GB 5009.257-2016 食品安全国家标准 食品中反式脂肪酸的测定

书书书!#$%&’’()*犌犅５００９．２５７—２０１６!#$%&’(!)*+,-./01２０１６０８３１23２０１７０３０１45!#$%&’’(+,&-.,/01223书书书犌犅５００９．２５７—２０１６Ⅰ　　　　前　　言　　本标准代替ＧＢ／Ｔ２２１１０—２００８《食品中反式脂肪酸的测定　气相色谱法》、ＧＢ／Ｔ２２５０７—２００８《动植物油脂　植物油中反式脂肪酸异构体含量的测定　气相色谱法》、ＳＮ／Ｔ１９４５—２００７《食品中反式脂肪酸含量的测定方法　毛细管气相色谱法》。本标准与所代替标准相比，主要变化如下：———标准名称修改为“食品安全国家标准　食品中反式脂肪酸的测定”；———将适用范围扩充至动物油脂及含动物油脂的食品；———将分析物扩充至Ｃ１６：１ｔ～Ｃ２２：１ｔ等１６种反式脂肪酸。犌犅５００９．２５７—２０１６１　　　　食品安全国家标准食品中反式脂肪酸的测定１　范围本标准规定了食品中反式脂肪酸及异构体的气相色谱测定方法。本标准适用于动植物油脂、氢化植物油、精炼植物油脂及煎炸油和含动植物油脂、氢化植物油、精炼植物油脂及煎炸油食品中反式脂肪酸的测定。本标准不适用于油脂中游离脂肪酸（ＦＦＡ）含量大于２％食品样品的测定。２　原理动植物油脂试样或经酸水解法提取的食品试样中的脂肪，在碱性条件下与甲醇进行酯交换反应生成脂肪酸甲酯，并在强极性固定相毛细管色谱柱上分离，用配有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行测定，面积归一化法定量。３　试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的二级水。３．１　试剂３．１．１　盐酸（ＨＣｌ，ρ２０＝１．１９）：含量３６％～３８％。３．１．２　乙醚（Ｃ４Ｈ１０Ｏ）。３．１．３　石油醚：沸程３０℃～６０℃。３．１．４　无水乙醇（Ｃ２Ｈ６Ｏ）：色谱纯。３．１．５　无水硫酸钠：使用前于６５０℃灼烧４ｈ，贮于干燥器中备用。３．１．６　异辛烷（Ｃ８Ｈ１８）：色谱纯。３．１．７　甲醇（ＣＨ３ＯＨ）：色谱纯。３．１．８　氢氧化钾（ＫＯＨ）：含量８５％。３．１．９　硫酸氢钠（ＮａＨＳＯ４）。３．２　试剂配制氢氧化钾甲醇溶液（２ｍｏｌ／Ｌ）：称取１３．２ｇ氢氧化钾，溶于８０ｍＬ甲醇中，冷却至室温，用甲醇定容至１００ｍＬ。石油醚乙醚溶液（１＋１）：量取５００ｍＬ石油醚与５００ｍＬ乙醚混合均匀后备用。３．３　标准品脂肪酸甲酯标准品：种类参见表Ａ．１，纯度均＞９９％。犌犅５００９．２５７—２０１６２　　　　３．４　标准溶液配制３．４．１　脂肪酸甲酯标准储备液：分别准确称取反式脂肪酸甲酯标准品各１００ｍｇ（精确至０．１ｍｇ）于２５ｍＬ烧杯中，分别用异辛烷溶解并转移入１０ｍＬ容量瓶中，准确定容至１０ｍＬ，此标准储备液的浓度为１０ｍｇ／ｍＬ。在（－１８±４）℃下保存。３．４．