GB 31660.5-2019 食品安全国家标准 动物性食品中金刚烷胺残留量的测定 液相色谱-串联质

GB31660.5—20192019-09-06发布2020-04-01实施食品安全国家标准动物性食品中金刚烷胺残留量的测定液相色谱-串联质谱法Nationalfoodsafetystandard-Determinationofamantadineresidueinanimalderivedfoodbyliquidchromatography-tandemmassspectrometricmethod发布GB31660.5—2019I前言本标准系首次发布。GB31660.5—20191食品安全国家标准动物性食品中金刚烷胺残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了动物性食品中金刚烷胺残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于猪、鸡和鸭的可食性组织（肌肉、肝脏和肾脏）及禽蛋中金刚烷胺残留量的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中金刚烷胺的残留用1%乙酸乙腈溶液提取，正己烷液液分配去脂，基质固相分散净化，液相色谱-串联质谱正离子模式测定，内标法定量。4试剂和材料4.1试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.1.3正己烷（C6H14）：色谱纯。4.1.4冰乙酸（CH3COOH）。4.1.5甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.6无水硫酸钠（Na2SO4）。4.2溶液配制4.2.11%乙酸乙腈溶液：取冰乙酸10mL，用乙腈稀释至1000mL。4.2.250%乙腈水溶液：取50mL乙腈，用水稀释至100mL。4.2.30.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸，用水稀释至1000mL。4.3标准品GB31660.5—20192金刚烷胺（Amantadine,C10H17N,CAS:768-94-5），含量≥98.0%；D15-金刚烷胺（Amantadine-D15,C10H2D15N,CAS:33830-10-3），含量≥99.0%。4.4标准溶液的制备4.4.1标准贮备液：取金刚烷胺标准品、D15-金刚烷胺标准品各约10mg，精密称定，分别于10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1mg/mL的金刚烷胺和D15-金刚烷胺标准贮备液。-20℃以下保存，有效期3个月。4.4.2标准工作液：分别精密量取上述标准贮备液0.1mL，分别于100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成金刚烷胺、D15-金刚烷胺浓度为1μg/mL的标准工作液。2～8℃保存，有效期2周。4.5材料4.5.1净化吸附剂：PSA（乙二胺-Ｎ-丙基硅烷），粒度40µm。4.5.2滤膜：0.22μm。4.5.3针式过滤器：内填有50mg的PSA净化吸附剂，滤膜孔径0.22μm。5仪器和设备5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。5.3均质机。5.4涡旋混合器。5.5旋转蒸发仪。5.6离心机：转速3000r/min。5.7高速离心机：转速10000r/min。5.8氮吹仪。6试料的制备与保存6.1试料的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。取适量新鲜或冷藏的空白或供试禽蛋，去壳后混合均匀。取匀浆后的供试样品，作为供试试料。取匀浆后的空白样品，作为空白试料。GB31660.5—20193取匀浆后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.2试料的保存-20℃以下保存。7测定步骤7.1提取称取试料2g（准确至±20mg），于50mL离心管中，加D15-金刚烷胺标准工作液20μL，加1%乙酸乙腈溶液10mL，漩涡2min，3000r/min离心5min，上清液转入另一50mL离心管中，重复提取一次，合并两次上清液，备用。7.2净化取备用液，加无水硫酸钠3g、正己烷10mL，涡旋1min，3000r/min离心5min，弃去正己烷层，剩余溶液转至100mL鸡心瓶中，40℃水浴下旋转蒸干，用1.0mL甲醇溶解残渣。（1）加入PSA50mg，涡旋30s，取上清液过滤膜至1.5mL试管中；或者（2）直接匀速通过针式过滤器，呈滴状流入1.5mL试管中。量取滤液0.5mL于离心管中，40℃氮气吹干，加入50%乙腈水溶液0.5mL，涡旋30s，10000r/min离心5min，取上清液供上机测定。