SFT 0116-2021 血液、尿液中苯丙胺类兴奋剂、哌替啶和氯胺酮的检验方法

ICS07.140CCSC06SF中华人民共和国司法行政行业标准SF/T0116—2021代替SF/ZJD0107004—2016血液、尿液中苯丙胺类兴奋剂、哌替啶和氯胺酮的检验方法Determinationofamphetamine-typestimulants,meperidineandketamineinbloodandurine2021-11-17发布2021-11-17实施中华人民共和国司法部发布SF/T0116—2021I目次前言.................................................................................II1范围...............................................................................12规范性引用文件.....................................................................13术语和定义.........................................................................14原理...............................................................................15试剂、仪器和材料...................................................................16定性分析...........................................................................27定量分析...........................................................................48分析结果评价.......................................................................6附录A（资料性）血液和尿液中AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶和氯胺酮的检出限............7SF/T0116—2021II前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件代替SF/ZJD0107004—2016《生物检材中苯丙胺类兴奋剂、哌替啶和氯胺酮的测定》，与SF/ZJD0107004—2016相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：a)删除了免疫筛选法（见2016年版的第一篇）；b)删除了免疫筛选法和毛发检验表述（见2016年版的第1章）；c)删除了毛发提取（见2016年版的10.1.3和16.1.3）；d)增加了控制样品（见6.1.2）；e)增加了分析结果评价（见第8章）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由司法鉴定科学研究院提出。本文件由司法部信息中心归口。本文件起草单位：司法鉴定科学研究院。本文件主要起草人：刘伟、卓先义、向平、沈保华、卜俊、严慧。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：——2010年首次发布为SF/ZJD0107004—2010，2016年第一次修订；——本次为第二次修订。SF/T0116—20211血液、尿液中苯丙胺类兴奋剂、哌替啶和氯胺酮的检验方法1范围本文件描述了血液、尿液中苯丙胺(AMP)、甲基苯丙胺(MAMP)、3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA)、3,4-亚甲二氧基苯丙胺(MDA)、哌替啶和氯胺酮的气相色谱-质谱和液相色谱-串联质谱的检验方法，包括原理、试剂、仪器和材料、定性分析、定量分析以及分析结果评价。本文件适用于血液、尿液中AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶和氯胺酮的定性定量分析，其它检材中AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶和氯胺酮的定性定量分析参照使用。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GA/T122毒物分析名词术语3术语和定义GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。4原理血液、尿液中的苯丙胺类兴奋剂、哌替啶和氯胺酮，在碱性条件下用有机溶剂提取和净化后，用气相色谱-质谱法和液相色谱-串联质谱法进行检测，经与平行操作的空白样品和添加样品比较，以保留时间、特征离子（对）和离子（对）丰度比进行定性分析；以定量离子（对）峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。5试剂、仪器和材料试剂气相色谱-质谱法试验用水应符合GB/T6682中规定的三级水，液相色谱-串联质谱法试验用水应符合GB/T6682中规定的一级水。除另有说明外，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括：a)10%氢氧化钠溶液；b)0.1mol/L盐酸溶液；c)丙酮；d)乙醚；e)甲醇：HPLC级；f)乙腈：HPLC级；g)乙酸铵：HPLC级；h)50%甲酸溶液：HPLC级；i)20mmol/L乙酸铵（含0.1%甲酸）：分别称取乙酸铵1.54g和移取50%甲酸溶液2mL置于1000mL容量瓶中，加水定容至刻度，pH值约为4；j)混合溶液[乙腈:20mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（7:3，v/v）]；k)标准物质溶液：SF/T0116—202121)AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶和氯胺酮标准物质储备液：分别取AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶和氯胺酮，精密称取适量，用甲醇配成1.0mg/mL的标准储备液。