动物细胞融合与单克隆抗体

2002年１２月３０日，两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”—电融合仪内孕育新生命。一段时间后，我国首批”太空娃娃”终于顺利诞生。对照实验结果表明，细胞融合率大大提高。STS“太空婚礼”“太空婚礼”科研项目一：“太空婚礼”科研项目二：挑战自我植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术“太空婚礼”植物科研项目计划书项目植物体细胞杂交原理融合前处理促融方法用途过程第一步第二步第三步第四步细胞膜的流动性、细胞的全能性酶解法去壁物理法化学法原生质体的制备原生质体的融合与筛选杂种细胞的形成与培养杂种植株的鉴定与筛选克服远缘杂交不亲和获得具优良性状的杂种植株物理法的融合效率较高,且对细胞（原生质体）的伤害小,易操作、控制和观察。太空中处于失重状态，不同种细胞（原生质体）更容易亲近；为什么在太空中细胞（原生质体）融合率会大大上升？为什么选用物理法诱导？电激是最易使细胞融合的方法请同学们阅读课本P52“动物细胞融合”内容问题：什么是动物细胞融合？它相当于植物体细胞杂交过程的哪一步？它们的过程、基本原理、诱导融合方法和意义是否相同？其最主要用途是？一、动物细胞融合过程、原理与诱导方法为什么灭活的病毒能作诱导剂？灭活可丧失感染性但保留融合活性动物细胞融合过程、原理与诱导方法问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是？与抗原作用的特点？主要分布在？如何获得传统的血清抗体？二、单克隆抗体的概念抗体的传统生产方法从血清中分离抗体该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。多种浆细胞动物体内多种抗体抗原每一个浆细胞只分泌一种特异性抗体，要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的浆细胞，形成细胞群。一个天然抗原物质可有多种和多个抗原决定簇。教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇刺激B淋巴细胞，使其分裂分化出特异性的浆细胞，分泌特异性抗体。提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有哪些可能的设计思路？问题：如何大量生产单克隆抗体？三、单克隆抗体的制备单克隆抗体的概念单个细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和科勒的实验看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？注射抗原：羊的红细胞B淋巴细胞鼠的骨髓瘤细胞融合方法多种杂交细胞选择性培养基筛选1专一抗体检测？克隆化？单克隆抗体有限稀释法培养筛选2注射抗原的目的？从小鼠的脾脏中得到抗羊红细胞的抗体，说明已形成了相应的浆细胞5种细胞杂交瘤细胞体外培养体内培养小鼠腹水细胞培养液来源、发育场所分散细胞实际操作中是如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞（特点）？有限稀释法稀释多次稀释将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。克隆单个杂交瘤细胞，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。单克隆抗体是由同样的抗体分子组成，每个抗体分子带有相同的抗原结合部位，使之具有专一性问题：单克隆抗体的突出优点是什么？特异性强、灵敏度高局限性：因是用小鼠的杂交瘤细胞制成的单抗，所以，对人类有特异性和免疫特性。制备单抗的基础：动物细胞培养制备单抗的原理：膜的流动性和细胞增殖四、单克隆抗体的应用作为诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速运载药物(“生物导弹”—单抗导向，药物为弹头)治疗疾病治疗癌症现在你能主持“太空婚礼”动物科研项目了吗？比较项目植物体细胞杂交单克隆抗体的制备原理融合前处理促融方法用途过程第一步第二步第三步第四步细胞膜的流动性、细胞的全能性膜的流动性、细胞增殖酶解法去壁小鼠免疫处理、细胞分散物理法化学法物理、化学、生物法原生质体的制备融合亲本细胞的准备原生质体的融合与筛选动物细胞融合与两次筛选杂种细胞的形成与培养产特定抗体的杂交瘤细胞培养（方式）杂种植株的鉴定单克隆抗体的分离提纯单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防获得具优良性状的杂种植株