植物总RNA的提取实验

1、植物总RNA的提取RNA的制备与分析对于了解基因在转录水平上的表达与调节和cDNA的合成都是必须的，RNA的纯度和完整性对于Northernblot，RT-PCR和cDNA文库的构建等分子生物学实验都至关重要。RNA分离的方法很多，最关键的因素是尽量减少RNA酶的污染。本实验采用异硫氰酸胍(GTC)和β-巯基乙醇等抑制RNA酶利用GTC和N-十二烷基肌氨酸钠将促使核蛋白复合体解离，使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中,用乙醇沉淀方法分离RNA。本实验从番茄幼苗中提取总RNA的提取，掌握Trizol提取的方法和步骤。一材料与方法1.植物组织设备番茄（Lycopersiconesculentum）幼苗为材料，利用移液器，冷冻高速离心机，低温冰箱，台式高速离心机，液氮罐，陶瓷研钵，1.5ml离心管等设备。2.试剂本实验中所有试剂均用无RNA酶灭菌水，用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃2小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌而得到。75%乙醇，氯仿:异戊醇(24:1byvolume)或氯仿，异丙醇、无水乙醇、70％乙醇，Trizol试剂等试剂由分子。

2、生物学实验室提供。3.实验方法1.50-100mg组织在液N中磨成粉末后，加入1mlTrizol液，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。2.研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。3.取上层水相于一新的离心管，加入等体积异丙醇，室温放置10分钟，10000r/min离心10分钟。4.弃去上清液，按每mlTrizol液加入至少1ml的比例加入70%乙醇，涡旋混匀，4℃下10000r/min离心5分钟。5.小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10分钟，注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于TE或DEPC处理过的水中，必要时可55℃-60℃水溶10分钟。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。5.检测利用DNA的紫外分光光度计检测提取的RNA样品纯度和浓度。一般OD260/OD2801.8时，样品纯度符合要求，计算其浓度由下面公式计算。1OD260=40μg/mLRNA，RNA（μg/ml）=测的OD值*40二实验结果经三次·紫外可见分光光度计UV-18。

3、00(PC)测定结果如下。序号OD260OD280OD260/OD28010.12000.06091.9720.11800.06081.9430.11900.06161.93平均0.11900.06111.94样品中的RNA浓度计算:RNA（μg/ml）=测的OD值*40=0.1190*40=4.76（μg/ml）样品OD260/OD280值为1.94,介于1.8与2.0之间,样品纯度符合进一步实验要求。三讨论实验收获，注意事项，出现偏差结果的原因分析等。。