DB34T 3304-2018 中草药中16种多环芳烃的测定 气相色谱质谱法

ICS65.050B50DB34安徽省地方标准DB34/T3304—2018中草药中16种多环芳烃的测定气相色谱质谱法Determinationof16sixteenpolycyclicaromatichydrocarbonsinChinesemedicinalherbs-GC/MSmethod文稿版次选择2018-12-29发布2019-01-29实施安徽省市场监督管理局发布DB34/T3304—2018I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院、安徽中青检验检测有限公司、上海海关动植物与食品检验检疫技术中心。本标准主要起草人：周典兵、韩芳、丁磊、宋伟、吕亚宁、唐菲、胡艳云、盛旋、郑平、邓晓军。DB34/T3304—20181中草药中16种多环芳烃的测定气相色谱质谱法1范围本标准规定了中草药中萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并(a)蒽、屈、苯并(b)荧蒽、苯并(k)荧蒽、苯并(a)芘、茚并(1,2,3-cd)芘、二苯并(a,h)蒽和苯并(g,h,i)苝等16种多环芳烃测定的气相色谱质谱法。本标准适用于黄芪、白芍、石斛、桑皮、番泻叶、菊花、绞股蓝、苦杏仁、茯苓等中草药中16种多环芳烃的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法原理试样中多环芳烃用正己烷-丙酮溶液超声提取，采用凝胶渗透色谱仪净化，供气相色谱-质谱仪测定，内标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1正己烷：色谱纯。4.2丙酮：色谱纯。4.3环己烷：色谱纯。4.4乙酸乙酯：色谱纯。4.5正己烷+丙酮（1：1，体积比）：等体积的正己烷和丙酮互溶。4.6乙酸乙酯+环己烷（1：1，体积比）：等体积的乙酸乙酯和环己烷互溶。4.7标准物质：萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并(a)蒽、屈、苯并(b)荧蒽、苯并(k)荧蒽、苯并(a)芘、茚并(1,2,3-cd)芘、二苯并(a,h)蒽和苯并(g,h,i)苝等16种多环芳烃标准储备液的浓度均为2g/L，纯度≥99％。4.8氘代内标标准物质：氘代萘-D8，氘代苊D10,氘代-菲D10，氘代-屈D12和氘代-苝D12混合氘代内标标准储备液的浓度均为2g/L，纯度≥99％。4.9多环芳烃标准使用溶液（2000μg/L）：准确吸取适量体积的混合标准贮备溶液(4.7)，用正己烷（4.1）稀释至所需浓度，保存于-18℃冰箱。DB34/T3304—201824.10多环芳烃内标使用溶液（2000μg/L）：准确吸取适量体积的混合内标标准贮备溶液(4.8)，用正己烷（4.1）稀释至所需浓度，保存于-18℃冰箱。4.11多环芳烃混合标准工作溶液：吸取适量多环芳烃标准使用溶液（4.9）和适量多环芳烃内标使用溶液（4.10）用正己烷配制成多环芳烃浓度为2μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L和含内标物浓度为50μg/L的混合标准工作溶液。5仪器和设备5.1气相色谱-质谱仪：配有EI源。5.2凝胶渗透色谱仪。5.3分析天平：感量为0.01g。5.4旋转蒸发仪。5.5离心机：不低于5000r/min。5.6氮吹仪。5.7涡旋混合器。5.8超声波清洗器。5.9粉碎机。6试样制备与保存取代表性黄芪、白芍、石斛、桑皮、番泻叶、菊花、绞股蓝、苦杏仁、茯苓等样品取不少于200g，用粉碎机粉碎，过60目筛，取通过筛网的药材粉末装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于0℃～4℃保存。7分析步骤7.1提取称取2g（精确至0.01g）样品于50mL离心管中，向其中添加50μL2000μg/L的5种PAHs-D混标，加入20mL正己烷-丙酮(1:1,v/v)混合溶液超声提取30min，5000r/min离心5min，移取上清液于100mL磨口烧瓶中。再向离心管中加入20mL正己烷-丙酮(1:1,v/v)混合溶液，重复提取一次，合并提取液于上述磨口烧瓶中，40℃水浴下旋转蒸发近干，用10mL乙酸乙酯-环己烷（4.6）涡旋溶解残渣，过有机相滤膜转入进样管中准备净化。7.2凝胶渗透色谱净化以流速5.0mL/min乙酸乙酯+环己烷（1：1，体积比）为流动相，进样5mL，收集26min～51min的馏分，收集液于40℃水浴中旋转浓缩至近干，用乙酸乙酯-环己烷（4.6）转移到5mL带刻度的离心管中，于40℃水浴中氮气吹至近干，以正己烷定容到1.0mL，涡旋溶解，待测。