化妆品中激素类成分的检测方法

—1——附件1化妆品中激素类成分的检测方法DeterminationofHormoneComponentsinCosmetics1范围本方法规定了采用高效液相色谱-质谱法测定化妆品中的激素类成分，包括定性与定量。本方法适用于膏霜乳液类、液态水基类、液态油基类、凝胶类、面膜类等化妆品中激素类成分的定性与定量。2方法提要样品以乙腈为溶剂提取，采用高效液相色谱仪分离，质谱检测器检测，根据保留时间和特征离子对的相对丰度比定性、定量离子对峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对63种激素类成分的检出限、定量下限和取样量为0.2g时的检出浓度、最低定量浓度见表1。表163种激素类成分的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度序号中文名称英文名称检出浓度（μg/g）最低定量浓度（μg/g）检出限（ng/mL）定量下限（ng/mL）1曲安西龙Triamcinolone0.030.10.622泼尼松龙Prednisolone0.030.10.623泼尼松Prednisone0.030.10.62——2—序号中文名称英文名称检出浓度（μg/g）最低定量浓度（μg/g）检出限（ng/mL）定量下限（ng/mL）4异氟泼尼松9-fluoroprednisolone0.030.10.625氢化可的松Hydrocortisone0.030.10.626可的松Cortisone0.030.10.627甲基泼尼松龙Methylprednisolone0.030.10.628倍他米松Betamethasone0.030.10.629地塞米松Dexamethasone0.030.10.6210氟米松Flumethasone0.030.10.6211倍氯米松Beclomethasone0.030.10.6212曲安奈德Triamcinoloneacetonide0.030.10.6213地索奈德Desonide0.030.10.6214氟尼缩松Flunisolide0.030.10.6215氟轻松Fluocinoloneacetonide0.030.10.6216曲安西龙双醋酸酯Triamcinolonediacetate0.030.10.6217氟氢缩松Fludroxycortide0.10.32618泼尼松龙醋酸酯Prednisolone21-acetate0.030.10.6219氟米龙Fluoromethalone0.030.10.6220氢化可的松醋酸酯Hydrocortisone21-acetate0.030.10.6221氟氢可的松醋酸酯Fludrocortisone21-acetate0.030.10.6222地夫可特Deflazacort0.030.10.62—3——序号中文名称英文名称检出浓度（μg/g）最低定量浓度（μg/g）检出限（ng/mL）定量下限（ng/mL）23泼尼松醋酸酯Prednisone21-acetate0.030.10.6224可的松醋酸酯Cortisone21-acetate0.030.10.6225卤美他松Halometasone0.10.32626甲基泼尼松龙醋酸酯Methylprednisolone21-acetate0.030.10.6227倍他米松醋酸酯Betamethasone21-acetate0.030.10.6228睾酮Testosterone0.030.10.6229地塞米松醋酸酯Dexamethasone21-acetate0.030.10.6230布地奈德Budesonide0.030.10.6231氢化可的松丁酸酯Hydrocortisone17-butyrate0.030.10.6232孕三烯酮Gestrinone0.030.10.6233氟米龙醋酸酯Fluorometholone17-acetate0.030.10.6234甲基睾丸酮Methyltestosterone0.030.10.6235氢化可的松戊酸酯Hydrocortisone17-valerate0.030.10.6236曲安奈德醋酸酯Triamcinoloneacetonideacetate0.030.10.6237二氟拉松双醋酸酯Diflorasonediacetate0.030.10.6238氟轻松醋酸酯Fluocinonide0.030.10.6239炔诺孕酮Norgestrel0.030.10.6240倍他米松戊酸酯Betamethasone17-valerate0.030.10.62——4—序号中文名称英文名称检出浓度（μg/g）最低定量浓度（μg/g）检出限（ng/mL）定量下限（ng/mL）41哈西奈德Halcinonide0.10.32642泼尼卡酯Prednicarbate0.030.10.6243氯替泼诺Loteprednoletabonate0.030.10.6244阿氯米松双丙酸酯Alclomethasonedipropionate0.030.10.6245安西奈德Amcinonide0.030.10.6246卤倍他索丙酸酯HalobetasolPropionate0.030.10.6247氯倍他索丙酸酯Clobetasol17-propionate0.030.10.6248氟替卡松丙酸酯Fluticasonepropionate0.030.10.6249莫米他松糠酸酯Mometasonefuroate0.030.10.6250醋酸甲地孕酮Megestrolacetate0.030.10.6251醋酸氯地孕酮Chlormadinoneacetate0.030.10.6252倍他米松双丙酸酯Betamethasonedipropionate0.030.10.6253黄体酮Progesterone0.030.10.6254醋酸甲羟孕酮Medroxyprogesterone17-acetate0.030.10.6255倍氯米松双丙酸酯Beclmetasonedipropionate0.030.10.6256双氟可龙戊酸酯Diflucortolonevalerate0.030.10.6257氯倍他松丁酸酯Clobetasone17-butyrate0.030.10.6258己酸羟孕酮Hydroxyprogesteronecaproate0.030.10.6259环索奈德Ciclesonide0.030.10.62—5——序号中文名称英文名称检出浓度（μg/g）最低定量浓度（μg/g）检出限（ng/mL）定量下限（ng/mL）60雌三醇Estriol0.10.32661雌二醇Estradial0.10.32662雌酮Estrone0.10.32663己烯雌酚Diethylstilbestrol0.030.10.623试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。