肠杆菌科的分类与鉴定

肠杆菌科的分类与鉴定肠杆菌科是临床上最常见的一类革兰氏阴性杆菌，它主要存在于人或动物的肠道以及自然界的水源、土壤中。在正常情况下，多数肠杆菌科细菌对人是无害的，有些菌种还是人体所必需的，这是因为肠杆菌科在正常寄生部位和正常寄生数量的条件下对人体具有重要的生理作用：第一节、肠杆菌科的生理作用肠杆菌科在正常寄生部位和正常寄生数量的条件下对人体具有以下重要的生理作用：1、自然菌膜的保护作用：肠杆菌科作为一种正常菌群，在肠道粘膜上生长繁殖形成一层自然菌膜。他们是非特异性的局部保护膜，可使机体抵抗病原微生物的侵袭和群集。Andreyeva等在两组HEP—2细胞上作了如下试验：HEP—2细胞（试验组）HEP—2细胞（对照组）接种大肠埃希氏菌M17株+—6个半小时后接种宋内志贺氏菌++细胞感染率低高2、非特异性免疫作用：正常菌群对人体是一种抗原刺激，可使机体产生免疫反应，从而限制了病原菌的危害性。如大肠埃希氏菌的生理作用之一就是广谱的免疫原性。有人作了如下试验：正常豚鼠无菌豚鼠接种少量痢疾志贺氏菌++结果不发生菌痢致死性溃疡性肠炎3、生物合成作用：肠杆菌科细菌能合成核黄素、生物素、叶酸、泛酸、吡多醇、维生素K和B族维生素等重要物质。如人体所需的维生素K和B族维生素等在自然食物中极少含有，必须靠大肠埃希氏菌合成，若长期使用抗生素导致大肠埃希氏菌缺失，可造成维生素K和B族维生素的缺乏。4、生物拮抗作用：肠杆菌科的生物拮抗作用主要靠与病原菌争夺营养和占据空间位置来实现。此外，大肠埃希氏菌还产生大肠菌素和酸性物质，抑制志贺氏菌和金葡菌的生长。由此可见，肠杆菌科在正常寄生部位和正常寄生数量的情况下，不仅对人体无害，并且有益，但如果其寄生部位和寄生数量发生变化，同样可引起机体的各类病变。因此，肠杆菌科的多数细菌又被称为“条件致病菌”。此外，肠杆菌科中还有一些细菌如沙门氏菌属、志贺氏菌属是世界公认的肠道病原菌。第二节、肠杆菌科的分类与鉴定一、肠杆菌科的概念肠杆菌科包括一大类生物学性状相似的革兰氏阴性无芽胞杆菌。它们需氧或兼性厌氧生长；营养要求不高，在普通培养基上生长良好；多数具有周身鞭毛（少数无鞭毛）；能分解葡萄糖产酸或产酸产气，多数能还原硝酸盐为亚硝酸盐；氧化酶（—），触酶阳性，O/F试验（F型）；DNAG+C=38—60mol%。二、肠杆菌科的初步识别肠杆菌科弧菌科非发酵菌群巴氏菌科形态短杆状弧状或逗点状球杆状球杆状鞭毛及位置周毛或无端毛周、端毛或无无氧化酶—++/—+O/F试验FFO/—F三、肠杆菌科的初步分群肠杆菌科现有31个属和8个未分类的生化群肠杆菌科的31个菌属和8个未分类的生化群（《全国临床检验操作规程》第三版）变形杆菌属Proteus沙门氏菌属Salmonella摩尔根氏菌属Morganella枸橼酸杆菌属Citrobacter普罗维登斯菌属Providencia爱德华氏菌属Edwardsiella肠杆菌属Enterobacter耶尔森氏菌属Yersinia泛杆菌属Pantoea布特维西菌属Budvicia克雷伯氏