8气相色谱-质谱联用仪测定（GC-MS）8.1GC-MS分析条件a)色谱柱：DB-5MS，30m0.25mm0.25µm，或相当者；DB34/T3304—20183b)柱温：初始温度80℃，保持1min，以25℃/min升温至230℃，保持6min，再以10℃/min升温至300℃，保持6min；c)进样口温度：280℃；d)色谱-质谱接口温度：280℃；e)离子源温度：230℃；f)载气：氦气，流速1.1mL/min，纯度≥99.999％；g)进样量：1.0µL；h)进样方式：不分流进样；i)电离方式：EI；j)离子化能量：70eV；k)数据采集模式：SIM(参见附录A)；l)溶剂延时：3.5min。8.2定性测定根据色谱峰的保留时间并按照附录B中多环芳烃的定性离子进行定性分析，定性依据为：a)在相同的测试条件下被测样品色谱峰的保留时间与标准工作液相一致；b)每个组分至少要选择监测3个特征离子，被测样品的监测离子的相丰度与标准工作溶液的相对丰度两者之差应符合表1要求。表1定性离子相对丰度的最大允许偏差相对离子丰度＞50％＞20％至50％＞10％至20％≤10％允许的相对偏差±10％±15％±20％±50％8.3定量测定按8.1仪器条件对混合标准工作溶液(4.11)和待测溶被(7.2)进行分析，按照附录A中的定量离子和指定的内标物质，以标准溶液中被测组分峰面积和内标物质峰面积的比值为纵坐标，标准溶液中被测组分浓度和内标物质浓度的比值为横坐标绘制标准曲线，用标准曲线对试样进行定量，试样溶液中待测物的响应值均应在本方法线性范围内。8.4空白试验除不加试样外，均按上述分析步骤进行。9结果计算测试溶液中多环芳怪含量由仪器工作站按内标法自动计算。试样中多环芳烃的含量按式(1)计算，计算结果需扣除空白值。1000mVciXi....................................(1)式中：Xi——试样中多环芳烃i组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；ci——测定溶液中多环芳烃i组分的含量，单位为微克每升（μg/L）；v——试样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m——试样液所代表试样的质量，单位为克（g）。DB34/T3304—20184注：含量大于等于10μg/kg时，保留三位有效数字；含量小于10μg/kg，保留两位有效数字。10定量限本方法多环芳烃的定量限参见附录A。11精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20％。DB34/T3304—20185AA附录A（资料性附录）16种多环芳烃和内标物的保留时间、定性离子、定量离子和定量限表A.116种多环芳烃和内标物的保留时间、定性离子、定量离子和定量限序号化学名称保留时间（min）特征碎片离子定量限（μg/kg）定量内标物定性定量内标1萘-D84.431136,108,137136/1萘4.446128,127,1021285萘-D82苊烯6.010152,76,631525苊-D103苊6.189152,76,6315254芴6.692166,165,1391665内标2苊-D106.156164,162,160164/5菲7.708178,152,891785菲-D106蒽7.762178,152,891785内标3菲-D107.681188,94,80188/7荧蒽9.631202,200,1012025屈-D128芘10.142202,200,10120259苯并[a]蒽14.649228,114,101228510屈14.801228,114,1012285内标4屈-D1214.703240,236,120240/11苯并[b]荧蒽18.348252,126,1132525苝-D1212苯并[k]荧蒽18.432252,126,113252513苯并[a]芘19.130252,126,113252514茚苯[1,2,3-cd]芘21.992276,277,138276515二苯并[a,h]蒽22.084278,276,138278516苯并[g,h,i]芘22.680276,277,1382765内标5苝-D1219.282264,263,260264/DB34/T3304—20186BB附录B（资料性附录）多环芳烃标准物质的总离子流色谱图多环芳烃标准物质的总离子流色谱图图中：1——萘12——苯并[k]荧蒽2——苊烯13——苯并[a]芘3——苊14——茚苯[1,2,3-cd]芘4——芴15——二苯并[a,h]蒽5——菲16——苯并[g,h,i]芘6——蒽内标1——萘-D87——荧蒽内标2——苊-D108——芘内标3——菲-D109——苯并[a]蒽内标4——屈-D1210——屈内标5——苝-D1211——苯并[b]荧蒽图B.116种多环芳烃和5种内标物的总离子流色谱图_________________________________