DB32∕T 2181-2012 南粳46原种生产技术规程

ICS65.020B22备案号：36383-2013DB32DB32/T2181-2012南粳46原种生产技术规程BasicSeedProducingTechnologyofRiceVarietyNanJing462012-12-28发布2013-02-28实施江苏省质量技术监督局发布江苏省地方标准DB32/T2181-2012前言为规范南粳46原种生产技术，制定本标准。本标准按GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》编制。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院。本标准主要起草人：陈涛、姚姝、周丽慧、赵凌、赵庆勇、朱镇、张亚东、王才林。DB32/T2181-20121南粳46原种生产技术规程1范围本标准规定了南粳46原种生产的产地环境、品种来源和类型、原种生产技术、收获、贮存和检验。本标准适用于沿江和苏南地区中上等肥力条件下南粳46原种生产。2规范性引用文件下列文件对于文本的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.1-1995农作物种子检验规程总则GB/T3543.2-1995农作物种子检验规程扦样GB/T3543.3-1995农作物种子检验规程净度分析GB/T3543.4-1995农作物种子检验规程发芽试验GB/T3543.5-1995农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定GB/T3543.6-1995农作物种子检验规程水分测定GB/T3543.7-1995农作物种子检验规程其他项目检验GB4404.l-2008粮食作物种子禾谷类GB/T17316-1998水稻原种生产技术操作规程NY/T5117-2002无公害水稻生产技术规程DB32/T79-2007水稻壮秧与育秧技术标准DB32/T1762—2011稻米食味品质评价3产地环境应符合NY5116-2002的规定。4品种来源和类型4.1来源母本为武香粳14，父本为关东194，经系谱法选育而成。4.2类型中熟晚粳稻。5原种生产技术5.1方法DB32/T2181-20122采用改良混合选择方法，即单株选择、分系比较、混合繁殖的三圃制。5.2单株选择5.2.1选择要求单株选择要求（种子来源、选择时期、选种数量、室内考种决选、考种项目、收获贮藏）应该符合GB/T17316-1998的规定。稻米具有暗胚乳基因和香味基因的特性，蒸煮品质通过DB32/T1762—2011方法符合食味品质优良的品种要求。5.2.2选择标准当选单株的株型集散适中，生长清秀，叶片挺举，叶色较淡，后期秆青籽黄，全生育期（160～165）d。株高（105～110）cm，主茎总叶片（18～19）叶。分蘖性中等，成穗率85%左右。穗型较大，平均穗长16cm以上。穗粒结构协调，每穗总粒数140～150粒，结实率90%左右，千粒重25g左右。单株的米粒干燥后呈云雾状。5.2.3决选标准当选单株的株高应在（105～110）cm范围内，分蘖数在（8～10）个，伸长节间7个，主穗长（16～17）cm，每穗一次枝梗16个，每穗实粒数（140～150）粒，结实率90%，千粒重(25～26)g，单株籽粒重25g。稻米的直链淀粉含量在（10～15）%之间，米粒干燥后呈云雾状，具有软米特性和浓郁的香味。暗胚乳基因和香味基因的分子检测见附录A。5.3株行圃5.3.1建圃将上年当选的各单株种子，按编号分区种植，建立株行圃。5.3.2育秧所有单株种子(包括对照种子)的浸种、催芽、播种，均须分别在同1d完成，应符合DB32/T79-2007的规定。5.3.2.1播期湿润育秧5月10日～5月15日播种。5.3.2.2播种密度按湿润育秧每亩净秧板播量20kg的密度标准进行控制。5.3.2.3秧龄湿润育秧秧龄30d左右。5.3.3田间设计符合GB/T17316-1998的规定，空间隔离距离不少于100m，时间隔离扬花期要错开15d以上。5.3.4移栽应符合GB/T17316-1998的规定，5.3.5田间管理和记载应符合GB/T17316-1998的规定。5.3.6收获及淘汰DB32/T2181-20123应符合GB/T17316-1998的规定。5.4株系圃应符合GB/T17316-1998的规定。5.5原种圃应符合GB/T17316-1998的规定。特别注意黑条矮缩病的防治。6收获、贮存和检验收获应按GB/T17316-1998的规定。贮存和检验按GB/T3543.1～7-1995进行，符合GB4404.1-2008之规定的原种种子签发合格证书。DB32/T2181-20124附录A(资料性附录)南粳46暗胚乳基因和香米基因的分子检测方法南粳46是含有特殊的暗胚乳基因Wx-mq和香米基因fgr的水稻品种，可针对这两个基因进行分子标记检测，辅助辨别品种的真伪。A.1Wx-mq标记标记检测A.1.1Wx-mq标记序列将稻谷进行幼苗DNA提取，利CAPS标记进行分子检测,其正向引物序列为5׳-TGTGGCTGAGGTAGGAGCA-3׳,反向序列为5׳-AACGCATCTGGTTGTCTTTGT-3׳。A.1.2PCR反应体系。20μLPCR反应体系包括：10ng/μL的DNA1μL，4pmol/μL的引物2.0μL
LPCR反应体系包括DNA(10ng/μL)1μL,Primer(4pmol/μL)0.2μL,10×PCRBuffer(无MgCl2)2μL,dNTP(2.5mmol/L)0.4μL,MgCl2(25mmol/L)0.6μL,Taq酶(5U/μL)0.2μL和ddH2O15.6μL。PCR反应在MJResearchPTC-200热循环仪上进行,反应程序如下:94℃下预变性5min,每个循环94℃下变性30s,55℃下退火30s,72℃下延伸1min,共35个循环;最后72℃下延伸10min,4℃下保存待用。A.1.3酶切体系PCR扩增产物5μL;NIaⅢ酶2μL(10U);10×NEBBuffer2μL;ddH2O11μL;反应总体系20μL。酶切反应在MJResearchPTC-200热循环仪上进行,于37℃下恒温4h。A.1.4产物分析酶切产物在2.5%琼脂糖上进行分离鉴定,经溴化乙锭(EB)染色并于凝胶成像系统下观察分析。标准稻谷具有215bp和170bp两条条带（图中1、4、5样品为标准Wx-mq基因带型；3、7为杂合Wx-mq基因带型；2、6为不含Wx-mq基因带型）。A.2fgr标记标记检测A.2.1fgr标记序列将稻谷进行幼苗DNA提取，利InDel标记进行分子检测,其正向引物序列为5׳-GGGAGGCGCTGAAGAGGA-3׳,反向序列为5׳-GGGTAGTCACCACCCTACCTTG-3׳。A.2.2PCR反应体系。20μLPCR反应体系包括：10ng/μL的DNA1μL，4pmol/μL的引物2.0μL
LPCR反应体系包括DNA(10ng/μL)1μL,Primer(4pmol/μL)0.2μL,10×PCRBuffer(无MgCl2)2μL,dNTP(2.5mmol/L)0.4μL,MgCl2(25mmol/L)0.6μL,Taq酶(5U/μL)0.2μL和ddH2O15.6μL。PCR反应在MJResearchPTC-200热循环仪上进行,反应程序如下:94℃下预变性5min,每个循环94℃下变性30s,55℃下退火30s,72℃下延伸1min,共35个循环;最后72℃下延伸10min,4℃下保存待用。A.2.3产物分析反应产物在6%非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，用硝酸银染色。染色并于凝胶成像系统下观察分析。标准稻谷能扩增出100bp的DNA条带（图中2、3为稻谷标准带型，5为杂合带型，1、4为非标准带型。）