大肠菌群检验技术.

清远震兴农产品有限公司大肠菌群检验培训检验依据•食品微生物学检验大肠菌群计数（GB4789.3-2010）第一法大肠菌群MPN计数法术语和定义•大肠菌群：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性艳阳革兰氏阴性芽孢杆菌。•最大可能数MPN：基于泊松分布的一种间接计数方法。设备和材料•恒温培养箱：36±1℃•恒温水浴箱：46±1℃•天平：感量为0.1g•无菌吸管：1ml(具有0.01ml刻度）或微量移液器培养基和试剂•月桂基硫酸盐胰蛋白胨LST•煌绿乳糖胆盐BGLB•无菌生理盐水检验程序检样25g(ml)样品+225ml生理盐水，均质10倍系列稀释选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种LST肉汤管不产气36±1℃24±2h产气BGLB肉汤36±1℃48±2h不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查MPN表报告具体操作步骤标示取样初发酵试验接种1ml原液到LST肉汤，共3管接种1ml原液到9ml生理盐水，相当于稀释成10-1样品液初发酵接种10-1稀释样品液到LST肉汤，每管接种1ml，共3管。然后再稀释接种。以此类推，每个稀释度接种3管，接种3个连续稀释度，共9管。培养条件24±2h观察结果稀释度10010-110-2阳性管数200阳性：指产酸产气复发酵试验注意：接种环要彻底灼烧灭菌复发酵试验注意：接种完毕要灼烧灭菌接种培养条件培养条件：36±1℃，48±2h观察结果凡是不符合产酸产气两者条件的，报告大肠菌群阴性产酸产气，报告大肠菌群阳性大肠菌群最可能数（MPN）的报告根据复发酵观察结果，查国标《食品微生物学检验大肠菌群计数》（GB4789.3-2010）附录B大肠菌群最可能数（MPN）检索表例如：观察结果如下例如：稀释度10-110-210-3检样量g/ml0.10.010.001阳性管数200根据检索表查出9.2cfu/g（ml），相当于每100g（ml)样品中最大可能数是920个大肠菌。稀释度10010-110-2检样量g/ml10.10.01阳性管数200当检样量是检索表的10倍时，检索表的结果要降低10倍，即查出结果9.2cfu/g（ml），再降低10倍，准确报告应是0.92cfu/g（ml），其余以此类推。回顾检验程序24±2h无菌取样培养条件：36±1℃,24±2h初发酵：选择三个适宜的连续稀释度的样品液，每个稀释度接种3管，每管接种1ml，共9管培养条件：36±1℃,48±2h复发酵：产酸产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，接种于BGLB管中练习根据观察结果检索稀释度10-210-310-4阳性管数212怎么报告结果练习题答案稀释度10-110-210-3阳性管数212MPN27cfu/g答案：27*10=270cfu/g稀释度10-210-310-4阳性管数212培训到此结束谢谢！