API使用培训

2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI系统-构成:试条由特別选择的生化反应小管API试条有多种类各有相应的数据库所有生化结果以同时间一并阅读2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI系统试条由10,20,50.....测试组成不等结果：鉴定百分率基本单位：条目（Taxa)-种(PseudomonasAeruginosa)-生物型号(E.Coli1)-属(SalmonellaSpp.)-一群菌种(Aeromonashydrophilia/cavicie)所引用的分类学跟国际认可的一样-InternationalJournalofSystematicBacteriology资料库＝整个系统的心脏2019/9/15H:marco\industry\apitrain优点：-标准化，简易化-在制造过程中，进行质控-FDA标准-用家可用ATCC菌种进行质控-系统化-操作简易-快速报告-20年经验，拥有菌种资料＞25000，鉴定系统的发源生化测试＞750-＞1500文献2019/9/15H:marco\industry\apitrain选条的标准2019/9/15H:marco\industry\apitrain革兰氏阴性杆菌分类革兰氏阴性杆菌氧化酶+非肠道菌鉴定API20NE肠道杆菌鉴定API20E氧化酶-2019/9/15H:marco\industry\apitrain革兰氏阳性杆菌分类革兰氏阳性杆菌触酶-触酶+短小脱色含有异染颗粒slightdiscoloration(granulations)短球杆菌延长状杆菌细小不透光菌落20-25°C有动力37°C无动力李斯特菌鉴定APIListeria乳酸菌鉴定API50CHL棒状杆菌鉴定APICoryne大体积产芽孢杆菌芽孢菌鉴定API50CHB2019/9/15H:marco\industry\apitrain定向试验2019/9/15H:marco\industry\apitrain革兰氏阳性球菌分类革兰氏阳性球菌凝固酶葡萄球菌鉴定APISTAPH触酶-触酶+金黄色萄葡球菌溶血链球菌鉴定APISTREP+-2019/9/15H:marco\industry\apitrain-在细菌学里最普遍的染色方法革兰氏染色步骤G()G()-染色前，所有细胞是透明的-结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合-乙醇从G()菌体洗脱结晶紫-用番红液复染，革兰氏阴性菌呈粉红色，革兰氏阳性菌呈兰紫色2019/9/15H:marco\industry\apitrain接解酶试剂-原理-传统方法H2O22H2O+O2接解酶玻片法试管法2019/9/15H:marco\industry\apitrain氧化酶试验-原理:TMPD氧化TMPD氧化酶(TMPD=2甲基一对一苯撑二胺)货号:55922纸片:浸泡饱和TMPD储存:2-8ºC于暗处有效期:1年组成:2x30片小瓶装纸片货号:70460储存:2-30ºC于暗处组成:1个小瓶液体试剂(深紫色)(透明)2019/9/15H:marco\industry\apitrain氧化酶纸片法2019/9/15H:marco\industry\apitrain液体氧化酶试剂试剂方法:-用2个试管载1-2ml无菌水-第一管为阴性对照:加一滴OX试剂-第二管为测试管:加可疑菌落然后再加二滴OX试剂-比较二支管的颜色:阴性对照:透明,浅紫色结果:OX(-):透明,浅紫色OX(+):紫色,深紫色生化鉴定容易使用2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI结果原理：-生化结果组合跟资料库內的典型条目(Taxa)作出比较-经计算後，鉴定百比率（%Id）＝机会率，指示出不同菌类的比较T值（Tindex）=指示出在同一個菌类的相似程度生化鉴定可靠及具创意的选择最典型生化普菌种XT值资料库生化结果(菌种X)(菌種X)2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI结果跟据T值及%Id的组合，作出评语：(i)ExcellentIdentification%Id99.9及T0.75(ii)VerygoodIdentification%Id99.9及T0.75(iii)GoodIdentification%Id90.9及T0.25(iv)AcceptableIdentification%Id80.0及T0(v)Doubtfulprofile其中一个生化反应出现严重违反典型生化结果2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI20E/Rapid20E-肠道杆菌科细菌在环境中及动物产品中非常普遍，其中部份(沙门氏、耶尔森氏)是致病菌-API20E是常规鉴定中的标准-其他新鉴定系统比较的金标准-方便使用，4或24小时出报告2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI20E试剂条接种要点先做氧化酶试验，氧化酶为阴性时接种API20E,氧化酶为阳性时接种API20NE试剂条．塑料培养盒中加水5ml,放入试剂条，记录标本资料。取1个1mm大小，18—24hr菌龄的菌落，分散于5ml悬浮液（20150）中，使达0.5MacFarland浊度。小心沿内壁加菌悬液到微量生化杯中。其中：有U形框标记的项目(CIT、VP、GEL)，将菌液加满；有下划线标记的(ADH、LDH、ODC、H2S、URE、)，加好菌悬液后，用无菌液体石蜡封口。剩余的菌液可用于涂玻片、染色，接种于非选择性平板做次代培养。盖好孵育盒盖，放置几分钟，观察每个微量杯都应呈阴性反应的颜色。孵育盒放入37摄氏度温箱培养24小时。