7.3标准曲线的制备溶剂标准溶液：准确量取金刚烷胺和D15-金刚烷胺标准工作液适量，用50%乙腈水溶液稀释配制成金刚烷胺浓度为2、4、10、20、100、200μg/L，D15-金刚烷胺浓度均为20μg/L的金刚烷胺系列标准溶液，供液相色谱-串联质谱测定。基质匹配标准溶液：取各自空白组织试料，除不加D15-金刚烷胺标准工作液外，均按上述方法处理分别制得其空白基质溶液，准确量取金刚烷胺和D15-金刚烷胺标准工作液适量，分别用空白基质溶液稀释，配制成金刚烷胺浓度为2、4、10、20、100、200μg/L，D15-金刚烷胺浓度均为20μg/L的系列基质匹配标准溶液，临用现配，供液相色谱-串联质谱测定。7.4测定7.4.1色谱条件a）色谱柱：C18（1502.1mm,3.5μm），或相当者；b）流动相：A：0.1％甲酸水溶液，B：甲醇；c）流速：0.3mL/min；d）进样量：10μL；e）预平衡时间：2min；GB31660.5—20194f）流动相梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序时间，minA，%B，%090101.5901021090510905.190101090107.4.2质谱条件a）离子源：电喷雾离子源；b）扫描方式：正离子扫描；c）检测方式：多反应离子监测（MRM）；d）脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体；e）喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度；f）监测离子参数情况见表2。表2金刚烷胺和D15-金刚烷胺特征离子参考质谱条件化合物定性离子对m/z定量离子对m/z去簇电压，V碰撞能，eV金刚烷胺152.0135.0152.0135.05018152.093.04840D15-金刚烷胺167.3150.3167.3150.348357.4.3定性测定通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液各色谱峰的特征离子相对照定性。试样与标准品保留时间的相对偏差不大于5%；试样特征离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断试样中存在金刚烷胺残留。GB31660.5—20195表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分率相对离子丰度5020～5010～20≤10允许的相对偏差±20±25±30±507.4.4定量测定取试样溶液、溶剂标准溶液或基质匹配标准溶液，作单点或多点校准，按内标法以峰面积比定量，标准溶液及试样溶液中金刚烷胺和D15-金刚烷胺峰面积比均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，金刚烷胺标准溶液特征离子质量色谱图分别见附录A。7.5空白试验除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行测定。8结果计算和表述试料中金刚烷胺的残留量按式（1）计算：mAAC'VA'ACCXissisisiiss…………………………………（1）式中：X—供试试样中金刚烷胺残留量，单位为微克每千克（µg/kg）；Cis—试样溶液中D15-金刚烷胺浓度，单位为微克每升（µg/L）；Cs—标准溶液中金刚烷胺浓度，单位为微克每升（µg/L）；C'is—标准溶液中D15-金刚烷胺浓度，单位为微克每升（µg/L）；Ai—试样溶液中金刚烷胺峰面积；Ais—试样溶液中D15-金刚烷胺峰面积；As—标准溶液中金刚烷胺峰面积；A'is—标准溶液中D15-金刚烷胺峰面积；V—溶解残渣的甲醇体积，单位为毫升（mL）；m—供试试样的质量，单位为克（g）。计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9检测方法的灵敏度、准确度和精密度9.1灵敏度GB31660.5—20196本方法的检测限为1µg/kg，定量限为2µg/kg。9.2准确度本方法在2µg/kg～100µg/kg添加浓度水平上的回收率为70%～120%。9.3精密度本方法批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。GB31660.5—20197附录A（资料性附录）特征离子质量色谱图图A.1金刚烷胺标准溶液特征离子质量色谱图（4μg/L)__________________XICof+MRM(9pairs):152.0/135.0amufromSamp...Max.9.5e4cps.2468Time,min0.05.0e49.5e4Inten...4.65XICof+MRM(9pairs):167.3/150.3amufromSamp...Max.3.1e5cps.2468Time,min0.01.0e52.0e53.0e5Inten...4.64