β-半乳糖苷酶染色试剂盒

β-半乳糖苷酶染色试剂盒简介：β-半乳糖苷酶染色试剂盒(β-GalactosidaseStainingKit)是一种基于衰老时SA-β-Gal(senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老状态。此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。Leageneβ-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物，光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescentcells)、静止期细胞(quiescentcells)、永生细胞(immortalcells)或肿瘤细胞等不会染色。对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定，对于普通的切片也至少足够检测100个样品，使用6孔板测定，足够测定100个样品。组成：操作步骤(仅供参考)：(一)贴壁细胞染色：1、对于6孔板中培养的细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定。对于其它类型的培养板，固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。2、吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞。3、吸除PBS或HBSS，每孔加入染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器，不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器配制染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。表1：染色工作液的配制方法:编号名称DE0021100TStorage试剂(A):β-半乳糖苷酶染色固定液100ml4℃试剂(B):X-Gal溶液5ml-20℃避光试剂(C):β-半乳糖苷酶染色液A1ml4℃避光试剂(D):β-半乳糖苷酶染色液B1ml4℃避光试剂(E):β-半乳糖苷酶染色液C100ml4℃避光使用说明书1份β-半乳糖苷酶染色液A10μlβ-半乳糖苷酶染色液B10μlβ-半乳糖苷酶染色液C930μlX-Gal溶液50μl4、37℃孵育过夜，可以用parafilm或保鲜膜封住6孔板防止蒸发。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。5、普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入PBS，4℃可以保存数天；或者加上封片液封片后，4℃可以保存较长时间。(二)悬浮细胞染色：1、离心收集细胞至1.5ml离心管内，用PBS或HBSS洗涤1次，加入β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定。固定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。2、离心，吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞。3、离心，吸除PBS或HBSS，每管加入染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。4、37℃孵育过夜。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。5、取部分染色后的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工作液，然后加入PBS，4℃可以保存数天。如果离心，取细胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存较长时间。(三)组织切片染色：1、对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡和水化处理。对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。2、加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于。3、用PBS浸泡洗涤组织。4、吸除PBS，加入适当量的染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。5、37℃孵育过夜，可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发。最好把整个切片浸泡在染色工作液中。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。6、普通光学显微镜下观察。如不能及时观察，加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。注意事项：1、β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意防护。2、β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件，不能在二氧化碳培养箱中进行染色反应。用于细胞培养的二氧化碳培养箱中较高浓度的二氧化碳会影响染色工作液的pH值，而导致染色失败。3、β-半乳糖苷酶染色液B在刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或Vortex后，沉淀会全部溶解。作为常规，试剂使用前必须确保沉淀全部溶解，并且混匀。4、需自备PBS或HBSS(HanksBalancedSaltSolution)。5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。相关：编号名称CC0032Hanks平衡盐溶液(1×HBSS,含酚红)DC0032Masson三色染色液DH0006苏木素伊红(HE)染色液DE0001碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)DG0005糖原PAS染色液DJ0001普鲁士蓝染色液(Perlsstain,核固红法)TO1013丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)