密封，置于冰箱中冷冻保存，有效期为12个月；2)AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶和氯胺酮标准物质工作液：试验中所用其它浓度的标准物质工作液均由符合5.1k)1)的标准物质储备液用甲醇稀释而得。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期为3个月。仪器和材料仪器和材料包括：a)气相色谱-质谱仪(GC-MS)：配有电子轰击源(EI)；b)液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS)：配有电喷雾离子源(ESI)；c)电子天平：分度值≤0.1mg；d)涡旋振荡器；e)离心机：转速4000r/min；f)恒温水浴锅；g)移液器；h)具塞离心试管。6定性分析样品前处理6.1.1案件样品6.1.1.1尿液样品取尿液2mL置于10mL具塞离心试管中，用10%氢氧化钠溶液调至pH11，用乙醚3mL提取，涡旋混合、离心，转移有机层至另一离心管中，约60C水浴中挥干，残留物用甲醇50L复溶（供气相色谱-质谱仪分析）或混合溶液[乙腈:20mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（7:3，v/v）]100L复溶（供液相色谱-串联质谱仪分析）。6.1.1.2血液样品取血液2mL置于10mL具塞离心试管中，加入10%氢氧化钠溶液0.2mL，用乙醚3mL提取，然后按照6.1.1.1方法操作。6.1.2控制样品取等量相同基质空白样品两份，一份作为空白样品，一份添加MAMP标准物质工作液，制得0.2μg/mL添加样品，与案件样品平行操作。若案件样品中出现AMP、MDMA、MDA、哌替啶或氯胺酮可疑色谱峰，取空白样品，添加案件样品中出现的可疑目标物对照品，然后按照6.1.1方法操作。仪器分析6.2.1仪器条件6.2.1.1气相色谱-质谱仪参考条件气相色谱-质谱仪参考条件如下，应用时可根据不同品牌仪器的实际情况进行调整。a)色谱柱：DB-5MS毛细管柱(30m0.25mm0.25m)或其它等效柱；注：DB-5MS毛细管柱为Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其它等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)柱温：100C保持1.5min，以25C/min程序升温至280C，保持15min；SF/T0116—20213c)载气：氦气，纯度≥99.999%，流速：1.0mL/min；d)进样口温度：250℃；e)进样量：1L；f)电子轰击源：70eV；g)四极杆温度：150℃；；h)离子源温度：230℃；i)接口温度：280℃；j)检测方式：全扫描；k)质量范围：50m/z～500m/z；l)AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶和氯胺酮的保留时间与特征离子见表1。表1AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶和氯胺酮的保留时间与特征离子化合物保留时间min特征离子m/zAMP4.344、91a、120MAMP4.758、91a、134MDA6.677、136a、179MDMA7.058、135a、193哌替啶8.071、172、247a氯胺酮8.4180a、209、152a为定量离子。6.2.1.2液相色谱-串联质谱参考条件液相色谱-串联质谱参考条件如下，应用时可根据不同品牌仪器的实际情况进行调整。a)色谱柱：AllurePFPPropyl液相色谱柱(2.1mm100mm5m)或其它等效柱，前接保护住；注：Allure®PFPPropyl柱为Restek公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其它等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)流动相：A为乙腈，B为20mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸），A:B=70:30；c)流速：200L/min；d)柱温：室温；e)进样量：5L；f)离子源：电喷雾电离-正离子模式(ESI+)；g)检测方式：多反应监测(MRM)；h)离子源电压(IS):5500V；i)碰撞气(CAD)、气帘气(CUR)、雾化气(GS1)、辅助气(GS2)均为高纯氮气，使用前调节各气流流量以使质谱灵敏度达到检测要求；j)去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)应优化至最佳灵敏度；k)AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶和氯胺酮的定性离子对、定量离子对、去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)和保留时间见表2。表2AMP、MAMP、MDMA、MDA、哌替啶和氯胺酮的定性离子对、定量离子对、去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)和保留时间化合物定性离子对m/z去簇电压V碰撞能量eV保留时间minAMP136.1/119.1a20335.12136.1/91.126MAMP150.1/119.1a30166.07150.1/91.126MDMA194.2/163.4a35185.93194.2/105.029SF/T0116—20214表2（续）MDA180.1/163.1a40155.01180.1/135.128哌替啶248.3/220.3a50308.49248.3/174.130氯胺酮238.1/179.1a40255.3238.1/125.140a为定量离子对。6.2.2进样分别吸取案件样品、空白样品和添加样品提取液，按照6.2.1规定的条件进样分析。记录记录案件样品、空白样品和添加样品中可疑色谱峰的保留时间、特征离子（对）和离子（对）丰度比。方法检出限参见附录A。定性判断依据6.4.1气相色谱-质谱法以保留时间、特征离子和离子丰度比作为定性判断依据。如果案件样品中出现目标物的定性离子的特征色谱峰，保留时间与添加样品中相应标准物质的色谱峰保留时间比较，相对误差在±2%内，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且定性离子丰度比与添加样品的离子丰度比之相对误差不超过表3规定的范围，则可判定案件样品中存在该种目标物。表3离子丰度比的最大允许相对误差单位为百分数（%）离子丰度比502050102010允许的相对误差101520506.4.2液相色谱-串联质谱法以保留时间、特征离子对和离子对丰度比作为定性判断依据