GBZ∕T 300.160-2017 工作场所空气有毒物质测定 第160部分洗衣粉酶

ICS13.100C52中华人民共和国国家职业卫生标准GBZ/T300.160—2017代替GBZ/T160.81—2004工作场所空气有毒物质测定第160部分：洗衣粉酶Determinationoftoxicsubstancesinworkplaceair—Part160:Enzymesinwashingpowder2017-11-09发布2018-05-01实施GBZ/T300.160—2017I前言本部分为GBZ/T300的第160部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分代替GBZ/T160.81—2004《工作场所空气有毒物质测定生物类化合物》。本部分与GBZ/T160.81—2004相比，主要修改如下：——修改了标准名称；——增加了待测物的基本信息；——改进了空气采样和标准系列浓度的表达；——补充了样品空白要求和方法性能指标。本部分中的主要起草单位和主要起草人：——洗衣粉酶的溶剂洗脱-抗体结合-比色法主要起草单位：复旦大学医学院公共卫生学院。主要起草人：梁友信。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：——GBZ/T160.81—2004。GBZ/T300.160—20171工作场所空气有毒物质测定第160部分：洗衣粉酶1范围GBZ/T300的本部分规定了工作场所空气中洗衣粉酶的溶剂洗脱-抗体结合-比色法。本部分适用于工作场所空气中气溶胶态洗衣粉酶浓度的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GBZ159工作场所空气中有害物质监测的采样规范GBZ/T210.4职业卫生标准制定指南第4部分：工作场所空气中化学物质的测定方法3洗衣粉酶的溶剂洗脱-抗体结合-比色法3.1原理空气中气溶胶态含酶洗衣粉用超细玻璃纤维滤纸采集，洗脱后，与包被在酶标板上的特异性抗体（Ab1）结合，然后加入特异性抗体（Ab2），最后与一连有标记物的抗体（Ab3）结合，再与显色剂反应生成有色化合物，用酶标仪测量吸光度，测定酶的浓度。3.2仪器3.2.1超细玻璃纤维滤纸。3.2.2大采样夹，滤料直径为37mm或40mm。3.2.3小采样夹，滤料直径为25mm。3.2.4空气采样器，流量0L/min～2L/min和0L/min～10L/min。3.2.5烧杯，50mL。3.2.6酶标板和酶标板盖。3.2.7多孔道微量加样器。3.2.8可调微量加样器。3.2.9恒温箱。3.2.10离心管，25mL。3.2.11具塞试管，10mL。3.2.12酶标仪。3.3试剂3.3.1实验用水为去离子水，试剂为分析纯，于4℃冰箱保存。GBZ/T300.160—201723.3.2抗体包被缓冲液，pH9.6±0.2：0.151g碳酸钠和0.293g碳酸氢钠溶于100mL水中，可保存2个月。3.3.3洗板液：29.22g氯化钠、0.186gTris和0.1g牛血清白蛋白(BSA)溶于100mL水中，用6mol/L盐酸溶液调pH至8.0，加入0.05mL吐温20，混匀，可保存7d。3.3.4枸橼酸-磷酸缓冲液，pH5.0±0.2：0.730g枸橼酸和2.387g磷酸氢二钠(Na2HPO4•12H2O)溶于100mL水中，可保存1个月。3.3.5BSA封闭液：2.0gBSA溶于100mL洗板液中。3.3.6洗脱液：2.922g氯化钠、0.093gTris、0.496g硫代硫酸钠(Na2S2O3•5H2O)和0.0147g氯化钙(CaCl2•2H2O)溶于约80mL水中，加入0.1gBSA，溶解后，用6mol/L盐酸溶液调pH至8.0，转移到100mL容量瓶中，定容后加入0.10mL吐温20，混匀，可保存7d。3.3.7邻苯二胺（OPD）溶液，pH5.0：8.0mgOPD置于50mL棕色瓶中，加入15mL枸橼酸-磷酸缓冲液，溶解后，加入5μL过氧化氢(30％)，混匀。临用前配制。若溶液变黄，应重新配制。3.3.8兔抗体包被溶液：用10mL抗体包被缓冲液稀释10μL兔抗血清，混匀。