3种抗氧化活性测定方法

一、抗氧化活性测定1．DPPH:a)样品溶液浓度初测定，（0~4℃）储藏。b)称4mg，加无水甲醇溶解于烧杯，转移至100mL容量瓶定容。浓度为0.04mg/mL。避光（0~4℃）储藏。i.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml无水甲醇）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。平行测定2次。A1ii.5ml离心管（2ml待测样+2mL无水甲醇）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。A2iii.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml待测样）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。A3清除率（Y）=[1-（A3-A2）/A1]∙100%。平行测定3次，取平均值。分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。自由基清除能力，AE=1/IC50。根据AE大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE越大清除能力越强。2．·OHa)PBS制配：磷酸二氢钠31.2g1000ml蒸馏水定容，磷酸氢二钠71.6g1000ml蒸馏水定容。移液管移液磷酸二氢钠190ml、磷酸氢二钠810ml于1000ml烧杯，pH计调7.4。b)邻二氮菲：148mg蒸馏水定容100ml。c)硫酸亚铁：208.5mg蒸馏水定容100ml。d)100ml30%双蒸馏水定容300ml。封口。i.10ml离心管（0.5ml邻二氮菲溶液+1mlPBS混匀后+0.5ml硫酸亚铁混匀后+0.5ml22OH+双蒸馏水定容10ml）37℃水浴1h后分光λ=536nm。A1ii.10ml离心管（0.5ml邻二氮菲溶液+1mlPBS混匀后+0.5ml硫酸亚铁混匀后+双蒸馏水定容10ml）37℃水浴1h后分光λ=536nm.A2iii.10ml离心管（0.5ml邻二氮菲溶液+1mlPBS混匀后+0.5ml待测样+0.5ml硫酸亚铁混匀后+0.5ml22OH+双蒸馏水定容10ml）37℃水浴1h后分光λ=536nm.A3iv.10ml离心管（1mlPBS+双蒸馏水定容10ml）37℃水浴1h后分光λ=536nm.A空。清除率（Y）=（A3-A1）/（A2-A1）∙100%平行测定3次，取平均值。分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。自由基清除能力，AE=1/IC50。根据AE大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE越大清除能力越强。3．-2O·：a)磷酸二氢钠31.2g1000ml蒸馏水定容，磷酸氢二钠71.6g1000ml蒸馏水定容。用滴管取磷酸二氢钠加入到磷酸氢二钠中，边加边搅拌，pH计测到8.2。0.2mol/L加蒸馏水稀释到0.05mol/L。b)邻苯三酚：94.58g蒸馏水溶解定容100ml。i.（5mlPBS+0.1mL蒸馏水+0.2ml邻苯三酚）4min25℃水浴（+一滴HCl终止反应。λ=325nm。A0【对照】ii.（5mlPBS+0.1ml样品液+0.2ml邻苯三酚）4min25℃水浴（+一滴HCl终止反应。λ=325nm。A1iii.（5mlPBS+0.2mL蒸馏水+0.1ml样品液）4min25℃水浴（+一滴HCl终止反应。λ=325nm。A2清除率（Y）=1-（A1-A2）/A0∙100%平行测定3次，取平均值。分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。自由基清除能力，AE=1/IC50。根据AE大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE越大清除能力越强。