GB 5413.27-2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定

中华人民共和国国家标准GB5413.27—2010中华人民共和国卫生部发布2010-03-26发布2010-06-01实施食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定NationalfoodsafetystandardDeterminationoffattyacidsinfoodsforinfantsandyoungchildren,milkandmilkproductsGB5413.27—2010I前言本标准代替GB/T21676-2008《乳与乳制品脂肪酸的测定气相液相色谱法》、GB/T5413.27-1997《婴幼儿配方食品和乳粉DHA、EPA的测定》、GB/T5413.4-1997《婴幼儿配方食品和乳粉亚油酸的测定》。本标准与原标准相比，主要变化如下：——第一法为乙酰氯—甲醇甲酯化法；——将GB/T21676-2008、GB/T5413.27-1997、GB/T5413.4-1997合并为本标准第二法氨水—乙醇提取法。本标准中附录A为资料性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB/T5413.4-1997；——GB/T5413.27-1997；——GB/T21676-2008。GB5413.27—20101食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定，第二法不适用于含有被包埋脂肪酸的测定。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其昀新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。第一法乙酰氯—甲醇甲酯化法3原理乙酰氯与甲醇反应得到的盐酸—甲醇使试样中的脂肪和游离脂肪酸甲酯化，用甲苯提取后，经气相色谱仪分离检测，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。4.1无水碳酸钠。4.2甲苯：色谱纯。4.3乙酰氯。4.4乙酰氯甲醇溶液（体积分数为10%）：量取40mL甲醇于100mL干燥的烧杯中，准确吸取5.0mL乙酰氯（4.3）逐滴缓慢加入，不断搅拌，冷却后转移并定容至50mL干燥的容量瓶中。临用前配制。注：乙酰氯为刺激性试剂，配制乙酰氯甲醇溶液时应不断搅拌防止喷溅，注意防护。4.5碳酸钠溶液：准确称取6g无水碳酸钠（4.1）于100mL烧杯中，加水溶解，转移并用水定容至100mL容量瓶中。4.6脂肪酸甘油三酯标准品：纯度≥99%，脂肪酸种类参见附录A中的表A.1。4.7脂肪酸甘油三酯标准工作液：按试样中各脂肪酸含量及所要分析脂肪酸的种类配制适当浓度的标准工作液，用甲苯定容并分别保存于－10℃以下的冰箱中，有效期三个月。5仪器和设备GB5413.27—201025.1天平：感量为0.01g和0.1mg。5.2恒温热水浴槽。5.3离心机：转速≥5000转/分钟。5.4气相色谱仪，带FID检测器。5.5冷冻干燥仪。5.6氮吹仪。5.7螺口玻璃管（带有聚四氟乙烯做内垫的螺口盖）：15mL。5.8离心管：50mL。6分析步骤6.1试样处理6.1.1试样含水量大于5%时，冷冻干燥至含水量小于5%。6.1.2称取试样0.5g（精确到0.1mg）于15mL干燥螺口玻璃管（5.7）中，加入5.0mL甲苯（4.2）。6.1.3称取无水奶油试样0.2g（精确到0.1mg）于15mL干燥螺口玻璃管（5.7）中，加入5.0mL甲苯（4.2）。6.2甲酯化提取6.2.1试样测定液的制备在试样（6.1.2或6.1.3）中加入10%乙酰氯甲醇溶液6.0mL（4.4），充氮气后，旋紧螺旋盖，振荡混合后于80℃±1℃水浴中放置2h，期间每隔20min取出振摇一次，水浴后取出冷却至室温。将反应后的样液转移至50mL离心管中，分别用3.0mL碳酸钠溶液（4.5）清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液（4.5）于50mL离心管（5.8）中，混匀，5000转/分钟离心约5min。