急性毒性试验设计

急性毒性试验设计组员：程旺、高思杰、后若兰高阳、陈刚一、急性毒性急性毒性指人或动物一次或24h之内多次接触外源化学物后，在短期内所发生的毒性效应，包括致死效应。意义？一次：指瞬间给实验动物染毒，如经口、经静脉注射染毒。24h之内多次：指外源化学物毒性过低，需给予动物较大剂量。急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小有关。如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯丙烯腈是什么东西？实验目的确定丙烯腈急性毒性的强度，求出半数致死量LD50，并根据LD50进行急性毒性分级，掌握实验动物随机分组的方法和经口灌胃的技术。观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验提供依据；为毒理学机制研究提供线索。随机分配的方法有哪些？丙烯腈经口急性毒性试验设计实验目的确定丙烯腈急性毒性的强度，求出半数致死量LD50，并根据LD50进行急性毒性分级，掌握实验动物随机分组的方法和经口灌胃的技术。观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验提供依据；为毒理学机制研究提供线索。器材与试剂1、实验动物健康成年小鼠2、实验器材灌胃针、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、电子天平、动物体重秤、外科剪刀、镊子3、实验试剂丙烯腈、苦味酸酒精饱和液、伊红染液实验方法1、物种和品系对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管理，方便实验操作易于获得繁殖生育力强，数量较大能够保障品系纯化，价格低廉。一、实验动物选择2、实验动物的年龄与体重动物大鼠小鼠豚鼠兔犬猫成年年龄（周）3223~43~43~4体重（克）150152501.5kg7~15kg1kg寿命（年）2~32~36~84~915~2010~12动物数量：动物4～6组，每组至少10只性别：雌雄各半年龄：成年动物生理与健康状况：未产未孕者、健康动物实验动物的预检实验动物的给药前禁食处理。3、实验动物的一般要求健康动物标志发育正常、体态丰满、外观无畸形；被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱；胸阔宽阔、脊柱不弓不弯；眼睛明亮；表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）；各天然孔干净、无分泌物；行动灵活、反应敏捷。实验动物的标记染色法编号方法：小鼠头部为1号，顺时针编号，用苦味酸编个位数，用伊红编十位数。染色法优点：简单方便，不痛苦，无损伤。缺点：时间较长时，染色剂易褪色；标记容易模糊不清。随机化分组将实验动物编号，从随机数字表上任意横行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字，标于每个动物号下，然后用计划组数去除随机数字，所得余数即为所属组别。20只动物的完全随机分配动物编号1234567891011121314151617181920随即数字5483805390755378934772095466954468676786除4后余数23012312130122300332所属组别二三四一二三一二一三四一二二三四四三三二完全随机分配后各组所属动物号组别动物编号一47912二158132014三2610151819四311161720只动物完全随机分配的结果组别动物编号一4791219二1581314三26101518四311161720剂量选择及分组剂量选择广泛查阅文献资料，估计毒性中值预试，求出待测化学物0%~100%或10%~90%的大致致死剂量范围设计正式试验的剂量和分组受试物的配制方法（1）受试化学物的量取：固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重，定容，计算浓度mg/ml，备用。吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入容量瓶中，用溶剂加至刻度。吸量法，计算公式为：X＝式中：X——应吸取受试物的容积；A——设计要求的受试物浓度（mg/ml）；V——容量瓶容积（ml）；d——受试化学物比重；A·Vd×1000受试物的配制方法（2）受试化学物的稀释等浓度稀释法：等容量稀释法：各个剂量组的溶液的配制可以有两种方法：染毒途径的选择经消化道染毒：经口灌胃法采用专用小鼠灌胃针。左手抓住动物双耳后至背部的皮肤，将动物固定成垂直体位，腹部面向操作。右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食，甚至误入气管，导致动物立即死亡。观察指标中毒症状：确定靶器官①行动：不安定、多动、发声；②神经系统反应：举尾、振颤、痉挛、运动失调、姿态异常；③自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸。死亡和死亡时间病理学检查及其他指标LD50的计算LD50测定是以动物死活为指标的质反应，当死亡呈正态分配时，一般具有以下特点：剂量对数值与动物死亡频数之间为正态分布曲线关系；剂量对数值与死亡率之间为正“S”型曲线；从实验数据可计算LD50以外的其它信息。计算LD50的常用方法:概率单位法Bliss法改良寇氏（Kärber）法等LD50的计算（改良寇氏法）m=Xk-i(∑p-0.5)pqSmin式中：m——lgLD50;i——相邻两剂量组之对数剂量差值Xk——最大剂量的对数值p——死亡率q——存活率（1-p）∑p——各剂量组死亡率总和n——每组动物数急性毒性评价外源化学物相对毒性分级标准急性毒性分级（WHO）LD50的局限性消耗动物量大获得的信息有限动物死亡和观察的症状不足以反应生理学、血液学和其它化验检查所提供的毒性信息有许多因素影响LD50值的测定，实际上测得的LD50是近似值急性毒性试验不等于LD50测定可用少量动物测定ALD，并进行临床观察、化验检查和病理学检查当口服剂量大于5g/kg或注射剂量大于2g/kg时，不产生急性毒性或死亡，则不必准确的测定LD50注意谢谢！