药理学8-肝素的抗凝血试验

1试验8肝素对小鼠的抗凝血作用【目的】1.熟悉抗凝血药的筛选方法。2.观察肝素的抗凝作用和硫酸鱼精蛋白的解救效果。【原理】肝素为硫酸化的糖胺聚糖，分子量为3~30kDa，其中硫酸根约占40%，硫酸根呈强酸性，带大量负电荷。肝素能增强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）与凝血酶等活化型凝血因子的亲和力，产生体内外抗凝作用，主要灭活IIa和Xa，也灭活IXa,XIa,XIIa,激肽释放酶和纤溶酶等。硫酸鱼精蛋白呈碱性，带有大量正电荷，如果肝素过量造成出血，则可用硫酸鱼精蛋白中和解救。【材料】1.器材：注射器、电子秤、玻片、针头；2.药品：0.05%肝素溶液、生理盐水、1%硫酸鱼精蛋白，苦味酸；3.动物：小鼠12只，20g左右，雌雄兼用。【试验步骤】1.小鼠标记，称重；2.分组，分为3组，每组4只，分别为A（生理盐水）、B（肝素）和C（肝素+硫酸鱼精蛋白）组；3.给药：A组：腹腔注射生理盐水，0.2ml/10g，10min后测定凝血时间；B组：腹腔注射肝素，0.2ml/10g，10min后测定凝血时间；C组：腹腔注射鱼精蛋白，0.1ml/10g；10min后腹腔注射肝素，0.2ml/10g，10min后测定凝血时间；4.测定凝血时间的方法①眼球后静脉丛取血2滴。眼球后静脉丛取血法：左手拇指及中指抓住头颈部皮肤，左手掌尽量将小鼠全身皮肤向左移，慢慢使小鼠右眼球突出，小鼠头向下充血。取长约2cm的毛细管从内皉间45度角进针，至有抵骨2质的感觉，然后毛细管向外拔出约1-2mm即可有血滴流出。②采出的血滴分别置于洁净的玻片（自来水清洗后用生理盐水润洗，晾干）上，计时；③每隔30s用针头（自来水清洗后用生理盐水润洗）自滴血内连续挑起纤维丝为止，计时。另一滴血作为最后挑起纤维丝的对照。④正常小鼠血液的凝血时间为0.5-2min，如果观察10min无凝血可计时为10min。5.汇总全实验室结果，数据统计分析，得到平均值，标准偏差，StudentT-Test得到P值。【结果】3表1小鼠的凝血时间组别号数体重（g）给药体积（ml）T（min）A组1234B组5678C组9101112表2全实验室小鼠凝血时间（mean±SD）每个实验小组的平均值（min）T（min）P值组别组1组2组3组4组5组6组7组8A组B组C组【注意】玻片法挑动血滴，经横贯血滴直径，连续能挑起纤维丝为凝血时间终点。如果过分挑动，变成纤维血滴则始终不出现纤维丝，所以同时放2滴血，核对另外一滴血很有必要。