取上清液作为试液，气相色谱仪测定。6.2.2标准测定液的制备准确吸取脂肪酸甘油三酯标准工作液（4.7）0.5mL于15mL螺口玻璃管（5.7）中，加入4.5mL甲苯，其他操作步骤同6.2.1。6.3色谱参考条件色谱柱：固定液100%二氰丙基聚硅氧烷，100m×0.25mm，0.20μm，或性能相当的色谱柱。载气：氮气。载气流速：1.0mL/min。进样口温度：260℃。分流比：30：1。检测器温度：280℃。柱温箱温度：初始温度140℃，保持5min，以4℃/min升温至240℃，保持15min。进样量：1.0μL。6.4试样溶液的测定GB5413.27—20103分别准确吸取1.0μL脂肪酸标准测定液（6.2.2）及试样测定液（6.2.1）注入色谱仪，平行测定次数不少于两次，以色谱峰峰面积定量。7分析结果的表述7.1试样中各脂肪酸的含量的计算试样中各脂肪酸的含量按公式（1）计算：100stdijstdisi××××=mAFmAXi……………………………………………………………（1）式中：Xi——试样中各脂肪酸的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；Asi——试样测定液中各脂肪酸的峰面积；mstdi——在标准测定液的制备（6.2.2）中吸取的脂肪酸甘油三酯标准工作液中所含有的标准品的质量,单位为毫克（mg）；Fj——各脂肪酸甘油三酯转化为脂肪酸的换算系数，参见附录A中的表A.1；Astdi——标准测定液中各脂肪酸的峰面积；m——试样的称样质量，单位为克（g）。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。7.2试样中总脂肪酸的含量计算试样中总脂肪酸的含量按公式（2）计算：∑=iTotalFAXX……………………………………………………………………（2）式中：XTotalFA——试样中总脂肪酸的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；Xi——试样中各脂肪酸的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。7.3试样中某个脂肪酸占总脂肪酸的百分比（%）的计算试样中某个脂肪酸占总脂肪酸的百分比（%）Y按公式（3）计算：100TotalFAi×=XXY或100jsijsi×××=∑FAFAY……………………………………（3）8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。9其他本方法昀低检出限参见附录A中的表A.1。GB5413.27—20104第二法氨水—乙醇提取法10原理乳与乳制品中的脂肪经皂化处理后生成游离脂肪酸，在三氟化硼催化下进行甲酯化反应，经甲酯化后的脂肪酸通过气相色谱柱分离，以氢火焰离子化检测器检测，外标法定量。11试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。11.1甲醇：色谱纯。11.2乙醚。11.3石油醚：沸程30℃～60℃。11.4乙醇（体积分数≥95%）。11.5氨水（体积分数为25%）。11.6正己烷（C6H14）：色谱纯。11.7高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）：128U/mg。11.8三氟化硼甲醇溶液（质量分数为14%）。11.9饱和氯化钠溶液：溶解360g氯化钠于1.0L水中，搅拌溶解，澄清备用。11.10氢氧化钾甲醇溶液（0.5mol/L）：称取2.8g氢氧化钾，用甲醇（11.1）溶解，并稀释定容至100mL，混匀。11.11焦性没食子酸甲醇溶液（10%）：将1.0g焦性没食子酸溶于10mL甲醇中配制成10%焦性没食子酸甲醇溶液备用。11.12脂肪酸甲酯标准物质：纯度≥99%，贮存于－10℃以下的冰箱中，脂肪酸种类参见附录A中的表A.1。11.13脂肪酸甲酯标准工作溶液：按试样中各脂肪酸含量及所要分析脂肪酸的种类适当配制其浓度，正己烷定容并贮存于－10℃以下的冰箱中，有效期三个月。