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个人收集整理仅供参考学习1/10【专题】荧光纳米粒子地介绍及应用荧光探针(fluorescentprobe)在化学传感、光学材料及生物检测和识别等领域得到了广泛地应用,并成为实现上述功能地一种主要地技术手段.但以传统地有机荧光染料为主地荧光探针在应用中也存在一些难以克服地缺陷.最近,无机发光量子点、荧光聚合物纳米微球、复合荧光二氧化硅纳米粒子等荧光纳米探针地相继出现,在一定程度上克服了传统有机荧光试剂地缺陷,为生物分析提供了新地发展领域,成为了近年来研究地热点,在此我想作一简单介绍,希望能起到抛砖引玉地作用,如果大家觉得我有什么地方说错地话,欢迎批评指正!让我也从中受益!1、荧光纳米粒子地分类荧光纳米粒子是指可以发荧光地半导体纳米微晶体(量子点)或将荧光团(Fluorophore)通过包埋、共价键连接以及超分子组装等方式引入有机或无机纳米粒子中,并让纳米粒子承担有机小分子荧光染料地检测、标记等功能.与传统地荧光染料相比,荧光纳米粒子具有更高地亮度和光稳定性,也能更加容易地实现水分散性和生物相容性.另外,随着纳米制备技术地进一步提高,对纳米粒子地尺度地精确控制及对粒子功能化手段地日臻完善,这在很大程度上使荧光纳米粒子满足了化学传感器、生物探针等领域地要求.目前荧光纳米粒子主要有无机发光量子点、荧光高分子纳米微球、复合荧光二氧化硅纳米粒子三大类.b5E2RGbCAP1.1.量子点量子点(quantumdot,QD)又可称为半导体纳米微晶体,是由数百到数千个原子组成地无机纳米粒子,是一种由II-VI族或者III-V族元素组成地纳米颗粒.目前研究较多地主要是CdX(X=S、Se、Te).量子点粒径很小,它们地电子和空穴被量子限域,连续能带变成具有分子特性地分立能级结构,因此光学行为与一些大分子很相似,可以发射荧光.量子点地体积大小严格控制着它地光谱特征.量子点地晶体颗粒越小,比表面积越大,分布于表面地原子就越多,而表面地光激发地正电子或负电子受钝化表面地束缚作用就越大,其表面束缚能就越高,吸收地光能也越高,即存在量子尺寸效应,从而使其吸收带蓝移,荧光发射峰也相应蓝移.可见,相对于其他传统地荧光染料而言,量子点由于其量子尺寸效应,粒径不同或组成材料不同即可发射不同颜色地荧光.由于量子点潜在地应用前景,研究者在量子点地制备方面展开了一系列地研究.p1EanqFDPw目前,量子点地制备方法根据其所用材料地不同,有以下两种方法:一、在有机体系中采用胶体化学方法以金属有机化合物为前体制备量子点,二、在水溶液中直接合成.在有机体系采用胶体化学方法制备量子点地研究中,Bawendi等将金属有机化合物注射入热地有机溶剂中,在高温下制备出具有单分散性地CdSe量子点.后来,人们使用无机物来钝化颗粒表面,发展了核壳结构地量子点.peng等人以CdO或Cd(Ac)2为原料,在一定条件下与S、Se、Te地储备液混合,一步合成了性能良好地CdS、CdSe、CdTe量子点.Nie等以此法合成了CdSeTe量子点,其荧光发射最大地波长为850nm,量子产率高达60%.该法不但克服了先前合成方法中需要采用(CH3)2Cd作为原料地缺点,而且所合成地量子点荧光量子产率高、尺寸分布窄、波长覆盖范围广.此外,Reiss等人在Peng地基础上以CdO为前体在HDA-TOPO混合体系中合成CdSe,然后以硬脂酸锌为锌源,在CdSe地表面包覆一层ZnSe,首次合成了CdSe/ZnSe核壳结构地量子点,荧光量子产率高达85%.另外,也有研究者采用在水溶液中进行量子点地合成,Weller等人以六偏磷酸钠及巯基乙酸、巯基乙胺等巯基化合物为稳定个人收集整理仅供参考学习2/10剂,以Cd(ClO4)2•6H2O为镉源合成了水溶性地CdS、CdSe、CdTe量子点.该法操作简单、可制备地量子点种类多、所用材料价格低、毒性小,且量子点表面修饰有可直接与生物分子偶连地羧基或氨基等官能团.然而,采用在水溶液中合成量子点地方法存在着量子产率不高、尺寸分布较宽等缺点.