DB21T 2739-2017 绒山羊鲜精稀释与保存技术操作规程

ICS65.020.30B43DB21辽宁省地方标准DB21/T2739—2017绒山羊鲜精稀释与保存技术操作规程Thetechnologyoperatingproceduresofdilutingandsavingforfreshsemenofcashmeregoats2017-02-23发布2017-03-23实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/T2739—2017I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由辽宁省畜牧科学研究院提出。本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。本标准起草单位：辽宁省畜牧科学研究院、辽宁省辽宁绒山羊原种场有限公司。本标准主要起草人：刘兴伟、杨术环、王世泉、张兴会、张晓鹰、王家明。DB21/T2739—20171绒山羊鲜精稀释与保存技术操作规程1范围本标准规定了绒山羊鲜精稀释与保存过程中的基本要求、品质检查、稀释、分装、标记、保存和使用等技术内容。本标准适用于绒山羊人工授精技术中的鲜精稀释、保存及精液处理。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T2893-2016绒山羊饲养管理技术规范DB21/T2434-2015辽宁绒山羊人工授精技术操作规程3术语与定义下列术语和定义适用于本文件。3.1鲜精Freshsemen原精及其稀释后未经冷冻的精液。3.2原精Theoriginalsemen采自公羊未经处理的精液。3.3精子活力spermvitality在显微镜下，精液中直线运动的精子数量占精子总数的比例。3.4精子密度spermdensity每毫升精液中含有的精子数量。3.5DB21/T2739—20172稀释比例Dilutionrate原精与稀释液的体积比例。4基本要求4.1鲜精处理环境室内，室温不低于25℃，不高于35℃，无阳光直射、无烟尘、无强烈辐射。4.2器材处理根据材质特点，做好清洗、消毒、烘干处理，使用前保持干燥、洁净并与精液等温。4.3采精季节以8月中旬～11月下旬和4月中旬～5月下旬为宜。4.4供精公羊选择一级以上种公羊作为供精公羊，日常饲养管理参照NY/T2893-2016的规定。4.5精液品质严格按照DB21/T2434-2015相关要求进行采精，原精活力和稀释后的活力要求达到60%以上。4.6保存期标定合格原精在稀释与保存前，要进行活力、存活时间和稀释倍数的测定，根据上述测定指标，确定供精公羊用于输精的精液最长保存时间，具体内容详见附录A。5品质检查原精的检查方法参照DB21/T2434-2015进行操作，稀释后的精液检查活力和密度，操作方法同原精检查法。鲜精检查后做好相关记录，详见附录B。6稀释6.1稀释液6.1.1自配稀释液所用试剂均为化学分析纯试剂，用双重蒸馏水或超纯水溶解，调整稀释液PH值至6.8～7.0，推荐稀释液配方及配制方法参照附录C。6.1.2商品稀释液按产品说明书使用和保存，过期或变色的稀释液禁止使用。6.1.3稀释液标记配制的精液稀释液在使用前要标记稀释液配方代号、配制时间。DB21/T2739—201736.1.4稀释液保存商品稀释液按照产品说明书保存；自配稀释液低温冷藏，冷藏温度控制在0℃～5℃，保存期不超过7天。6.2鲜精稀释将稀释液放入水浴锅内加热至35℃，同时将集精杯的水温调整并保持35℃，原精采集后应在20分钟内等温稀释。先将装有原精的集精杯放水浴锅内，然后将稀释液沿集精杯内壁缓缓加入，随后将原精和稀释液轻轻混匀；将原精先进行2～4倍稀释，混匀后再稀释到规定比例，稀释比例的确定参照附录D。7鲜精分装与标记7.1鲜精分装鲜精稀释后采用瓶、管等容器分装并密封，容器材质应对精子无害并经清洗、干燥和灭菌处理。容器分装精液时应与精液等温，根据精液体积选择不同容量的容器，尽量充满。7.2鲜精标记分装后的鲜精应标明生产单位、品种、公羊号、生产日期、保存期、稀释液配方代号、精液量、输配剂量。8鲜精保存8.1保存方法稀释后的鲜精用8～12层纱布包裹或直接放入等温水中，再置于0℃～5℃恒温箱中存放，每间隔8小时，将精液重新轻轻混匀。8.2鲜精抽检使用前对鲜精进行品质检查，镜检温度为37℃～38℃，检查合格后可用于输精。8.3鲜精运输运输过程中，将精液放置到0℃～5℃的恒温箱中，避免剧烈震荡。8.4鲜精保存时间以生理盐水、5%的葡萄糖溶液、2.9%的柠檬酸钠溶液稀释精液时，稀释倍数不超过3倍，稀释后立即使用，最长不超过2小时。使用商品稀释液或自配稀释液进行鲜精稀释，使用前要测定不同供精公羊个体稀释鲜精后的精子参数，主要包括活力变化、在38℃的存活时间等技术参数，根据技术参数值确定鲜精保存的最长时间，原则上不宜超过5天。9鲜精使用DB21/T2739—20174取用鲜精时应快速操作，根据输精用量取出相应的精液，取出精液后迅速将精液保存容器盖严，取出的精液不再放回保存容器内，一次性使用完毕。在取用过程中，防止未取用精液温度回升。DB21/T2739—20175AA附录A（规范性附录）鲜精保存期检测标定表12243648607284检测时间与指标倍数活力存活时间畸形率活力存活时间畸形率活力存活时间畸形率活力存活时间畸形率活力存活时间畸形率活力存活时间畸形率活力存活时间畸形率241020备注：活力是指37℃～38℃下镜检活力，存活时间是指将精液置于38℃下精子全部死亡的时间，畸形率为畸形精子占精子总数的百分率。DB21/T2739—20176BB附录B（资料性附录）公羊鲜精保存登记表保存第1天保存第2天保存第3天保存第1天供精单位生产日期品种公羊号预配数量每份剂量每份有效精子数畸形率保质期活力摇动时间活力摇动时间活力摇动时间活力摇动时间备注DB21/T2739—20177CC附录C（资料性附录）推荐稀释液配方及配制方法取三羟甲基氨基甲烷2.42g，柠檬酸1.34g，葡萄糖1g，EDTA-2Na0.15g，加入超纯水80ml，煮沸即冷却至38℃，加入青霉素1×105IU，链霉素1×105IU，新鲜鸡蛋卵黄20ml，混匀备用。DB21/T2739—20178DD附录D（资料性附录）稀释比例确定方法稀释后的鲜精，每一次输精剂量输入的有效精子数应保证发情母羊正常受孕，每剂的输精剂量为0.25ml～0.5ml，具体可参照如下公式确定最终稀释比例。X＝1：（10kplV）。在公式中，p—原精精子密度，单位为1×108／ml；V0—每次输入稀释后的精液体积,单位为ml，为设定值；k—每次输精输入的有效精子数量，单位为1×108，为设定值；l—稀释后的精子活力,单位为%；X—鲜精稀释比例。_________________________________