12仪器和设备12.1天平：感量为0.1mg。12.2抽脂管：100mL磨口具塞试管，抽脂管干燥、恒重。12.3旋转蒸发仪。12.4离心机：转速≥5000转/分钟。12.5恒温水浴锅。12.6气相色谱仪，带FID检测器。13分析步骤GB5413.27—2010513.1试样制备预先将需冷藏的试样从冰箱中取出，放至室温。13.1.1液态试样称取10g（精确到0.1mg）试样于抽脂管中，待测。13.1.2固态试样13.1.2.1含淀粉试样称取试样1.0g（精确到0.1mg）至抽脂管中（12.2），加入0.1g高峰氏淀粉酶（11.7），加入10mL45℃～50℃的水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45℃±1℃烘箱内30min，取出。13.1.2.2不含淀粉试样称取试样1.0g（精确到0.1mg）至抽脂管（12.2）中，加入65℃±1℃的水10mL溶解试样，振摇，使样品完全分散。于上述试样（13.1.1和13.1.2）中加入2mL氨水（11.5），于65℃±1℃水浴锅中放置15min，取出轻摇，冷至室温。13.1.3无水奶油称取试样0.2g（精确到0.1mg）于磨口烧瓶中，按13.3所述进行皂化酯化。13.2脂肪提取在制备好的样品中加入10mL乙醇（11.4），混匀。加入25mL乙醚（11.2），加塞振摇1min。加入25mL石油醚（11.3），加塞振摇1min，静置、分层，有机层转入磨口烧瓶中。再加入25mL乙醚（11.2）及25mL石油醚（11.3），加塞振摇1min，静置、分层，有机层转入磨口烧瓶中，再重复操作一次。合并抽提液于磨口烧瓶中，用旋转蒸发仪浓缩至干。13.3皂化酯化在浓缩物（13.2）或无水奶油（13.1.3）中加入1.0mL焦性没食子酸甲醇溶液（11.11）。浓缩干燥之后再加入10mL氢氧化钾甲醇溶液（11.10）置于80℃±1℃水浴上回流5min～10min。再加入5mL三氟化硼甲醇溶液（11.8），继续回流15min，冷却至室温，将烧瓶中的液体移入50mL离心管中，分别用3mL饱和氯化钠溶液（11.9）清洗烧瓶三次，合并饱和氯化钠溶液于50mL离心管，加入10mL正己烷（11.6），振摇后，以5000转/分钟离心5min，取上清液作为试液，供气相色谱仪（12.6）测定。注：三氟化硼甲醇溶液为强腐蚀性试剂，使用时应注意防护。13.4色谱参考条件色谱柱：固定液100%二氰丙基聚硅氧烷，100m×0.25mm，0.20μm，或性能相当的色谱柱。载气：氮气。载气流速：1.0mL/min。进样口温度：260℃。分流比：30：1。检测器温度：280℃。柱温箱温度：初始温度140℃，保持5min，以4℃/min升温至240℃，保持15min。进样量：1.0μL。13.5测定GB5413.27—20106分别准确吸取1.0μL脂肪酸甲酯标准工作溶液（11.13）及试液（13.3）注入色谱仪，平行测定次数不少于两次，以色谱峰峰面积定量。14分析结果的表述14.1试样中各脂肪酸含量计算试样中各脂肪酸的含量按公式（4）计算：100stdiistdisii×××××=mAFVCAX……………………………………………………（4）式中：Xi——试样中各脂肪酸的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；Asi——试样溶液中各脂肪酸甲酯的峰面积；Cstdi——脂肪酸甲酯标准工作液中各脂肪酸甲酯的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；V——13.3中加入正己烷的体积：单位为毫升（mL）；Astdi——混合标准工作液中各脂肪酸甲酯的峰面积；Fi——各脂肪酸甲酯转化为脂肪酸的换算系数，参见附录A中的表A.1；m——试样的称样量，单位为克（g）。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。14.2试样中总脂肪酸的含量计算试样中总脂肪酸的含量按公式（5）计算：∑=iXXTotalFA……………………………………………………………………（5）式中：XTotalFA——试样中总脂肪酸的含量，单位为毫克每百克（