DB34T 3476-2019 饲料中恩拉霉素的测定 高效液相色谱法

ICS65.120B46DB34安徽省地方标准DB34/T3476—2019饲料中恩拉霉素的测定高效液相色谱法DeterminationofenramycininfeedsHighperformanceliquidchromatographyenramycinmethod文稿版次选择2019-12-25发布2020-01-25实施安徽省市场监督管理局发布DB34/T3476—2019I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：合肥中龙神力动物药业有限公司、安徽省兽药饲料监察所、安徽省动物疫病预防与控制中心、肥西县动物疫病预防控制中心、宣州区畜牧兽医局、安徽省畜牧技术推广总站、宿州市动物卫生监督所、中国科学技术大学附属第一医院、合肥市动物疫病预防控制中心。本标准起草人：蔡一杰、陈静、董先敏、刘文文、李瑞、杨清、黄莺、王群、许晓靖、孟庆娟、吴蕾、王雨霜、沈岚。DB34/T3476—20191饲料中恩拉霉素的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中恩拉霉素含量测定的高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中恩拉霉素含量测定。本标准定量限为1.0mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3原理试样中的恩拉霉素经丙酮盐酸溶液超声提取，过滤后经色谱柱分离，用高效液相紫外检测器检测，外标法定量。4试剂和材料4.1除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，用水符合GB/T6682中一级用水的规定。4.2乙腈：色谱纯。4.3磷酸二氢钠。4.4丙酮。4.5盐酸。4.6流动相：0.05mol/L磷酸二氢钠+乙腈，按体积比70:30（v/v）。4.7稀释液：丙酮-2mol/L盐酸-水(20:1:21)(v/v)。4.8恩拉霉素标准品：CAS号1115-82-5，纯度≥98.0％。4.9恩拉霉素标准溶液的制备4.9.1恩拉霉素标准溶液贮备液：精确称取20mg恩拉霉素标准品(精确至0.01mg)于100mL容量瓶中，用稀释液（4.7）溶解，冷却，此溶液浓度为200μg/mL。此溶液现配现用。4.9.2恩拉霉素标准工作溶液：分别吸取贮备液（4.9.1）0.2ml、1mL、2mL、5mL、10mL、20mL于200mL容量瓶中，用稀释液（4.7）定容，标准工作溶液系列浓度分别为0.4μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。5仪器和设备DB34/T3476—201925.1高效液相色谱仪(配紫外检测器)。5.2分析天平：感量1mg、0.01mg。5.3离心机：3000r/min。5.4超声波仪。5.5分析筛：孔径0.42mm。5.6粉碎机。5.7微孔滤膜：孔径0.45μm尼龙滤膜。6试样的制备按GB/T14699.1规定采样，选取饲料样品500ｇ以上，四分法缩减约100ｇ，混合均匀，磨碎，全部通过分析筛(5.5)，充分混匀，装入磨口瓶中备用。7分析步骤7.1提取7.1.1称取试样适量（配合饲料5.0g、浓缩饲料3.0g、预混合饲料1.0g），精确至0.001g，置于100mL容量瓶中，用稀释液（4.7）准确定容，置于超声波仪（5.4）超声提取30min。7.1.2将试样提取液（7.1.1）4ml转移至离心管，3000r/min，离心5min，取上清液2mL用0.45μm尼龙滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机测定。7.2高效液相色谱条件7.2.1色谱柱：C18型柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或相当性能C18柱；7.2.2检测波长：267nm；7.2.3流动相：0.05mol/L磷酸二氢钠+乙腈，按体积比70:30（v/v）；7.2.4流速：1.0mL/min；7.2.5柱温：室温；7.2.6进样体积：10μL。7.3上机测定按上述色谱条件，分别将恩拉霉素标准工作溶液（4.9.2））和试液（7.1.2）上机测定，以单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。色谱图参见附录A。7.4结果的计算与表述7.4.1计算公式结果按式(1)计算：.................................(1)式中：X——试样中恩拉霉素含量，单位为毫克/每千克（mg/kg）；C——试液色谱峰对应的恩拉霉素浓度，单位为微克/每毫升（μg/mL）；DB34/T3476—20193m——试样质量，单位为克（g）；V——定容体积，单位为毫升（mL）；f——稀释倍数。7.4.2结果表示平行测定结果用算术平均值之和表示，计算结果保留3位有效数字。8精密度在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。DB34/T3476—20194AA附录A（资料性附录）恩拉霉素标准溶液的液相色谱图图A.1恩拉霉素标准溶液的液相色谱图_________________________________