DB32∕T 1438-2009 亚氨基二苄的含量分析 核磁共振氢谱法

ICS67260DB32G04备案号：27547—2010江苏省地方标准DB32/T1438—2009亚氨基二苄的含量分析核磁共振氢谱法DeterminationofiminodibenzylMethodUsingProtonNuclearMagneticResonance(NMR)Spectrometry2009-08-18发布2009-10-18实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T1438—2009I前言本标准对亚氨基二苄的核磁定量分析的方法原理、试剂、仪器设备、样品制备、分析步骤、结果计算、精密度等内容作出了技术规定。本标准按GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T1.2-2002《标准化工作导则第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》编制。本标准附录A为资料性附录。本标准由江苏省大型科学仪器设备共享服务平台提出。本标准起草单位：江苏省药用植物生物技术重点实验室（徐州师范大学）、河南分析测试中心。本标准主要起草人：蒋虹、冯友建、王强。本标准为首次发布。DB32/T1438—2009亚氨基二苄的含量分析——核磁共振氢谱法亚氨基二苄NH结构式：分子式：C14H13N摩尔质量：195.26外观：淡黄色结晶或结晶性粉末溶解性：不溶于水，溶于三氯甲烷、乙腈、丙酮及醇类等有机溶剂熔点：（105～109）℃苯甲酸苄酯OO结构式：分子式：C14H12O2摩尔质量：212.24外观：无色透明液体溶解性：不溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿、油类1范围本标准规定了亚氨基二苄的含量分析—核磁共振氢谱法的术语和定义、方法原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果的计算、精密度。本标准适用于亚氨基二苄的含量分析—核磁共振氢谱法。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。JY/T007-1996超导脉冲傅立叶变换核磁共振谱方法通则JJG(教委)007-1996超导脉冲傅里叶变换核磁共振谱仪检定规程3术语和定义JY/T007确立的术语和定义适用于本标准。4方法原理本方法把氢谱中质子的共振峰积分面积与产生该共振峰的质子数成正比的原理用于亚氨基二苄的含量分析，用已知质量的苯甲酸苄酯作定量内标，调整核磁仪器参数，检测同一样品管中的亚氨基二苄和苯甲酸苄酯的氢谱，根据其亚甲基质子的共振峰积分面积比，结合苯甲酸苄酯和亚氨基二苄的质量计算出亚氨基二苄的含量。5试剂和材料5.1氘代溶剂:氘代氯仿(CDCl3)，纯度99.8%，0.03%V/VTMS，贮存于备有螺纹盖的瓶中。5.2定量内标:苯甲酸苄酯，色谱纯，纯度大于99.9%。1DB32/T1438—20096仪器和设备6.1超导核磁共振波谱仪：最小频率为400MHz6.2样品管：5mm标准核磁样品管6.3分析天平：精确至0.01mg6.4可调移液枪：20-200uL，玻璃注射器：1mL，微量进样器：10uL，100uL7分析步骤7.1核磁仪器测试条件如下：a)测试温度（探头温度）:25℃；b)样品溶液体积：0.7mL；c)累加次数：32次；d)空采次数：4次；e)脉冲延迟：10s；f)脉冲序列：30度脉冲g)数据点：64K；h)谱宽：4000Hz；i)发射中心：1800Hz7.2样品制备7.2.1.亚氨基二苄样品测定前预先50℃真空干燥。7.2.2.用微量进样器吸取苯甲酸苄酯约31.7mg，放置于称量瓶中（注意不要将液滴附在瓶壁上），精确称量(准确至0.01mg)；再取亚氨基二苄约14.3mg置于称有苯甲酸苄酯的称量瓶中，精确称量；称量瓶中加入0.4mL氘代氯仿，使之完全溶解且混合均匀，移取溶液于核磁标准样品管中，用0.3mL氘代氯仿洗涤称量瓶，一并移入核磁管中，供核磁共振波谱仪分析。7.3核磁共振氢谱定量测试7.3.1将待测核磁管放入核磁共振仪，用氘代氯仿(CDCl3)锁场，控温25℃。7.3.2匀场，使之达到最佳状态；采样。注:采样时样品管不旋转。7.3.3图谱处理7.3.3.1傅立叶变换，相位校正，基线校正。7.3.3.2积分：以内标苯甲酸苄酯的亚甲基单峰定标，对试样和内标的定量峰面积进行积分，保证积分曲线两端水平。采样5次，积分，取平均值或去掉极值后取平均值进行计算。定量峰的积分范围见表1表1：亚氨基二苄和苯甲酸苄酯的定量峰定量峰的化学位移定量峰的积分范围定量峰的质子数定量峰的峰形(δH,10-6)(δH,10-6)亚氨基二苄3.0504H单峰3.186-2.911苯甲酸苄酯5.3452H单峰5.513-5.1768结果计算亚氨基二苄质量百分含量Wu按式（1）计算，用％表示式中：ma──苯甲酸苄酯内标精密称重的质量，单位为毫克（mg）；¯¯¯(1)Wu=mamuAuAa48.82106.121002DB32/T1438—2009mu──亚氨基二苄试样精密称样量，单位为毫克（mg）；Aa──苯甲酸苄酯内标中选定测定峰的峰面积的平均值；Au──亚氨基二苄试样中选定测定峰的峰面积的平均值；106.12──苯甲酸苄酯内标的相对分子质量/内标测定峰相应基团中的质子数；48.82──亚氨基二苄试样的相对分子质量/样品测定峰相应基团中的质子数。注：实验结果精确至小数点后二位。9精密度本方法平行测定样品的相对标准偏差应小于1%。3DB32/T1438—2009附录A（资料性附录）苯甲酸苄酯和亚氨基二苄混合物在氘代氯仿（CDCl3）中的1HNMR图谱4