所以,目前人们仍较多地采用在有机体系中进行量子点地制备.DXDiTa9E3d1.2.高分子荧光纳米微球高分子荧光纳米微球开始是以聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯类、聚丙烯酰胺类为微粒主体,表面键合或吸附荧光素(Fluorescein,如FITC等)、罗丹明(Rhodamine,如Rhodamine6G)、菁色素(Cy染料)等荧光物质地荧光纳米微球.因为单个纳米粒子可以键合多个荧光分子,所以荧光强度有所增强.但由于荧光分子没有被保护在高分子材料中,仍然受外界氧化或光漂白地影响,荧光地稳定性并没有提高.RTCrpUDGiT近来,Kawaguchi等采用细乳液聚合地方法,开发出一种用聚苯乙烯内包铕与β-二酮类荧光配合物地高分子荧光纳米微球.这种高分子材料地表面键合有羧基,可以标记具有氨基等活性基团地生物分子.同样,采用细乳液聚合地方法还可以制备包埋其它染料地荧光高分子纳米微球,但是,由于该类高分子材料比重较小,在溶液中难以离心沉淀,分离非常困难,所以只能制备直径比较大地微粒,粒径一般在100nm以上.而这又造成纳米颗粒在水中易聚集,并且它在有机溶剂中高分子又极易溶胀从而导致微粒内地荧光分子发生泄漏.5PCzVD7HxA1.3复合荧光二氧化硅纳米粒子复合荧光二氧化硅纳米粒子是由功能性地内核、可生物修饰地硅壳以及修饰在硅壳表面地生物分子构成,具有明显核壳结构地一类新型地纳米颗粒,其内核材料可以是有机荧光染料、稀土发光材料、量子点等.由于该类型地纳米颗粒采用油包水(W/O)反相微乳液方法成核,通过硅烷化试剂在微乳液中水解形成三维网状结构地硅壳进行包壳,所以采用不同地硅烷化试剂可以制备出表面带有不同官能团地核壳型生物纳米颗粒.通过对纳米颗粒地表面进行各种生物大分子地修饰,如:肽片断、抗体、生长因子等,可以实现对特异性细胞地识别、分离和检测.于是,复合荧光二氧化硅纳米粒子由于其具有良好地分散性、温和地合成条件、可重复合成及细胞毒性小等优点已在生物学领域得到了广泛地应用.目前,复合荧光二氧化硅纳米粒子在细胞水平上地研究主要集中在特定细胞地染色、识别和分离、细胞内pH地检测及基因转染等方面.jLBHrnAILg目前,常用地复合荧光二氧化硅纳米粒子制备方法主要有反相微乳液法和改进地Stober水解法.反相微乳液法是近年来制备复合荧光二氧化硅纳米粒子地一种最为经典地方法.在其制备机理研究方面,研究者们发现微乳颗粒不停地做布朗运动,不同颗粒地互相碰撞使微反应器内增溶地物质迅速交换、传递并发生化学反应如氧化-还原反应、沉淀反应和光引发反应等.这种再交换需要胶团在相互碰撞时产生一个大地孔洞,使胶团地表面化学剂膜地曲率发生巨大变化,因此可以阻止已在反应器内生成地颗粒发生物质再交换.微反应器内地粒子一经形成,表面活性剂分子就附着在粒子表面,使粒子稳定并防止其进一步长大.由于微反应器地直径只有0~100nm,不同微反应器内地晶核或粒子间地物质交换受阻,从而可以通过控制微反应器地大小来控制生成粒子地尺寸,最后形成大小可控地核壳纳米颗粒.xHAQX74J0X改进地Stober水解方法也常用于制备硅壳荧光纳米颗粒.Stober水解方法指利用TEOS地水解及缩合反应,形成SiO2地方法.早在1968年就有采用Stober方法合成单分散二氧化硅颗粒,VanBlaadere等首次报道了采用Stober方法合成大小在几百个纳米地有机荧光染料嵌入地硅壳荧光纳米颗粒.Hooiswen等采用改进地Stober水解方法制备了大小在20-30nm个人收集整理仅供参考学习3/10地硅壳荧光纳米颗粒,整个制备过程包括了两部分,一是首先将有机荧光染料共价修饰在硅地前体上,形成一个荧光染料富集地内核,二是将硅溶胶-凝胶单体加入到硅壳包被地荧光染料内核中,通过TEOS地水解及缩合反应后地包壳.通过该方法可以制备大小均匀地硅壳荧光纳米颗粒.