3-HPLC常见问题处理方法

高效液相色谱基础知识高效液相色谱基础知识高效液相色谱基础知识高效液相色谱基础知识天美科技液相培训教材（三）第七章第七章液相色谱常见问题液相色谱常见问题本章内容本章内容‹压力问题‹峰形问题保‹保留时间问题‹基线问题‹基线问题压力问题压力问题‹没有压力显示，没有流动相流动‹压力过高‹压力过低‹压力不稳没有压力显示，没有流动相流动没有压力显示，没有流动相流动•电源问题→接通电源，开机开泵•保险丝被烧坏→更换保险丝柱塞杆折断更换柱塞杆•柱塞杆折断→更换柱塞杆•泵头内有空气→溶剂脱气、启动泵抽出空气•流动相不足→补充流动相•单向阀损坏更换单向阀•单向阀损坏→更换单向阀•漏液→拧紧或更换手紧接头压力过高问题压力过高问题压力下降预柱堵塞断开预柱压力下降压力下降色谱柱堵塞断开色谱柱压力下降断开检测器检测器管路堵塞压力下降柱前管路或滤头堵塞压力仍高解决压力过高的方法解决压力过高的方法预柱堵塞预柱超声色谱柱堵塞预柱堵塞预柱超声小流速冲洗柱子检测器管路堵塞色谱柱堵塞清理管路，尤其注意废液管小流速冲洗柱子检测器管路堵塞柱前管路堵塞一截一截管路检查，找出堵塞管路，清理滤头堵塞滤头超声或更换滤头压力过低问题压力过低问题z原因：压力低于正常值则体系中存在漏液z原因：压力低于正常值，则体系中存在漏液z解决办法找到漏液部位旋紧漏液处螺钮z解决办法：找到漏液部位，旋紧漏液处螺钮压力不稳压力不稳¾泵中有气体→溶剂脱气或从泵中除去气体¾单向阀污染→超声清洗单向阀¾泵密封损坏→更换泵密封¾泵密封损坏→更换泵密封¾脱气不充分→溶剂脱气或改变脱气方法¾使用梯度洗脱→由于流动相粘度的变化引起的压力波动的压力波动峰形问题峰形问题•裂峰峰拖尾•峰拖尾•峰变宽低柱效•低柱效许多峰形问题是结合在一起的许多峰形问题是结合在起的峰展宽和拖尾；拖尾和保留时间增加裂峰原因的确定样品杂质多或分样品杂质多或分析过许多样品注意柱污染或滤头部分阻塞流动相pH=7注意硅胶溶解造成的柱塌陷(除非使用专门的柱子)(除非使用专门的柱子)进样溶剂比流注意进样溶剂效应样品溶剂不溶进样溶剂比流动相极性大注意进样溶剂效应,样品溶剂不溶于流动相，进样溶剂尽量使用流动相峰拖尾、变宽和柱效降低峰拖尾、变宽和柱效降低•柱次级效应柱次级效应•柱污染/塌陷/老化•柱负荷超载•柱外效应•流动相粘度过大峰拖尾问题的解决峰拖尾问题的解决柱次级效应加入消尾剂三乙胺柱次级效应加入消尾剂三乙胺柱塌陷/污染/老化降低流动相pH/冲洗柱子柱负荷超载减小进样量柱塌陷/污染/老化降低流动相pH/冲洗柱子柱负荷超载减小进样量柱外效应定期维护检修定期维护检修流动相粘度过大增加柱温或降低流动相粘度保留时间问题保留时间问题‹正常的保留时间变化因改变流速、流动相配比、柱温、柱长及仪器不同而引起的保留时间发生固定的单方向（增加或缩短）的变化‹异常的保留时间变化：因色谱柱流动相仪器及操作问题引起的保留时间发生因色谱柱、流动相、仪器及操作问题引起的保留时间发生不固定的无规律漂移保留时间改变的原因保留时间改变的原因•柱污染/塌陷/老化•不够平衡•流动相变化（挥发或污染）•缓冲液容量不够•其他仪器问题保留时间变化问题的解决保留时间变化问题的解决柱塌陷/污染/老化降低流动相pH/冲洗柱子不够平衡至少10倍柱体积的流动相平衡柱塌陷/污染/老化降低流动相pH/冲洗柱子不够平衡至少10倍柱体积的流动相平衡含有机挥发酸流动相现配流动相挥发或污染含有机挥发酸流动相现配注意流动相中水的污染缓冲液容量不够用25mmol/L的缓冲液基线问题基线问题‡基线漂移‡基线噪音‡基线噪音基线漂移基线漂移流动相不均匀使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加柱平衡慢，特别是在分析前用10-20倍体积的新流动相流动相不均匀使用C级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前混合均匀，脱气。柱平衡慢，特别是流动相发生变化时在分析前用1020倍体积的新流动相对柱子进行冲洗使用循环溶剂但使用循环溶剂，但检测器未调整。