２　脂肪酸甲酯混合标准中间液（０．４ｍｇ／ｍＬ）：准确吸取标准储备液各１ｍＬ于２５ｍＬ容量瓶中，用异辛烷定容，此混合标准中间液的浓度为０．４ｍｇ／ｍＬ，在（－１８±４）℃下保存。３．４．３　脂肪酸甲酯混合标准工作液：准确吸取标准中间液５ｍＬ于２５ｍＬ容量瓶中，用异辛烷定容，此标准工作溶液的浓度为８０μｇ／ｍＬ。４　仪器和设备４．１　气相色谱仪：配氢火焰离子化检测器。４．２　恒温水浴锅。４．３　涡旋振荡器。４．４　离心机：转速在０ｒ／ｍｉｎ～４０００ｒ／ｍｉｎ之间。４．５　具塞试管：１０ｍＬ、５０ｍＬ。４．６　分液漏斗：１２５ｍＬ。４．７　圆底烧瓶：２００ｍＬ，使用前于１００℃烘箱中恒重。４．８　旋转蒸发仪。４．９　天平：感量为０．１ｇ、０．１ｍｇ。５　分析步骤５．１　试样制备５．１．１　固态样品取有代表性的供试样品５００ｇ，于粉碎机中粉碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封并标识，于０℃～４℃下保存。５．１．２　半固态脂类样品取有代表性的样品５００ｇ，置于烧杯中，于６０℃～７０℃水浴中融化，充分混匀，冷却后均分成两份，分别装入洁净容器中，密封并标识，于０℃～４℃下保存。５．１．３　液态样品取有代表性的样品５００ｇ，充分混匀后均分成两份，分别装入洁净容器中，密封并标识，于０℃～４℃下保存。５．２　分析步骤５．２．１　动植物油脂称取６０ｍｇ油脂，置于１０ｍＬ具塞试管中，加入４ｍＬ异辛烷充分溶解，加入０．２ｍＬ氢氧化钾甲醇溶液，涡旋混匀１ｍｉｎ，放至试管内混合液澄清。加入１ｇ硫酸氢钠中和过量的氢氧化钾，涡旋混匀３０ｓ，于４０００ｒ／ｍｉｎ下离心５ｍｉｎ，上清液经０．４５μｍ滤膜过滤，滤液作为试样待测液。犌犅５００９．２５７—２０１６３　　　　５．２．２　含油脂食品（除动植物油脂外）５．２．２．１　食品中脂肪的测定固体和半固态脂类试样：称取均匀的试样２．０ｇ（精确至０．０１ｇ，对于不同的食品称样量可适当调整，保证食品中脂肪量不小于０．１２５ｇ）置于５０ｍＬ试管中，加入８ｍＬ水充分混合，再加入１０ｍＬ盐酸混匀；液态试样：称取均匀的试样１０．００ｇ置于５０ｍＬ试管中，加入１０ｍＬ盐酸混匀。将上述试管放入６０℃～７０℃水浴中，每隔５ｍｉｎ～１０ｍｉｎ振荡一次，约４０ｍｉｎ～５０ｍｉｎ至试样完全水解。取出试管，加入１０ｍＬ乙醇充分混合，冷却至室温。将混合物移入１２５ｍＬ分液漏斗中，以２５ｍＬ乙醚分两次润洗试管，洗液一并倒入分液漏斗中。待乙醚全部倒入后，加塞振摇１ｍｉｎ，小心开塞，放出气体，并用适量的石油醚乙醚溶液（１＋１）冲洗瓶塞及瓶口附着的脂肪，静置１０ｍｉｎ～２０ｍｉｎ至上层醚液清澈。将下层水相放入１００ｍＬ烧杯中，上层有机相放入另一干净的分液漏斗中，用少量石油醚乙醚溶液（１＋１）洗萃取用分液漏斗，收集有机相，合并于分液漏斗中。