GB 31613.6-2022 食品安全国家标准 猪和家禽可食性组织中维吉尼亚霉素M1残留量的测定

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准猪和家禽可食性组织中维吉尼亚霉素M1残留量的测定液相色谱-串联质谱法22中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.120X31613.6—2022Nationalfoodsafetystandard—DeterminationofvirginiamycinM1residueinedibletissuesofswineandpoultrybyliquidchromatographytandemmassspectrometrymethodGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB３１６１３􀆰６—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB３１６１３􀆰６—２０２２食品安全国家标准猪和家禽可食性组织中维吉尼亚霉素M１残留量的测定液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了猪和家禽可食性组织中维吉尼亚霉素M１残留检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于猪和家禽(包括鸡、鸭和鹅)的肌肉、肝脏、肾脏及皮＋脂中维吉尼亚霉素M１残留量的检测.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试料中残留的维吉尼亚霉素M１,用乙腈提取,正己烷除脂,液相色谱Ｇ串联质谱检测,外标法定量.５　试剂和材料以下所用的试剂,除特别注明者外均为分析纯试剂;水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　试剂５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN):色谱纯.５􀆰１􀆰２　甲酸(HCOOH):色谱纯.５􀆰１􀆰３　乙腈(CH３CN).５􀆰１􀆰４　正己烷(C６H１４).５􀆰２　溶液配制５􀆰２􀆰１　乙腈溶液:取乙腈６００mL、水４００mL,混匀.５􀆰２􀆰２　０􀆰１％甲酸溶液:取甲酸１mL,用水稀释至１０００mL,混匀.５􀆰３　标准品维吉尼亚霉素M１(VirginiamycinM１,C２８H３５N３O７,CAS号:２１４１１Ｇ５３Ｇ０)含量≥９０％.５􀆰４　标准溶液制备５􀆰４􀆰１　标准储备液:取维吉尼亚霉素M１标准品１０mg,精密称定,用乙腈适量使溶解并稀释定容至２００mL棕色容量瓶,配制成浓度为５０μg/mL的维吉尼亚霉素M１标准储备液.４℃以下保存,有效期７d.５􀆰４􀆰２　标准中间液:准确量取标准储备液０􀆰１mL、０􀆰５mL、１mL、２mL和３mL,分别置５０mL棕色容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配制成浓度为０􀆰１μg/mL、０􀆰５μg/mL、１μg/mL、２μg/mL和３μg/mL的维吉尼亚霉素M１标准中间液.４℃以下保存,有效期７d.１GB３１６１３􀆰６—２０２２５􀆰５　材料５􀆰５􀆰１　刻度试管:１０mL.５􀆰５􀆰２　有机滤膜:０􀆰２２μm.６　仪器和设备６􀆰１　液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾电离源.６􀆰２　分析天平:感量０􀆰００００１g和０􀆰０１g.６􀆰３　均质机.６􀆰４　超声仪.６􀆰５　离心机:≥４０００r/min.６􀆰６　涡旋振荡器.６􀆰７　移液器.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎并均质.a)　取均质的供试样品,作为供试试样;b)　取均质的空白样品,作为空白试样;c)　取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.７􀆰２　试样的保存－４０℃以下保存,避免反复冻融.８　测定步骤８􀆰１　提取取试料２g(准确至±０􀆰０５g),加乙腈４mL(肌肉组织先加水２mL),涡旋２min,超声３０min,４０００r/min离心１０min,取上清液转移至１５mL具塞离心管中.残渣加乙腈２mL重复提取１遍,合并上清液,备用,得到提取液.８􀆰２　净化取上述提取液,加水至约９􀆰５mL,涡旋混合３０s加正己烷３mL,涡旋３０s,４０００r/min离心１０min,弃去上层正己烷,重复除脂１次.将下层溶液转移至１０mL刻度试管中,加水至１０mL,涡旋混合３０s,备用.取备用液(肝脏:取备用液２􀆰０mL,加乙腈溶液４􀆰０mL,混匀;肾脏、皮脂:取备用液２􀆰０mL,加乙腈溶液６􀆰０mL,混匀),过滤,供液相色谱Ｇ串联质谱法测定.８􀆰３　标准曲线的制备８􀆰３􀆰１　家禽肌肉、肝脏基质匹配标准曲线的制备准确量取浓度为０􀆰１μg/mL、０􀆰５μg/mL、１μg/mL、２μg/mL和３μg/mL的维吉尼亚霉素M１标准中间液各２００μL,分别加于按７􀆰１和７􀆰２正己烷除脂处理后的空白组织提取液中,加水至１０mL,混匀,同法处理.