3.1乙腈：色谱纯。3.2正己烷：色谱纯。3.350%乙腈溶液：取乙腈、水等体积混合，摇匀。3.470%乙腈溶液：取乙腈、水按体积比7:3混合，摇匀。3.5流动相的配制：流动相A：水流动相B：乙腈（3.1）3.6标准储备溶液分别称取各激素标准品（表1）10mg（精确到0.00001g）置于50mL容量瓶中，加乙腈（3.1）使溶解并定容至刻度。4仪器和设备4.1液相色谱-三重四极杆质谱联用仪。4.2分析天平。4.3离心机。——6—4.4超声波清洗仪。4.5涡旋混合仪。5分析步骤5.1混合标准溶液的制备分别取各激素标准储备溶液（3.6）适量，用50%乙腈溶液（3.3）配制成浓度在定量下限附近的溶液。注：实验室完成分析方法的优化后，如能够保持仪器、色谱条件、质谱测定参数等分析条件固定，测定指标重现性良好，可随行质控标准品溶液代替63种激素混合标准品溶液对分析条件的稳定性、结果的重复性进行控制。如发生更改仪器、色谱条件、质谱条件等情况，均需重新对各组分进行定位。质控标准储备溶液：称取曲安奈德、卤美他松、哈西奈德、地塞米松、地塞米松醋酸酯、氟氢缩松、倍他米松戊酸酯、氯倍他索丙酸酯、环索奈德、雌二醇、己烯雌酚标准品各约10mg（精确到0.00001g）置于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1）溶解并定容至刻度，作为质控标准储备液。置-20℃保存。对于质谱响应较弱的成分，实验室可自行增加该成分作为质控标准物质，以提高筛查准确性。质控标准混合溶液：分别量取质控标准储备溶液适量，用50%乙腈溶液（3.3）配制成浓度在定量下限附近的溶液。5.2样品处理—7——5.2.1膏霜乳液类、液态水基类、凝胶类、面膜类样品称取样品0.2g（精确到0.001g），置于10mL具塞比色管中，加入少量乙腈（3.1），在涡旋混合仪上振荡30s至试样与提取溶剂混合均匀，然后加入乙腈至近刻度，超声提取20min，静置至室温，用乙腈（3.1）定容至刻度，摇匀，以4000r/min离心10min，滤过（必要时取上清液适量用50%乙腈溶液（3.3）稀释，稀释液经0.22μm滤膜过滤），滤液作为待测溶液。5.2.2液态油基类称取样品0.2g（精确至0.001g），置于离心管中，加入2mL正己烷（3.2），在涡旋混合仪上分散，然后加入70%乙腈（3.4）3mL，涡旋振荡2min，4000r/min离心10min，吸取下层溶液至10mL比色管中，上层正己烷层用70%乙腈（3.4）3mL，自“涡旋振荡2min，…”起，重复上述步骤一次，合并两次溶液，加50%乙腈（3.3）定容至刻度，滤过（必要时用适量50%乙腈溶液（3.3）稀释，稀释液经0.22μm滤膜过滤），滤液作为待测溶液。5.3仪器参考条件5.3.1参考色谱条件色谱柱：C18柱（150×2.0mm，2.2μm），或等效色谱柱。流动相梯度洗脱程序：时间/minV（流动相A）/%V（流动相B）/%0955——8—2415852615852795531955流速：0.3mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL；5.3.2质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI源）；监测模式：正离子、负离子多离子反应监测模式，监测离子对及相关参数设定见表2。表263种激素类成分监测离子对及相关参数设定表编号物质名称母离子（m/z）子离子（m/z）CE（V）1曲安西龙395.2*357.120225.1272泼尼松龙361.2*343.114147.4383泼尼松359.2*341.114147.0354异氟泼尼松379.1*35912341165氢化可的松363.2*121.033105.1676可的松361.2*163.130121.0407甲基泼尼松龙375.2*357.115161.1298倍他米松393.2*355.018146.8379地塞米松393.2*355.017146.84010氟米松411.2*253.025121.14711倍氯米松409.2*279.128147.13212曲安奈德435.2*338.920396.91513地索奈德417.2*323.317225.130—9——编号物质名称母离子（m/z）子离子（m/z）CE（V）14氟尼缩松435.2*321.220397.11615氟轻松453.2*12140337.22016曲安西龙双醋酸酯479.2*440.9143212217氟氢缩松437.2*36126285.23018泼尼松龙醋酸酯403.2*14732307.11719氟米龙377.2*278.920320.91620氢化可的松醋酸酯405.2*309.124120.84421氟氢可的松醋酸酯423.2*238.939120.94122地夫可特442.2*141.940123.94023泼尼松醋酸酯401.2*295.023146.83924可的松醋酸酯403.2*162.8373432625卤美他松445.1*154.8322872026甲基泼尼松龙醋酸酯417.2*399.212253.22527倍他米松醋酸酯435.21*309223371628睾酮289.2*97.