将烧杯中的水相倒回分液漏斗，再用２５ｍＬ乙醚分两次润洗烧杯，洗液一并倒入分液漏斗中，按前述萃取步骤重复提取两次，合并有机相于分液漏斗中，将全部有机相过适量的无水硫酸钠柱，用少量石油醚乙醚溶液（１＋１）淋洗柱子，收集全部流出液于１００ｍＬ具塞量筒中，用乙醚定容并混匀。精准移取５０ｍＬ有机相至已恒重的圆底烧瓶内，５０℃水浴下旋转蒸去溶剂后，置１００℃±５℃下恒重，计算食品中脂肪含量；另５０ｍＬ有机相于５０℃水浴下旋转蒸去溶剂后，用于反式脂肪酸甲酯的测定。５．２．２．２　脂肪酸甲酯的制备准确称取６０ｍｇ经５．２．２．１步骤提取的脂肪（未经１００℃±５℃干燥箱加热），置于１０ｍＬ具塞试管中，按５．２．１规定的步骤操作，得到试样待测液。５．３　仪器参考条件５．３．１　毛细管气相色谱柱：ＳＰ２５６０聚二氰丙基硅氧烷；柱长１００ｍ×０．２５ｍｍ，膜厚０．２μｍ，或性能相当者。５．３．２　检测器：氢火焰离子化检测器。５．３．３　载气：高纯氦气９９．９９９％。５．３．４　载气流速：１．３ｍＬ／ｍｉｎ。５．３．５　进样口温度：２５０℃。５．３．６　检测器温度：２５０℃。５．３．７　程序升温：初始温度１４０℃，保持５ｍｉｎ，以１．８℃／ｍｉｎ的速率升至２２０℃，保持２０ｍｉｎ。５．３．８　进样量：１μＬ。５．３．９　分流比：３０∶１。５．４　定量测定将标准工作溶液和试样待测液分别注入气相色谱仪中，根据标准溶液色谱峰响应面积，采用归一化法定量测定。５．５　定性确证在５．３测定条件下，样液中反式脂肪酸的保留时间应在标准溶液保留时间的±０．５％范围内，标准品的气相色谱图参见图Ｂ．１，各反式脂肪酸的参考保留时间如表１所示。犌犅５００９．２５７—２０１６４　　　　表１　反式脂肪酸的参考保留时间反式脂肪酸甲酯参考保留时间／ｍｉｎＣ１６：１９ｔ２８．４０２Ｃ１８：１６ｔ３４．１６５Ｃ１８：１９ｔ３４．３８４Ｃ１８：１１１ｔ３４．５６７Ｃ１８：２９ｔ，１２ｔ３６．５３５Ｃ１８：３９ｔ，１２ｔ，１５ｔ３８．７７３Ｃ１８：３９ｔ，１２ｔ，１５ｃ＋Ｃ１８：３９ｔ，１２ｃ，１５ｔ３９．４５９Ｃ１８：３９ｃ，１２ｔ，１５ｔ＋Ｃ１８：３９ｃ，１２ｃ，１５ｔ３９．８８３Ｃ１８：３９ｃ，１２ｔ，１５ｃ４０．４００Ｃ１８：３９ｔ，１２ｃ，１５ｃ４０．５１８Ｃ２０：１１１ｔ４０．４００Ｃ２２：１１３ｔ４６．５７１５．６　空白试验空白试验指除不加试验样品外，其他采用与样品分析完全相同的试验步骤、试剂和用量进行操作。６　分析结果的表述反式脂肪酸含量是以反式脂肪（％，质量分数）报告，反式脂肪含量是以反式脂肪酸甲酯百分比含量的形式进行计算。６．１　食品中脂肪的质量分数的计算食品中脂肪的质量分数按式（１）计算：狑ｚ＝犿１－犿０犿２×１００％…………………………（１）　　式中：狑ｚ———试样中脂肪的质量分数，％；犿１———圆底烧瓶和脂肪的质量，单位为克（ｇ）；犿０———圆底烧瓶的质量，单位为克（ｇ）；犿２———试样的质量，单位为克（ｇ）。６．２　相对质量分数的计算各组分的相对质量分数按式（２）计算：狑犡＝犃犡×犳犡犃ｔ×１００％…………………………（２）犌犅５００９．