DB15T 1713-2019 “内蒙古大兴安岭黑木耳”菌种生产技术规程

ICS67.080.20B31DB15内蒙古自治区地方标准DB15/T1713—2019“内蒙古大兴安岭黑木耳”菌种生产技术规程TechnicalRegulationsforProductionofAuriculariaauriculaSpeciesinDaxing'anLingMountainsinInnerMongolia2019-11-05发布2019-12-05实施内蒙古自治区市场监督管理局发布DB15/T1713—2019I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12一级菌种..........................................................................13液态菌种..........................................................................14三级菌种..........................................................................2DB15/T1713—2019II前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。本标准由内蒙古大兴安岭重点国有林管理局提出。本标准由内蒙古自治区林业标准化技术委员会（SAM/TC18）归口。本标准起草单位：中国内蒙古森林工业集团有限责任公司、内蒙古大兴安岭林业科学技术研究所、内蒙古自治区林业科学研究院、根河市满归森华食用菌种植农民专业合作社、内蒙古克一河林业局、内蒙古阿里河林业局、阿荣旗卫生和健康委员会、根河市利民食用菌产销专业合作社、内蒙古自治区园艺研究院、内蒙古自治区标准化院。本标准主要起草人：赵旭、李杰、李慧、张幼军、王志臣、胡世德、李世繁、韩怀彦、李楠楠、姜娜、余涛、韩立明、印迪、张娟。DB15/T1713—20191“内蒙古大兴安岭黑木耳”菌种生产技术规程1范围本标准规定了“内蒙古大兴安岭黑木耳”一级菌种、液态菌种、三级菌种。本标准适用于“内蒙古大兴安岭黑木耳”各级菌种生产。2一级菌种2.1常用配方水1000ml、麦麸50g、去皮马铃薯200g、蛋白胨2g、维生素B210mg、磷酸二氢钾2g、葡萄糖20g、硫酸镁0.5g～1g、琼脂10g～20g。2.2灭菌压力升至0.11MPa～0.13MPa,稳定25min～30min，温度降至80℃以下，取出试管摆斜面。2.3接种培养在无菌环境下进行操作，25℃恒温暗培养10d～15d。3液态菌种3.1摇瓶制作3.1.1常用配方水1000ml、麦麸50g、去皮马铃薯200g、蛋白胨2g、维生素B210mg、磷酸二氢钾2g、葡萄糖10g、硫酸镁2g、赤砂糖15g、消泡剂1滴。3.1.2灭菌压力升至0.11MPa～0.13MPa,稳定25min～30min，温度降至90℃以下，取出三角瓶。3.1.3接种培养在无菌环境下进行，每100ml摇瓶中加入2㎜～3㎜一级菌种块7～10块，120r/min～150r/min，25℃恒温暗摇7d。3.2液态菌罐3.2.1常用配方（罐容量600L，接菌数25000袋～30000袋）菌罐加水2/3，面粉0.67%、豆粉2650g、赤砂糖4000g、消泡剂100ml、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%。DB15/T1713—201923.2.2制作过程按下列步骤完成：a)菌罐内注水2/3，加温至40℃时适当放出水与培养基一起用搅拌机搅拌均匀；b)水温到90℃后倒入搅拌均匀的培养基、消泡剂，菌罐盖封紧，加热至121℃～123℃后保持50min；c)菌罐夹层里注入凉水降温，罐内温度降到28℃时开始接菌，接菌前房间应净化杀菌；d)菌罐的注料口处用酒精棉圈套好点燃棉圈，在燃烧状态下快速倒入两瓶三角瓶菌种，封闭注料口熄灭火焰；e)菌罐温度24℃～26℃，洁净培养4d～6d；f)每天观察菌球的生长状态是否正常，正常的继续培养，不正常的终止培养。4三级菌种4.1常用配方柞桦木屑79%、麦麸16%、豆粉3%、白灰1%、石膏1%。4.2制作培养基选料和配制上应把握好以下各点：a)边搅拌边加水，搅拌均匀后含水量60～62%，PH值在7.5～8.5，装袋灭菌；b)菌包要装实，上下松紧一致，料面平整无散料，袋料紧贴，料袋无褶皱。4.3灭菌高温蒸汽灭菌要求：a)常压蒸汽灭菌：温度100℃保持8h～10h，焖锅2h～3h；移入冷却室冷却；b)高压灭菌：温度121℃～123℃保持2.5h～3h；自然降温至80℃以下，出锅冷却。4.4接菌4.4.1基本要求基本要求包含如下内容：a)接菌室的基本要求：接菌室设在灭菌室与培养室之间，高2.5m，接菌室外设缓冲间，供工作人员换衣帽鞋等；接菌室墙壁、屋顶、地面平整、光滑、密封，便于彻底消毒，接菌室与缓冲室上方各装一只30W的紫外线灯，接种前后照射30min～60min；b)接种人员卫生要求：工作人员取得健康合格证后方可上岗；进入接菌室时应穿戴整洁的工作服，帽、鞋、戴胶套，不得化妆、佩戴饰品、喷洒香水。4.4.2接菌前准备按以下步骤完成：a)接菌室清扫卫生后，将菌种、消毒棉、丁腈手套、海绵塞、接种工具等所用物品全部拿入室内，打开紫外线灯后人员退出；b)1h后，关闭紫外线灯，打开排气设备10min后，工作人员进行接菌。DB15/T1713—201934.4.3接菌按以下步骤完成：a)先用酒精浸泡后的消毒棉擦拭接菌枪头，在酒精灯火焰上均匀烧片刻，开始接菌，每段菌袋注入液态菌量准确控制在15ml～20ml；b)在接菌过程中，每完成一筐，应在酒精灯火焰上消毒接菌枪，避免菌枪被杂菌污染；c)接菌枪枪头探进袋底，准确注入15ml～20ml液态菌后，快速收回，塞好棉塞，操作人员做到相互配合、动作连贯。4.5培养环境要求应符合以下要求：a)接菌后的三级菌袋要迅速移入培养车间，车间上、下方设有通风口、换气窗；b)三级菌袋整齐的摆放在培养架上，保证菌袋间通气均匀；c)培养初期菌袋间温度控制在25℃～28℃；d)培养中期（11d～20d）袋温应该控制在23℃；e)培养后期（菌丝长满2/3袋）袋温应该控制在20℃左右；f)培养过程中，发现有杂菌感染的菌袋应取出，另行处理；g)每天上午打开换气窗通风30min，保证发菌均匀；h)三级菌袋培养过程中，保证黑暗保温、定时通风。4.6优质菌种判定判定应符合以下标准：a)菌丝洁白无杂菌，棉塞纸盖均无霉点，菌丝长满袋后，表面分泌茶色液滴，有少数原基形成，可视为正常；b)打开海绵塞有黑木耳独特的香味，无霉味和酸臭味；c)从菌袋中随机挖取一块菌种，成块而有韧性，不松散；d)菌种块接于新的培养基上，在25℃下培养24h～28h菌种块萌发正常。_________________________________