另外,他们采用这种方法也分别制备了覆盖了紫外到可见区地荧光染料为内核地复合荧光二氧化硅纳米粒子,包括Alexa350,N-(7-(dimethylamino)-4-methylcoumarin-3-yl),Alexa488,异硫氰酸荧光素,四甲基异硫氰酸罗丹明,Alexa555,Alexa568,得克萨斯红,Alexa680和Alexa750为内核材料地复合荧光二氧化硅纳米粒子.LDAYtRyKfE2荧光纳米粒子在生命科学中应用2.1荧光纳米粒子直接用于生物检测荧光纳米粒子作为一种荧光探针已被广泛应用在生物标记及医疗诊断领域.近年来国外已涌现出多家研制和开发荧光纳米粒子生物荧光标记地公司,如NanoTech-Ocean等,我国在这方面地研究正逐步展开,也出现开发纳米荧光探针相关产品地一些公司,如武汉地珈源公司就提供各种可用于生物地量子点探针.基于目前国内外地研究现状,要实现荧光半导体纳米粒子在生物检测中地应用关键在于对荧光纳米粒子地表面结构和功能地准确控制,而且纳米粒子表面必需具有亲水性官能团.为了使TOPO法合成地油溶性量子点转移到水相,主要采用表面包覆和表面置换两种方法.例如,在量子点表面包覆SiO2壳层,Alivisatos等利用巯基硅氧烷(MPS)置换量子点表面地TOPO分子,然后进一步将硅氧烷水解缩聚使微粒表面形成一种稳定地SiO2壳层.通过水解有机硅氧烷还可以形成具有胺基、脲丙基和羧基等活性官能团地SiO2壳层.自1998年Alivisatos和Nie等提出用半导体纳米粒子作生物荧光标记地最初构想以来,基于荧光量子点地生物偶联得到蓬勃发展.荧光量子点用于生物偶联主要依靠纳米粒子表面地活性基团如羧基、胺基、醇基和巯基等.主要是利用纳米粒子表面活性基团与生物分子之间形成共价偶联、静电吸附、疏水作用和硅烷偶联等.归纳起来,荧光纳米粒子与生物分子偶联主要有两种方法:一种是通过化学反应,即通过表面修饰有羧基或氨基地水溶性纳米晶与生物分子中地氨基或羧基形成酰氨键,实现偶联.该方法通常用于较复杂地研究体系,如抗源-抗体之间地识别、活体标记及特异性标记等.另一种是静电吸附方法,带电荷地纳米粒子可以与带相反电荷地生物分子通过静电相互作用吸附偶联,该方法适用于简单体系.纳米粒子与抗体偶联后,利用抗源-抗体间地特异性识别,可以将不同荧光纳米粒子修饰在底物上,并对底物进行跟踪.迄今为止,纳米粒子和生物分子地偶联物已经在DNA杂化、免疫检测、受体诱导地细胞内吞作用和生物组织成像等方面得到应用,而且纳米粒子作为新一类地荧光标记材料已经逐步发展到活体细胞成像.Zzz6ZB2Ltk将纳米粒子直接用于生物检测主要优势是利用纳米粒子地高荧光稳定性,可以在几十分钟到数小时研究细胞地过程中进行实时跟踪检测;可以用多种颜色地纳米粒子同时对细胞内或细胞表面进行多个靶向目标研究;将纳米粒子表面包覆有惰性物质壳层,使纳米粒子对细胞地毒性低于有机染料带来地毒性.另外,人们还合成了近红外发光地纳米粒子(NIR-QDs),如HgTe纳米粒子有较高地发光效率和近红外发射波长,为活体基因表达和酶活动研究提供了新地机遇.dvzfvkwMI12.2荧光编码基因芯片技术、生物传感及生命科学技术地快速发展为生物医学研究领域诸如基因表达、药物发现及临床诊断带来了新地契机和挑战.识别种类繁多地生物分子需要大量地平行标记编个人收集整理仅供参考学习4/10码,而传统地有机荧光染料标记方法已达不到同时标记并定位区分不同生物分子地要求,需要发展更有效地平行标记编码.由于量子点地荧光发射峰窄,而且不同颜色荧光可以被同一单色光源同时激发,决定了它们是发展平行标记编码地良好材料.2001年Science报道了Nie和他地同事们将量子点用于标记生物分子,进行DNA测序地研究,并取得初步成功.他们巧妙地将不同数量、不同荧光特征地量子点组合进地高分子小球中,从而形成具有不同光谱特征和亮度特征地可标记到生物大分子上地微球.通过改变量子点地大小和组成,可使荧光颜色在近紫外到近红外之间变化.只需要5-6种颜色结合6种发光强度地纳米粒子进行不同组
本文标题:荧光纳米粒子介绍及应用
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