安师大微生物学实验考核题库(刘爱民微生物实验指导)

1、观察什么微生物需要用油镜，为什么？答：要看到经染色的细菌的形态和真核生物细胞的形态构造，最好使用油镜头。油镜的焦距和工作距离最短。油镜与其他物镜不同的是载玻片与物镜之的介质不是一层空气，而是一层油脂，称为“油浸系”。利用油镜的目的是增加显微镜的分辨力。2、用油镜观察要注意什么？滴的是什么油？起什么作用？答：使用油镜前要先擦拭镜头，注意镜头与载破片的距离。使用油镜时，需在玻片上滴加香柏油。这是因为油镜的放大倍数较高，而透镜很小，光线通过不同密度的介质物体（玻片→空气→透镜）时，部分光线会发生折射而散失，进入镜筒的光线少，视野较暗，物体观察不清。如在透镜与玻片之间滴加和玻璃折射率（n=1.52）相仿的香柏油（n=1.515），则使进入油镜的光线增多，视野亮度增强，物象清晰3、培养基配好后为什么必须立即灭菌如何检查灭菌后的培养菌是无菌的答：配好的培养基如果不立即灭菌，微生物会利用培养基中的营养物质滋生，最后导致微生物大量繁殖，培养基营养物质流失，培养基变浑浊。将灭菌后的培养基放入37摄氏度温箱中培养24~48小时，无菌生长即可。4、高压蒸汽灭菌开始之前为什么要将锅内的冷空气排尽？答：在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。5、高压蒸汽灭菌方法温度，压力，时间答：0.1MPa,121.3度，15---30MIN6、为什么芽孢染色需要加热，机理答：细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色,若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色(芽孢呈无色透明状).芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上后又难以脱色这一特点而设计的.所有的芽孢染色法都基于同一个原则:除了用着色力强的染料外,还需要加热,以促进芽孢着色,再使菌体脱色,而芽孢上的染料则难以渗出,故仍保留原有的颜色,然后用对比度强的染料对菌体复染,使菌体和芽孢呈现出不同的颜色,因而能更明显地衬托出芽孢,便于观察。芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachitegreen）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。7、观察青霉、曲霉时，为什么要把所取材料放在水中漂洗后再做水装片？答：因为青霉和曲霉产生了很多孢子，在制作成装片前，用水漂洗掉一部分孢子会使实验观察效果更佳。8、酵母菌观察时用美兰染色能区分死、活细胞，其原理是什么？答：美兰是一种无毒性染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美兰对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美兰由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或新陈代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。9、革兰氏染色时涂片为什么不能太厚？染色时为什么要让玻片冷却后才滴加染料？答：A、以免脱色不完全造成假阳性现象。B、大凡加热染色都不能把染料蒸干,染料被蒸干后积聚在玻片以及菌体上,干扰光线穿透影响镜下观察菌体结构情况.而加热是为了促进染液进入菌体内从而使其着色。10、土壤微生物分离纯化实验过程中，酚加到什么培养基中？链霉素加到什么培养基中，它们有什么作用？答：酚加到高氏I号培养基中。链霉素加到马铃薯葡萄糖培养基中。加入抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他杂菌，从而得到纯菌株。11、测了酵母菌大小时，在10X40状态下校正，若目镜测微尺40小格与镜台测微尺10小格相重合，现用目镜测微尺测得某个酵母菌的长度是5格，宽度是2格，求其酵母菌的大小是多少？答：目镜测微尺每小格的长度=两对重合线间镜台测微尺格数X10/两对重合线间的目镜测微尺格数=10X10/40=2.5长：5X2.5宽：2X2.512、细菌的生理生化反应实验中，淀粉水解圈用什么来测定？答：用碘液来测定，在平板上加入碘液，有淀粉的地方为蓝色，淀粉水解圈为无色。13、吲哚反应实验是测定微生物的什么特性？在进行吲哚试验时，向培养基中加入吲哚应注意哪些问题？有什么作用？答：具有色氨酸酶，能分解色氨酸产生吲哚。应沿管壁徐徐加入吲哚试剂，从而产生红色环状化合物即为阳性反应。14、葡萄糖发酵实验、VP反应、甲基红反应与什么发酵类型有联系？这些实验有何意义？答：三个实验都是微生物的生理生化反应；实际意义：1.糖发酵试验：大多数细菌分解糖类物质的能力有很大差异，而且代谢产物也有很大的不同，所有可以通过反应来鉴别细菌2.VP试验：微生物检验中常用的生化反应之一3.甲基红试验：可用于区分大肠杆菌和产气杆菌上任然是有价值的15、在进行糖发酵试验时如何区分氧化产酸和发酵产酸，目的和意义是什么？16、平皿培养时，为什么要倒置?标签为什么要标在培养皿底部？平皿培养时倒置培养可以防止培养皿盖上冷凝水滴落到培养皿上，影响微生物生长；也可以使微生物产生的大量孢子落在培养皿盖上，少量保留在培养皿上，以便于观察和提取。因为培养时培养皿是倒置的，标签标在培养皿底部可以方便培养皿的查找。17、简述培养细菌、放线菌、霉菌、酵母菌用的什么培养基？最适ph是多少?培养温度是多少？培养时间多长？培养基最适ph培养温度培养时间细菌牛肉蛋白陈培养基7.0~7.237度24小时放线菌高氏I号培养基7.2~7.425~30度7~10天霉菌查氏培养基自然25~30度3~4天酵母菌马铃薯培养基自然26~30度2~3天18、在显微镜底下如何区分枯草杆菌和大肠杆菌？