叶0.0169.8~1140.0272.5~86.00.0577.0~106牛肉0.0178.9~1130.0278.8~1030.0583.0~102.24犛犖/犜2235—2008食品伙伴网表3(续)样品添加浓度/(mg/kg)回收率/%鸡肉0.0178.1~1130.0279.5~1070.0581.6~102虾肉0.000456.5~85.50.000858.4~87.90.00268.0~84.0样品添加浓度/(mg/kg)回收率/%蜂蜜0.000454.5~81.00.000856.8~82.90.00262.5~81.5大豆0.0173.8~1070.0275.0~1040.0579.6~1105犛犖/犜2235—2008食品伙伴网附 录 犃(资料性附录)色谱图和质谱图图犃.1 嘧菌环胺标物质的总离子流色谱图图犃.2 嘧菌环胺标准物质的质谱图6犛犖/犜2235—2008食品伙伴网犉狅狉犲狑狅狉犱犃狀狀犲狓犃狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狀犻狀犳狅狉犿犪狋犻狏犲犪狀狀犲狓.犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊狆狉狅狆狅狊犲犱犫狔犪狀犱犻狊狌狀犱犲狉狋犺犲犮犺犪狉犵犲犱狅犳犮犲狉狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犪犮犮狉犲犱犻狋犪狋犻狅狀犪犱犿犻狀犻狊狋犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪.犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犱狉犪犳狋犲犱犫狔犣犺犲犼犻犪狀犵犈狀狋狉狔犈狓犻狋犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪,犔犻犪狅狀犻狀
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