动物细胞工程—动物细胞与组织培养课件

动物细胞工程—动物细胞与组织培养烧伤病人图片异体皮肤移植图片动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体制备体细胞克隆细胞核移植动物细胞工程技术动物细胞工程的基础动物细胞培养1、概念（人教版）动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个细胞加培养液制成细胞悬浮液10代细胞部分细胞“癌变”，遗传物质改变，无限传代动物细胞培养不能最终培养成动物体50代细胞原代培养传代培养细胞贴壁剥离、分瓶细胞株细胞细胞系2、过程动物细胞生长特性：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。细胞贴壁过程3.有关概念:原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？多数组织细胞固定在表面生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变思考讨论1.动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因。细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。肿瘤组织或细胞＞正常组织或细胞拓展---动物组织或细胞培养的难易程度幼体组织或细胞＞老龄组织或细胞分化程度低的组织或细胞＞分化程度高的组织或细胞2、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？保存10代以内的细胞，因为其生物学特性未发生大的变化，最接近于体内组织或细胞的生长特性，很适合用于药物测试、基因表达等实验研究。3、在动物细胞培养过程中，为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理？胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞;成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖.①.植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？②.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？③.细胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？④.既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？进一步思考：否胰蛋白酶水解蛋白质蛋白质蛋白质和磷脂能注意时间的控制不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、必须的营养物质（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核酸、嘌呤、嘧啶、激素、生长因子、动物血清等。）保证细胞顺利的生长增殖3、适宜的温度36.5+（-）0.5度4、充足的氧气和适宜的酸碱度O2和CO2（95%空气和5%CO2）问题：1、培养基的类型（1）天然培养基：营养价值高，成分复杂（2）合成培养基：成分明确，便于控制试验条件2、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基（动物体细胞大都生活在液体的环境）2、成分中有动物血清等获得细胞细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物组织和动物细胞培养的比较动物细胞培养应用大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据课堂小结动物细胞和组织培养（原理、材料选择及原因、一般过程、培养条件、主要应用）注意：①概念理解：原代培养、传代培养、细胞株、细胞系②胰蛋白酶处理的原因、目的和注意事项③动物细胞培养和植物组织培养的区别