大创实验流程

干旱胁迫对山茶花生长发育和光合特性的影响盆栽山茶花,土壤水分含量不同,共设6个处理,每处理3次重复。(a)连续3天不浇水。（b）连续5天不浇水。（c）连续7天不浇水.（d）连续9天不浇水.(e)连续11天不浇水。(f)设置1组常规浇水作对照,使盆土不呈干燥状。一、生长指标的测定：实验器材：烘箱、卷尺、电子天平、千分尺（或叶片厚度测定仪）、单位方格为1cm2的坐标纸实验具体步骤（1）、观测七心红山茶干旱胁迫前后叶片的数量和最长主茎的生长长度，并计算叶片数增加率和最长主茎增长率。（2）、中部叶片含水量的测定：剪下叶片后立即称鲜重;将叶片装人洁净干燥的称量瓶,放人烘箱,105℃下处理5h,取出称干重。RWC=(鲜重—干重)/鲜重x100%（3）、单叶面积和比叶重（干重）：将叶片装人洁净干燥的称量瓶,放人烘箱,105℃下处理5h；（4）山茶单叶面积：沿着叶子的形状将其画下来，画在透明的坐标纸上。然后数格子。计算格子时，叶片边缘凡超过半格的计算为1，不足半格则不计数。一般画坐标纸时，每个格子长宽各为1cm，所以面积为1cm2。因此，数出的个子数就是叶片的面积数（单位为cm2）；（5）叶片厚度二、生理指标的测定：（1）叶绿素含量的测定：实验试剂及工具95％乙醇、分光光度计、滤纸、25ml容量瓶、研钵、漏斗、烧杯实验步骤1、取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。2.称取剪碎的新鲜样品0.2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。3.取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。4.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。5.把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度。实验结果将测定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。据此即可得到叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb：mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。最后根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量：叶绿素的含量（mg/g）=[叶绿素的浓度×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。（2）花青素含量的测定：实验试剂：甲醇、盐酸、2%盐酸甲醇（4℃隔夜）：盐酸：甲醇=2：100（V/V）试验仪器和用具：电子天平（1/100000）、100ml容量瓶、分光光度计实验步骤1、精密称取样品20mg，加60ml2%盐酸甲醇溶解，4℃隔夜冷却，定容至100ml，摇匀，过滤，待测。2、用1cm玻璃比色皿在540nm波长下测定其吸光度A，用2％盐酸甲醇溶液作空白对照。（吸光度应控制在0.3～0.7之间，否则应调整试样液浓度，再重新测定吸光度。）实验结果A×VX=---------------------×100%1020×W×100其中：X：花青素含量，%；A：样品在波长为540nm处的吸光度值；V：样品稀释体积，mL；W：样品的称样量，g；1020：飞燕草素的比吸光值。