3.3.9豚鼠抗体：用10mL洗板液稀释10μL豚鼠抗体，混匀。3.3.10标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体：用10mL洗板液稀释10μL标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体，混匀。3.3.11硫酸溶液，1mol/L。3.3.12标准酶，用国家认可的洗衣粉酶。3.4样品的采集、运输和保存3.4.1现场采样按照GBZ159执行。3.4.2短时间采样：在采样点，用装好超细玻璃纤维滤纸的大采样夹，以5.0L/min流量采集15min空气样品。3.4.3长时间采样：在采样点，用装好超细玻璃纤维滤纸的小采样夹，以1.0L/min流量采集2h～8h空气样品。3.4.4采样后，打开采样夹，取出滤纸，接尘面朝里对折两次，放入清洁的塑料袋或纸袋中，置清洁容器内运输和保存。样品宜尽快测定。3.4.5样品空白：在采样点，打开装好超细玻璃纤维滤纸的采样夹，立即取出滤纸，放入清洁的塑料袋或纸袋中，然后同样品一起运输、保存和测定。每批次样品不少于2个样品空白。3.5分析步骤3.5.1样品处理：将超细玻璃纤维滤纸放入烧杯内，加25.0mL洗脱液，洗脱20min，不时振摇。样品溶液用滤纸过滤或离心后供测定。3.5.2标准曲线的制备：在8支容量瓶中，用标准酶配制成0.0ng/mL～6.0ng/mL标准系列。于酶标板的每个孔中加100μL兔抗体包被溶液，置4℃冰箱内放置过夜。加样时，加样头不可接触酶标板底部，不容许冰冻。第二天，从冰箱内取出酶标板，翻转，弃去兔抗体包被溶液，在数层纸上拍打，甩尽孔中的兔抗体包被溶液。每个孔用洗板液洗涤3次，每次约250μL。然后加200μLBSA封闭液，加样头不能接触酶标板。盖上酶标板盖，放置1h以上。甩尽孔中液体。若不立即使用，可用酶标板膜封好，可储存2个月。向每个孔中加入50μL标准酶溶液，全部加平行样。加入50μL豚鼠抗体。将酶标板放入37℃恒温箱内，反应90min。取出，每个孔用洗板液洗涤3次，每次约250μL。各加入100μL标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体，再置37℃恒温箱内，反应90min。取出，每个孔用洗板液洗涤3次，每次约250μL。用枸橼酸-磷酸缓冲液冲洗3次。以保持同一时间间隔，向每个孔加入100μLOPD溶液；放入37℃恒温箱内，反应至有合适的黄色生成；向每个孔以保持同一时间间隔，加入150μL硫酸溶液，以终止显色反GBZ/T300.160—20173应。擦净酶标板底部，用酶标仪测定每个孔的吸光度（双波长法的波长为492nm和620nm）。以测得的吸光度值对相应的酶浓度（ng/mL）绘制标准曲线或计算回归方程。3.5.3样品测定：用测定标准系列的操作条件测定样品溶液和样品空白溶液，测得的吸光度值由标准曲线或回归方程得样品溶液中酶浓度(ng/mL)。若样品溶液中酶的浓度超过测定范围，用洗脱液稀释后测定，计算时乘以稀释倍数。3.6计算3.6.1按GBZ159的方法和要求将采样体积换算成标准采样体积。3.6.2按式（1）计算空气中酶的浓度：0025VCC.......................................(1)式中：C——空气中酶的浓度，单位为微克每立方米（μg/m3）；25——样品溶液的体积，单位为毫升（mL)；C0——测得的样品溶液中酶的浓度（减去样品空白），单位为纳克每毫升（ng/mL）；V0——标准采样体积，单位为升（L）。3.6.3空气中的时间加权平均接触浓度（CTWA）按GBZ159规定计算。3.7说明3.7.1本法按照GBZ/T210.4的方法和要求进行研制。本法的定量下限为0.05ng/mL，定量测定范围为0.05ng/mL～6ng/mL；以采集75L空气样品计，最低定量浓度为0.017μg/m3；相对标准偏差为2％～8％，采样效率为95％以上，洗脱回收率为90％以上。3.7.2空气中共存物不干扰测定。_________________________________