菌属Klebsiella布丘杆菌属Buttiauxella沙雷氏菌属Serratia西地西氏菌属Cedecea哈夫尼亚菌属Hafnia爱文氏菌属Ewingella埃希氏菌属Escherichia克吕沃氏菌属Kluyvera志贺氏菌属shigella莱克勒菌属Leclercia勒米诺菌属Leminorella约克纳菌属Yokenella默勒氏菌属Moellerella肠道菌58群Entericgroup58肥大杆菌属Obesumbacterium肠道菌59群Entericgroup98布拉格菌属Pragia肠道菌60群Entericgroup60光杆菌属Photorhabdus肠道菌63群Entericgroup63邻单孢菌属Plesiomonas肠道菌64群Entericgroup64拉恩氏菌属Rahnella肠道菌68群Entericgroup68塔特姆氏菌属Tatumella肠道菌69群Entericgroup69特布尔西菌属Trabulsiella肠道菌137群Entericgroup137致病杆菌属Xenorhabdus生化反应菌属苯丙氨酸脱氨酶试验葡萄糖酸盐利用试验变形杆菌属+—摩尔根氏菌属+—普罗维登斯菌属+—肠杆菌属—+泛杆菌属—+克雷伯氏菌属—+沙雷氏菌属—+哈夫尼亚菌属—+埃希氏菌属——志贺氏菌属——沙门氏菌属——枸橼酸杆菌属——爱德华氏菌属——耶尔森氏菌属——四、苯丙氨酸脱氨酶试验阳性菌群的分类鉴定苯丙氨酸脱氨酶试验阳性菌群共包括三个菌属，即：变形杆菌属、摩尔根氏菌属、普罗维登斯菌属。生化反应变形杆菌属摩尔根氏菌属普罗维登斯菌属H2S+——鸟氨酸脱羧酶+/—+—枸橼酸盐利用+—+尿素酶+—+/—迁徙生长+——苯丙氨酸脱氨酶试验阳性菌群+迁徙生长—+H2S—变形杆菌属摩尔根氏菌属普罗维登斯菌属鸟氨酸脱羧酶—枸橼酸盐利用++—普罗维登斯菌属摩尔根氏菌属1、变形杆菌属的分类鉴定变形杆菌属原来共分为四个种，即：普通变形杆菌（包括生物2群和生物3群）、奇异变形杆菌、潘尼氏变形杆菌和产粘液变形杆菌。2000年又将普通变形杆菌生物3群命名为豪萨变形杆菌。生化反应普通变形杆菌豪萨变形杆菌奇异变形杆菌潘尼氏变形杆菌产粘液变形杆菌Indol++———鸟氨酸脱羧酶——+——木糖发酵++++—七叶苷水解+————变形杆菌属I+—鸟氨酸——+—普通变形杆菌潘尼氏变形杆菌豪萨变形杆菌奇异变形杆菌产粘液变形杆菌七叶苷木糖+—+—普通变形杆菌豪萨变形杆菌潘尼氏变形杆菌产粘液变形杆菌2、摩尔根氏菌属的分类鉴定摩尔根氏菌属只有一个种，即摩尔根摩尔根氏菌。它又包括两个亚种即：摩尔根摩尔根氏亚种和摩尔根西伯尼亚种。两者的主要区别在于：后者能分解海藻糖而前者不能。3、普罗维登斯菌属的分类鉴定普罗维登斯菌属包括5个种即：产碱普罗维登斯菌、雷极普罗维登斯菌、斯图氏普罗维登斯菌、拉氏普罗维登斯菌和海氏普罗维登斯菌。其中拉氏普罗维登斯菌和海氏普罗维登斯菌主要存在于动物体内，一般不能从人体分离出，故不具有临床意义。