重新设定基线，使用新的流动相柱温波动控制好柱子和流动相的温度基线噪音基线噪音在流动相、检测器或流动相脱气。冲洗系统以除去流动相混合不完全至少10倍柱体积的流动相平衡在流动相、检测器或泵中有空气检测器或泵中的空气流动相混合不完全至少10倍柱体积的流动相平衡用手摇动使混合均匀或使用流动相混合不完全用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂静电干扰连接地线基线噪音基线噪音流动相各溶剂不相溶选择互溶的流动相系统内有气泡用强极性溶液清洗系统流动相各溶剂不相溶选择互溶的流动相系统内有气泡用强极性溶液清洗系统用1N的硝酸（不能用磷酸）流通池污染用1N的硝酸（不能用磷酸）或异丙醇清洗流通池检测器灯能量不足更换灯附录附录关于关于手动进样器手动进样器附录附录关于关于7725i7725i手动进样器手动进样器冲洗进样器在进样时用毫升流动相•在进样时，用1毫升流动相冲洗针道，使用如图所示的针道清洗器这时用的针道清洗器。这时，用泵冲洗样品环。注意为了避免液体从后•注意：为了避免液体从后面喷射出来，要缓慢的注射。射。附录附录关于关于手动进样器手动进样器附录附录关于关于7725i7725i手动进样器手动进样器7725i的进样方式•完全填充定量环法（常用）•部分填充定量环法（常用）•吸力载入法（极不常用）附录附录关于关于手动进样器手动进样器附录附录关于关于7725i7725i手动进样器手动进样器完全填充环的步骤：）将扳手调至LOAD档a）将扳手调至LOAD档。b）把注射器插入到针道中。通过密封垫的最后2-3毫米可能会感觉到紧然后在接触到定子的位置停下。c）载入样品c）载入样品。d）将注射器留在里面然后调至INJECT档。附录附录关于关于手动进样器手动进样器附录附录关于关于7725i7725i手动进样器手动进样器特点：在完全填充环中，注射样品的量由环的体积决定（包特点：在完全填充环中，注射样品的量由环的体积决定（包括阀通道）。这种方法的精度最高。填入样品环至少二至五倍的样品量。六至十倍的样品量将得到更好的精度。样品需要过量是因为贴近环壁的流动相会由于图所示的流体黏度效应而缓慢损失掉。附录附录关于关于手动进样器手动进样器附录附录关于关于7725i7725i手动进样器手动进样器部分填充环的步骤：a)在INJECT档中，拿针道清洗器用1毫升的流动相去冲洗针道，可以在注射前冲洗掉污染物。冲洗的液体从孔5流出。b）其余步骤同完全填充环步骤。附录附录关于关于手动进样器手动进样器附录附录关于关于7725i7725i手动进样器手动进样器特点特点：9如果你只有少量的样品，请选择此方法。9如果你只有少量的样品，请选择此方法。9在部分填充环方法中，进样量由注射器决定。9此方法中样品环中样品量不应多于环体积的一半。例如在20微升环中加不多于10微升的样品样品量若超过一半一些例如，在20微升环中加不多于10微升的样品。样品量若超过半，些样品会丛孔6中流失。这是由于层流液体黏度的影响，样品在环中心以相对于环壁二倍的速率流下，如图（完全填充环）所示。附录附录关于关于手动进样器手动进样器附录附录关于关于7725i7725i手动进样器手动进样器吸入载入吸入载入•前两种过程方法都会使样品与载入注射器的金属针头相接触。使用一个注射器来吸入环里的样品可以完全避免其与金属的接触个注射器来吸入环里的样品可以完全避免其与金属的接触。附录附录关于关于手动进样器手动进样器附录附录关于关于7725i7725i手动进样器手动进样器夜力过高处理漏夜和压力过高在阀把手的末尾有一个压力调节螺母设计这个把手就是为了在阀把手的末尾有一个压力调节螺母。设计这个把手就是为了便于调节该螺母。如果你需要高压操作或者在定子环之间有漏夜现象松开这两个固定螺母这样把手就会从轴上滑落两夜现象，松开这两个固定螺母，这样把手就会从轴上滑落，两个突出部分刚好与调节螺母的狭缝相吻合。把此螺母旋转1/20周即可。如果还漏，再重复上述操作。若还不行，更换转子密周即可。如果还漏，再重复上述操作。若还不行，更换转子密封。如图：附录附录关于关于手动进样器手动进样器附录附录关于关于7725i7725i手动进样器手动进样器