２５７—２０１６５　　　　　　式中：狑犡———归一化法计算的反式脂肪酸组分犡脂肪酸甲酯相对质量分数，％；犃犡———组分犡脂肪酸甲酯峰面积；犳犡———组分犡脂肪酸甲酯的校准因子，化合物的校正因子见表Ｄ．１；犃ｔ———所有峰校准面积的总和，除去溶剂峰。６．３　计算脂肪中反式脂肪酸的含量脂肪中反式脂肪酸的质量分数按式（３）计算：狑ｔ＝∑狑犡…………………………（３）　　式中：狑ｔ———脂肪中反式脂肪酸的质量分数，％；狑犡———归一化法计算的组分犡脂肪酸甲酯相对质量分数，％。６．４　计算食品中反式脂肪酸的含量食品中反式脂肪酸的质量分数按式（４）计算：狑＝狑ｔ×狑ｚ…………………………（４）　　式中：狑———食品中反式脂肪酸的质量分数，％；狑ｔ———脂肪中反式脂肪酸的质量分数，％；狑ｚ———食品中脂肪的质量分数，％。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，大于１．０％的结果保留三位有效数字，小于等于１．０％的结果保留两位有效数字。７　精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的１５％。８　其他本方法的检出限为０．０１２％（以脂肪计），定量限为０．０２４％（以脂肪计）。犌犅５００９．２５７—２０１６６　　　　附　录　犃标准品信息　　表Ａ．１给出了脂肪酸甲酯化学信息表。表犃．１　脂肪酸甲酯化学信息表归类化合物分子简式ＣＡＳ饱和脂肪酸甲酯丁酸甲酯Ｃ４：０６２３４２７己酸甲酯Ｃ６：０１０６７０７辛酸甲酯Ｃ８：０１１１１２６癸酸甲酯Ｃ１０：０１１０４２９十一烷酸甲酯Ｃ１１：０６７４２５４７月桂酸甲酯Ｃ１２：０１１１８２０十三烷酸甲酯Ｃ１３：０１７３１８８０豆蔻酸甲酯Ｃ１４：０１２４１０７十五烷酸甲酯Ｃ１５：０７１３２６４１棕榈酸甲酯Ｃ１６：０１１２３９０十七烷酸甲酯Ｃ１７：０１７３１９２６硬脂酸甲酯Ｃ１８：０１１２６１８花生酸甲酯Ｃ２０：０１１２０２８１二十一烷酸甲酯Ｃ２１：０６０６４９００山嵛酸甲酯Ｃ２２：０９２９７７１二十三烷酸甲酯Ｃ２３：０２４３３９７８二十四烷酸甲酯Ｃ２４：０２４４２４９１顺式脂肪酸甲酯顺９十四碳烯酸甲酯Ｃ１４：１９ｃ５６２１９０６８十五烯酸甲酯Ｃ１５：１１０ｃ９０１７６５２６棕榈油酸甲酯Ｃ１６：１９ｃ１１２０２５８十七碳烯酸甲酯Ｃ１７：１１０ｃ３１４２４１６５十八碳烯酸甲酯Ｃ１８：１６ｃ２７７７５８４油酸甲酯Ｃ１８：１９ｃ１１２６２９异油酸甲酯Ｃ１８：１１１ｃ１９３７６３９花生烯酸甲酯Ｃ２０：１２３９００９２二十二烯酸甲酯Ｃ２２：１１１２０３４９二十四碳烯酸甲酯Ｃ２４：１２７３３８８２亚油酸甲酯Ｃ１８：２１１２６３０二十碳二烯酸甲酯Ｃ２０：２２４６３２７二十二碳二烯酸甲酯Ｃ２２：２６１０１２４７３亚麻酸甲酯Ｃ１８：３３０１００８γ亚麻酸甲酯Ｃ１８：３１６３２６３２２归类化合物分子简式ＣＡＳ顺式脂肪酸甲酯顺１１，１４，１７二十碳三烯酸甲酯Ｃ２０：３５５６８２８８７顺８，１１，１４二十碳