制备成维吉尼亚霉素M１浓度为２ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、４０ng/mL和６０ng/mL的系列基质匹配标准溶液,过滤,临用现配,供液相色谱联用质谱仪测定.以测得特征离子峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.８􀆰３􀆰２　其他组织标准曲线的制备分别准确量取浓度为０􀆰１μg/mL、０􀆰５μg/mL、１μg/mL、２μg/mL和３μg/mL的维吉尼亚霉素M１标准中间液各２００μL,加乙腈溶液至１０􀆰０mL,配制成维吉尼亚霉素M１浓度为２ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、４０ng/mL和６０ng/mL系列标准工作液,临用现配,供液相色谱联用质谱仪测定.以测得特２GB３１６１３􀆰６—２０２２征离子峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.８􀆰４　测定８􀆰４􀆰１　色谱条件a)　色谱柱:C１８(１００mm×２􀆰１mm,１􀆰７μm),或相当者;b)　柱温:３０℃;c)　进样量:５μL;d)　流速:０􀆰２mL/min;e)　流动相:A为乙腈,B为０􀆰１％甲酸水溶液,梯度洗脱程序见表１.表１　梯度洗脱程序时间minA％B％０３０７０１３０７０３４２５８６４２５８６􀆰５９５５８􀆰５９５５９３０７０１０３０７０８􀆰４􀆰２　质谱条件a)　离子源:电喷雾离子源;b)　扫描方式:正离子扫描;c)　检测方式:多反应监测(MRM);d)　离子源温度:１５０℃;e)　脱溶剂温度:２００℃;f)　毛细管电压:３􀆰０kV;g)　脱溶剂气流速:８００L/h.h)　锥孔反吹气流速:１５０L/h.i)　定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量见表２.表２　药物的定性、定量离子对及锥孔电压、碰撞能量的参考值化合物定量离子对m/z定性离子对m/z碰撞能量eV锥孔电压V维吉尼亚霉素M１５２６􀆰３＞３５５􀆰１５２６􀆰３＞３５５􀆰１１８２０５２６􀆰３＞３３７􀆰１２２２０８􀆰５　测定法８􀆰５􀆰１　定性测定在相同的测试条件下,试料溶液中维吉尼亚霉素M１色谱图的保留时间与相应标准工作液中保留时间偏差应不大于±２􀆰５％;且检测到的离子的相对丰度,应当与浓度相当的标准溶液相对丰度一致.其允许偏差应符合表３的要求.表３　定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度＞５０＞２０~５０＞１０~２０≤１０允许的最大偏差±２０±２５±３０±５０３GB３１６１３􀆰６—２０２２８􀆰５􀆰２　定量测定取试料溶液和相应的基质匹配标准工作液/标准工作液,作单点或多点校准,按外标法以峰面积定量,基质匹配标准工作液/标准工作液及试料溶液中的维吉尼亚霉素M１响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述色谱Ｇ质谱条件下,维吉尼亚霉素M１基质匹配标准溶液的特征离子质量色谱图见附录A.８􀆰６　空白试验取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的步骤进行平行操作.９　结果计算试样中维吉尼亚霉素M１残留量按标准曲线或公式(１)计算.X＝A×CS×VAS×m×f(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X———试样中维吉尼亚霉素M１残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);CS———标准工作液中维吉尼亚霉素M１浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);A———试样溶液中维吉尼亚霉素M１峰面积;V———定容后溶液体积的数值,单位为毫升(mL);AS———标准工作液中维吉尼亚霉素M１峰面积;f———稀释倍数;m———试样质量的数值,单位为克(g).１０　方法灵敏度、准确度和精密度１０􀆰１　灵敏度本方法维吉尼亚霉素M１在肌肉、肝脏、肾脏和皮脂的检测限分别为２μg/kg、６μg/kg、８μg/kg和８μg/kg,肌肉的定量限为１０μg/kg,其他组织定量限为５０μg/kg.１０􀆰２　准确度本方法维吉尼亚霉素M１在家禽和猪肌肉组织１０μg/kg~２００μg/kg、肝脏和肾脏组织５０μg/kg~６００μg/kg、皮脂组织５０μg/kg~８００μg/kg测定浓度水平上的回收率为７０％~１２０％.１０􀆰３　精密度本方法批内相对标准偏差≤２０％,批间相对标准偏差≤２０％.４GB３１６１３􀆰６—２０２２附　录　A(资料性)维吉尼亚霉素M１标准溶液特征离子质量色谱图维吉尼亚霉素M１标准溶液特征离子质量色谱图见图A􀆰１.标引序号说明:１———M１特征离子质量色谱图(５２６􀆰３＞３５５􀆰１);２———M１特征离子质量色谱图(５２６􀆰３＞３３７􀆰１);３———M１总离子质量色谱图.图A􀆰１　维吉尼亚霉素M１标准溶液特征离子质量色谱图(２０ng/mL)５