经肝动脉注射半枝莲多糖抑制肝癌模型兔血管生成的研究报告课题结题汇报

三阶段经肝动脉注射半枝莲多糖抑制肝癌模型兔血管生成的研究报告基本信息•项目名称：经肝动脉注射半枝莲多糖抑制肝癌模型鼠血管生成的研究项目编号：经费：50万元试验方法和材料1、家兔HCC模型建立将处于对数期的HepG2细胞稀释至2*106cells/ml，取250ul细胞悬液接种于家兔皮下，待皮下瘤长至直径5-6mm时取下作为瘤源。裸鼠用200g/L乌拉坦腹腔麻醉，左上腹肋缘下斜切口长约6-8cm，暴露肝脏左叶，用尖镊在肝左叶最厚实区域刺破肝被膜，棉签轻压刺破口，再用尖镊准确送入1-2块瘤组织，观察无出血后，全层关腹。原位种植后的7、14、21、28和35d观察肿瘤生长情况。家兔HCC建模成功2、裸兔TACE模型的建立选取荷瘤模型成功且状态良好的HCC裸兔，用200g/L乌拉坦腹腔麻醉，切开皮肤，充分暴露腹部，在DSA监控下，在超滑导丝引导下，将2F硅胶管经胃十二指肠动脉超选择逆行插管至肝左动脉，注入200ul76%泛影葡胺，减影确认后，经肝动脉行灌注化疗栓塞术。术毕拔管，结扎胃十二指肠动脉，腹腔内注入8万单位庆大霉素的生理盐水，逐层关腹。成功完成肝动脉插管及半枝莲多糖灌注术3、体内给药以及给药途径的评价选取荷瘤模型成功且状态良好的HCC兔24只，采用随机分组设计法按肿瘤体积和体重分为3组，分别为（1）正常对照组（2）口服半枝莲多糖组（3）经肝动脉注射半枝莲多糖组每组给药3次，每次间隔1周。各组动物处死，获取肝组织，提取RNA，RT-PCR、Westernblot。检测VEGF。试验结果与分析（1）兔肝癌模型50例。（2）15只瘤兔为对照组，1月后12只存活。（3）15只瘤兔口服半枝莲多糖，1月后10只存活。（4）20只瘤兔行肝动脉灌注化疗栓塞术（TACE），术后1月存活9只。（5）将3组实验存活瘤兔各选8只，分别提取血液进行VEGF检测（Westernblot分析），目前部分检测结果还未完成（预计11月可完成）。自制改良肝动脉穿刺针及导管改良经胃十二指肠动脉逆向肝动脉插管改良肝动脉插管DSA造影见肝动脉及远端分支显示良好瘤兔改良肝动脉插管造影示肝左叶肿瘤染色（白箭头）兔肝癌模型建成功后CT示肝左叶稍低密度影占位（红箭头）WB结果证实半枝莲多糖可抑制VEGF的表达，且肝动脉灌注组效果最明显预期考核指标•1、揭示出半枝莲多糖对肝癌血管生成具有抑制作用及其作用机制。•2、发表核心期刊论文篇。完成考核指标情况•1、WB结果证实半枝莲多糖可抑制VEGF的表达，且肝动脉灌注组效果最明显•2、论文正在编写中经费使用情况•1、材料费：16.5万元•2、会议费：7.5万•3、检测费：8万•4、劳务费：12•5、论文发表费:6•6、专利申请：