根霉和毛霉？曲霉和青霉？（1）革兰氏染色法可使有的细菌染上初染的的紫色，为革兰氏阳性细菌，有的细菌染上复染的的红色，为革兰氏阴性细菌。大肠杆菌是革兰氏阴性菌，染色后为红色，细菌形态为短小的杆状，单个存在。枯草杆菌是革兰氏阳性菌，染色后为紫色，细菌形态为杆状，比大肠杆菌大，可排成链状的，有的菌体里有椭圆芽孢（无色）或在视野中有散在的芽孢。（2）毛霉菌丝为无隔膜的单细胞，多核。毛霉的菌丝体在基质上或基质内能广泛蔓延，有假根和匍匐枝，孢囊梗直接由菌丝体生出，一般单生，分枝较少或不分枝。分枝顶端都有膨大的孢子囊，囊轴与孢囊梗相连处无囊托。根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根，营养菌丝体上产生匍匐枝，匍匐枝的节间形成特有的假根，从假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。孢子囊内囊轴明显，球形或近球形，囊轴基部与梗相连处有囊托。（3）曲霉菌丝有隔膜，菌丝体产生大量的分生孢子梗。分生孢子梗顶端膨大成为顶囊，一般呈球形。项囊表面长满一层或两层辐射状小梗(初生小梗与次生小梗)。最上层小梗瓶状，顶端着生成串的球形分生孢子。以上几部分结构合称为孢子穗。孢子呈绿、黄、橙、褐、黑等颜色。这些都是菌种鉴定的依据。分生孢子梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连。青霉菌属多细胞，营养菌丝体无色、淡色或具鲜明颜色。菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。分生孢子球形、椭圆形或短柱形，光滑或粗糙，大部分生长时呈蓝绿色。有少数种产生闭囊壳，内形成子囊和子囊孢子，亦有少数菌种产生菌核。19、你如何用实验证明自己的革兰氏染色结果是正确的？因为事实上革兰氏染色的成功和实验时的环境条件有很大关系，同样的实验参数，比如染色时间、水洗时间、复染时间等在不同的环境下染色的效果是不同的。那么对未知菌进行染色法鉴定其革兰氏阴性/阳性时，应该首先做一个预实验，取已知的革兰氏阴性菌一株，阳性菌一株，进行革兰氏染色。如果实际染色结果和理论结果相符则可以用这个实验参数，否则应该改变实验参数再试验，直到在当时的实验环境时你的实验参数可以确保染色正确，然后再去染未知菌，得出的染色结果就应该是比较可靠的了。20、要从土壤中分离放线菌应做哪些工作？从土壤中分离放线菌的步骤如下：1.制作高氏一号培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。2.称取土壤10克，放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中，并加入10%酚10滴，以抑制细菌生长。振荡10分钟，制成10:1菌悬液。按照连续稀释分离法，进一步制成10:3菌悬液。3.用移液管吸取0.1毫升10:3菌悬液，注入平板培养基上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培养基上。然后将培养皿倒置于25～30℃温箱中，培养7～10天，培养基上会出现微生医学教.育网搜集整理物菌落。如果菌落的硬度较大，干燥致密，且与基质紧密结合，不易被针挑起，这就是放线菌菌落。4.挑取放线菌菌落，接种于斜面培养基上。21、细菌的染色原理？细胞染色是物理因素和化学因素共同作用的结果，微生物染色所使用的染料，是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性和弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基PH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。22、微生物分离与纯化的常规方法有几种？答：1.平板稀释分离法2.平板画线分离法23、微生物分离与纯化的原理？如何确定平板上某个单个菌落是否为纯培养？答：1.不同微生物个体在特定培养基上形成不同的单一菌落再从所需菌落中取样，移植到新的培养基中去，就达到了分离与纯化的目的，这就是微生物分离与纯化的原理。2.可提前在培养基中加入某种抑制剂造成只利于一种菌生长，而抑制其他菌生长的环境，这样既可淘汰杂菌得到纯菌株。24、灭菌结束时，能否一下子很快排气，为什么？答：不能，必须压力降到0时才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。25、甲基红实验和ＶＰ反应试验的最初作用物以及最终产物有何异同点？为什么会出现最终产物的不同？答：甲基红实验的最初作用物是由葡萄糖产生的有机酸，VP反应实验的最初作用物是由葡萄糖产生的非酸性或中性末端产物，两个反应的最终产物都呈现红色，但产物不同，甲基红试验是甲基红指示剂呈现红色，而VP试验是二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基作用生成红色化合物。26、在配制斜面培养基分装试管时，一般应装多少？为什么？答：分装试管其装量不超过管高的五分之一，目的时防止加塞时沾污棉塞而引起污染。27、接种时怎样保证菌种不被污染？答：接种应在无菌环境下操作，接种前要灼烧接种环，以杀死杂菌。28、接种环接种前后灼烧的目的是什么？为什么在接种前一定要将其冷却？如何判断灼烧过的接种环己冷却？答：接种前灼烧是为了灭菌以杀死一些杂菌，接种后灼烧是为了杀死残留的菌体。若不冷却而直接接种则会造成所接菌种被接种环烫死。将烧红的接种环插入菌种管中，先使环端轻触斜面的顶端或边缘，若发出溅泼声，表明太烫。29、革兰氏染色时大肠杆菌，金黄色葡萄球菌各染上什么颜色？他们属于G+还是G-菌？答：大肠杆菌：G-被染上红色金黄色葡萄球菌：G+被染