2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI20E反应结果阅读要领（１）一、若GLU（葡萄糖）为阳性，则记录GLU的结果，在TDA、IND、VP孔中加入相应的附加试剂，1分钟内读取TDA、IND的结果，5—10分钟内读取VP的结果。同时读并记录取其它反应的结果，用生化鉴定结果组成一个7位数编码。二、若GLU(葡萄糖)为阴性，但有多于2个的反应呈阳性，则按上述方法读取并记录结果。三、若GLU（葡萄糖）为阴性（非发酵菌），且其它呈阳性的反应不多于2个，则不要加试剂，放回温箱中再培养24hr后按第一条的方法读取结果。同时用次代培养物接种2个APIOF培养基证实葡萄糖代谢类型；接种1个APIM培养基观察动力；划线接种MacConkey平板。培养24hr后将其结果记录到API20E报告单，与生化鉴定结果一起得到一个9位数编码。2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI20E反应结果阅读要领（２）ONPG：淡黄色—黄色为阳性，无色为阴性。ADH、LDC、ODC、URE以苯酚红为指示剂，橙色—红色为阳性，黄色为阴性。CIT：管口处出现兰色为阳性，黄色—绿色为阴性。H2S：黑色为阳性，无色—浅灰色为阴性。TDA、IND、VP加试剂后出现红色为阳性,不出现红色为阴性。GEL：黑色素扩散为阳性，不扩散为阴性。GLU—ARA为糖类的酸化反应，指示剂溴百里香酚兰显黄色为阳性，蓝、绿色为阴性。2019/9/15H:marco\industry\apitrainGLU为阴性时，记录其结果，并在GLU孔中按先后顺序分别加一滴NIT1和NIT2试剂，出现红色时NO2为阳性，N2为阴性；不出现红色时，加少许Zn粉，此时出现红色，则NO2为阴性，N2为阳性。有动力，MOB为阳性，无动力则为阴性。麦康凯平板上生长，McC为阳性，不生长为阴性．OF培养管下部变色为发酵型，OF-F为阳性，下部不变色OF-F为阴性；OF培养管上部变色为发酵型，OF-O为阳性，上部不变色OF-O为阴性．API20E反应结果阅读要领（３）2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI20NE-非发酵G(-)杆菌存在于空气、水及表面-部份细菌（如绿脓假单胞菌）为致病菌-试条主要由传统生化反应及同化反应小管所组成-64条目(Taxa)-非发酵G(-)杆菌的标准鉴定方法2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI20NE试剂条接种要点（1）先做氧化酶试验，阳性者接种API20NE。塑料培养盒中加水5ml,放入试剂条，记录标本资料。取18—24hr菌龄的菌落，分散于２ml盐水（20040）中，使达0.5MacFarland浊度（A液）。取A液200ul(４－８滴），加入AUX培养液中，小心混匀避免产生气泡，制成同化试验接种液（B液）。用A液按API20E相同的方法接种生化试验杯孔（NO3－PNPG其中，GLU，ADH,URE用液体石蜡封口）2019/9/15H:marco\industry\apitrain用B液接种同化试验杯孔(下面有三条红线者）。使液面与杯口平齐．B液黏度很大，特别注意不要使菌悬液堵住杯口，形成大的气泡，影响反应结果。严格无菌操作，避免空气中的杂菌污染同化试验．剩余的A液可用于涂玻片、染色，接种于非选择性平板做次代培养。盖好孵育盒盖，放置几分钟，观察每个微量杯都应呈阴性反应的颜色。孵育盒放入30摄氏度温箱培养24小时。API20NE试剂条接种要点（2）2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI20NE技术要点同化试验项目接种要求-接种液面与杯口平齐，太多或不足会造成错误结果。2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPI20NE反应结果阅读要领（１）一．生化试验：不要打开塑料培养盒盖，先读取从GLU到PNPG的生化试验结果并记录之．在NO3杯孔中按先后次序分别加入一滴NIT1和NIT2试剂，出现红色NO3为阳性．不出现红色时，加少许Zn粉，此时出现红色，则NO3为阴性，５分钟内不出现红色，则NO3阳性．TPR杯孔中加一滴James试剂，立即出现红色为阳性．不出现红色为阴性．二．同化试验：从杯口上方往下看，红线模糊或菌悬液变浑浊，表明有菌生长，为阳性．否则，为阴性．偶有弱生长者可记录为－／＋或＋／－．2019/9/15H:marco\industry\apitrain三．在报告单上做出一个７位数编码，查编码手册或APILAB软件．四．如果，查不到编码，或给出提示“IDENTIFICATIONNOTVALIDBEFORE48-HRINCUBATION”,立即用液体石蜡将NO3和TRP封口．继续培养２４小时,再读结果．而NO3和TRP要记录培养24小时的结果．API20NE反应结果阅读要领（２）2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPISTAPH-凝固酶阴性葡萄球菌于环境污染中常见-其中以金黃葡萄球菌为代表-以KloosandSchleiferClassification为基础-试条由传统方法及发酵反应小管组成-22个条目(葡萄球菌及微球菌)2019/9/15H:marco\industry\apitrainAPISTAPH技术要点(i)附加试验第21-溶葡萄球菌素(lysostaphin，LSTR)用纸片法做目的:确认微球菌经常抗药(+)其他葡萄球菌LSTR(-)(ii)阅读结果(发酵试验)PH指示剂:PhenolRed(酚红)阳性:红变黄-阴性对照:小杯O-阳性对照:小杯GLU(葡萄球菌均阳性)橙色结果:-在2个阳性中间:阴性结果-在2个阴性中间:阳性结果-在小管(红色)底部出现黄或橙:阳性结果