生化反应产碱普罗维登斯菌雷极普罗维登斯菌斯图氏普罗维登斯菌侧金盏花醇++—尿素酶—++/—普罗维登斯菌菌属侧金盏花醇+—产碱普罗维登斯菌斯图氏普罗维登斯菌雷极普罗维登斯菌尿素酶+—雷极普罗维登斯菌产碱普罗维登斯菌五、葡萄糖酸盐利用试验阳性菌群的分类鉴定葡萄糖酸盐利用试验阳性菌群包括5个菌属，即：肠杆菌属、泛杆菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属和哈夫尼亚菌属。生化反应肠杆菌属泛杆菌属克雷伯氏菌属沙雷氏菌属哈夫尼亚菌属动力++—++DNA酶———+—棉子糖++++/——葡萄糖酸盐利用试验阳性菌群动力+—肠杆菌属泛杆菌属沙雷氏菌属哈夫尼亚菌属克雷伯氏菌属DNA酶+—沙雷氏菌属肠杆菌属泛杆菌属哈夫尼亚菌属棉子糖+—肠杆菌属泛杆菌属哈夫尼亚菌1、肠杆菌属和泛杆菌属的分类鉴定肠杆菌属目前共分为11个种，即；产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、坂崎肠杆菌、格高菲肠杆菌、泰洛肠杆菌、河生肠杆菌、中间肠杆菌、阿氏肠杆菌、致癌肠杆菌、溶解肠杆菌、超压肠杆菌。其中与人类关系密切、具有较大临床意义的只有前四个种。泛杆菌属有2个种即：聚团泛杆菌（聚团肠杆菌，聚团多源菌）、弥散泛杆菌。其中只有聚团泛杆菌具有临床意义，而弥散泛杆菌从未从人类标本中分离出。生化反应阴沟肠杆菌坂崎肠杆菌聚团泛杆菌产气肠杆菌格高菲肠杆菌赖氨酸———++鸟氨酸++—++精氨酸++———黄色素—++——山梨醇+—+/—+—阪崎肠杆菌在血琼脂平板上的菌落特征（18—24h）阪崎肠杆菌在营养琼脂平板上的菌落特征（18—24h）阪崎肠杆菌在血琼脂平板上的菌落特征（18—24h）阪崎肠杆菌在血琼脂平板上的菌落特征（18—24h）聚团泛杆菌在营养琼脂上的菌落特征（18—24h）肠杆菌属泛杆菌属黄色素+—坂崎肠杆菌阴沟肠杆菌产气肠杆菌聚团泛杆菌格高菲肠杆菌鸟氨酸山梨醇+—+—坂崎肠杆菌聚团泛杆菌阴沟肠杆菌格高菲肠杆菌（聚团多源菌，产气肠杆菌聚团肠杆菌）赖氨酸+—产气肠杆菌阴沟肠杆菌2、克雷伯氏菌属的分类鉴定克雷伯氏菌属现在分为2个种，即：肺炎克雷伯氏菌、催产（产酸）克雷伯氏菌。其中肺炎克雷伯氏菌又包括肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种、肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种和肺炎克雷伯氏菌鼻硬结亚种三个亚种。原来属于该菌属的土生、植生和解鸟氨酸克雷伯氏菌，2001年后被划归为劳特氏菌属。克雷伯氏菌属的2个种均具有临床意义。肺炎克雷伯氏菌生化反应催产（产酸）克雷伯氏菌肺炎亚种臭鼻亚种鼻硬结亚种I+———MR——++丙二酸盐++—+克雷伯氏菌属MR+—臭鼻亚种鼻硬结亚种催产克雷伯氏菌肺炎亚种丙二酸盐I+—+—鼻硬结亚种臭鼻亚种催产克雷伯氏菌肺炎亚种肺炎克雷伯氏菌的镜下形态和血平板上的菌落特征肺炎克雷伯菌在麦康凯琼脂平板上的菌落特征和丝状粘连（18—24h）3、沙雷氏菌属的分类鉴定沙雷氏菌属包括8个种：粘质沙雷氏菌、液化沙雷氏菌、深红色沙雷氏菌、臭味(气味）沙雷氏菌、虫媒（嗜虫）沙雷氏菌、普城（普利矛斯）沙雷氏菌、无花果沙雷氏菌。另有一个分类地位尚未确定的泉居沙雷氏菌。其中从粘质沙雷氏菌中又分出一个生物1群；臭味(气味）沙雷氏菌又分为生物1群和生物2群。沙雷氏菌属中具有临床意义的有三个种，即：粘质沙雷氏菌、液化沙雷氏菌、深红色沙雷氏菌。生化反应粘质沙雷氏菌液化沙雷氏菌深红色沙雷氏菌山梨醇++—阿拉伯糖—++沙雷氏菌属山梨醇++阿拉伯糖——++粘质沙雷氏菌液化沙雷氏菌深红色沙雷氏菌粘质沙雷菌在营养琼脂平板上的菌落特征（18—24h）4、哈夫尼亚菌属的分类鉴定该菌属只有一个种，即：蜂房哈夫尼亚菌。其特点是；不分解乳糖；发酵葡萄糖产酸产气；动力“+”；I“—”；V-P“+”；C“+”；赖氨酸“+”；鸟氨酸“+”；H2S“—”;山梨醇“—”；棉籽糖“—”。（六）、苯丙氨酸脱氨酶试验阴性；葡萄糖酸盐利用试验阴性菌群的分类鉴定临床上可以见到的苯丙氨酸脱氨酶试验阴性；葡萄糖酸盐利用试验阴性菌群包括埃希氏菌属、志贺氏菌属、沙门氏菌属、枸橼酸杆菌属和爱德华氏菌属五个属，以及耶尔森氏菌属中的小肠结肠炎耶尔森氏菌。生化反应埃希氏菌属志贺氏菌属沙门氏菌属枸橼酸杆菌属爱德华氏菌属小肠结肠炎耶尔森氏菌动力37℃+—+++/——25℃+—++++I+—/+——/+++/—C——+/—+—+/—H2S——+/—+/—+—尿素酶———+/——+赖氨酸+/——+—+—D—木糖+—+/—+—+/—苯丙氨酸脱氨酶试验阴性；葡萄糖酸盐利用试验阴性菌群动力37℃+—埃希氏菌属沙门氏菌属志贺氏菌属鲶鱼爱德华氏菌枸橼酸杆菌属爱德华氏菌属小肠结肠炎耶尔森氏菌C动力25℃+——+沙门氏菌属埃希氏菌属沙门氏菌属志贺氏菌属鲶鱼爱德华氏菌枸橼酸杆菌属爱德华氏菌属小肠结肠炎耶尔森氏菌赖氨酸尿素酶+—Indol+—沙门氏菌属枸橼酸杆菌属小肠结肠炎耶尔森氏菌鲶鱼爱德华氏菌+—埃希氏菌属爱德华氏菌属沙门氏菌属D—木糖+—埃希氏菌属爱德华氏菌属1、埃希氏菌属的分类鉴定埃希氏菌属共分为5个种，即：大肠埃希氏菌、蟑螂埃希氏菌、弗格森埃希氏菌、赫尔曼埃希氏菌、伤口埃希氏菌。最近还发现了一个未被确定的新种，称为不脱胺/凝聚埃希氏菌。在这些种中，最具临床价值的只有大肠埃希氏菌一个种。大肠埃希氏菌的镜下形态和菌落特征大肠埃希氏菌是典型的肠道正常寄生菌，但有5个血清型可引起严重腹泻。这5个血清型分别是：肠毒素型大肠埃希氏菌（ETEC）、肠致病型大肠埃希氏菌（EPEC）、肠侵袭型大肠埃希氏菌（EIEC）、肠出血型大肠埃希氏菌（EHEC）（常见者有：O157:H7）、肠凝聚型大肠埃希氏菌（EAggEC）。这5种致病性大肠埃希氏菌的鉴定主要靠血清学反应。2、志贺氏菌属的分类鉴定志贺氏菌属分为4个血清群，A群为痢疾志贺氏菌；B群为福氏志贺氏菌；C群为鲍义德志贺氏菌；D群为宋内志贺氏菌。这4个血清型的鉴定主要靠血清学反应。3、枸橼酸杆菌属的分类鉴定枸橼酸杆菌属包括11个种