实验九环境因素对微生物生长的影响

微生物实验报告第九次实验环境对微生物生长的影响学院：生命科学学院专业：生物科学类年级：2010级姓名：学号：10070400852012年6月16日实验九环境因素对微生物生长的影响一、实验目的1、了解渗透压及生物因素（抗生素）对微生物生长的影响。2、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。3、进一步掌握培养基的制备及划线操作。二、实验原理微生物的生长繁殖受外界环境因素的影响，环境条件适宜时微生物生长良好，环境条件不适宜时微生物生长受到抑制，甚至导致微生物死亡。物理、化学、生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不尽相同，而不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。1、渗透压微生物在等渗溶液中可正常生长繁殖；在高渗溶液中细胞失水，生长受到抑制；在低渗溶液中细胞失水膨胀，因为大多数微生物具有坚硬的细胞壁，细胞一般不会裂解，可以正常生长，但低渗溶液中溶质含量低，在某些情况下也会影响微生物的生长。另一方面，不同类型微生物对渗透压变化的适应能力不尽相同，大多数微生物在0.5%~3%NaCl浓度条件下生长受到抑制，但某些极端嗜盐菌可在30%以上NaCl浓度条件下正常生长。2、生物因素（抗生素）在自然界中普遍存在微生物间的拮抗现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性地抑制或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。了解某种抗生素的抗菌谱在临床治疗上有重要的意义，利用滤纸条法可初步测定抗生素的抗菌谱。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上想四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同实验菌与滤纸条垂直划线接种、培养后，根据抑菌带的长短可判断改抗生素对不同实验菌生长的影响的程度，初步确定其抗菌谱。三、实验器材及实试剂1、菌种大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌。2、试剂培养基牛肉膏蛋白胨液体培养基，装有牛肉膏蛋白胨的5支试管中中分别含有0.5%、2%、5%、7.5%及10%的NaCl。无菌蒸馏水、氨苄青霉素溶液（80万单位/ml）。仪器和其他用品酒精灯、接种环、镊子、培养皿、无菌吸管、试管、三角瓶、无菌滤纸条。四、实验方法及步骤1.培养基和培养液的配置⑴全班分组共同配制下列五组溶液：①牛肉膏蛋白胨琼脂培养基＋0.5%NaCl3000mL②牛肉膏蛋白胨液体培养基＋3.0%NaCl100mL③牛肉膏蛋白胨液体培养基＋5.0%NaCl100mL④牛肉膏蛋白胨液体培养基＋7.5%NaCl100mL⑤牛肉膏蛋白胨液体培养基＋10%NaCl100mL⑵用移液管把液体培养基均匀各取5mL放入试管中，把加热融化后的固体培养基分装到12个三角瓶中。⑶把平板、试管、移液管等用品包装好并放入灭菌锅灭菌30min。2.抗生素对微生物的影响⑴倒平板：无菌操作，将牛肉膏琼脂蛋白胨培养基溶化后倒平板，注意平板的厚度均匀。⑵贴滤纸条：无菌操作，将镊子去滤纸入氨苄青霉素溶液中湿润，在容器内壁沥去多余溶液，再将滤纸条贴在平板上。⑶接种:无菌操作，用接种环分别取埃希氏大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌，从滤纸边缘分别垂直向外划线接种，并用首字母做好标记。⑷培养观察：放入37℃的温箱中培养，观察生长情况并记录。3.渗透压对微生物生长的影响⑴取培养液：从各小组取到各浓度培养液做好标记，按浓度梯度顺序排列好摆放在试管架上。⑵接种：每一个试管中分别取一环枯草杆菌接入溶液中，轻轻摇一下放好就不再动。⑶培养、观察：培养一段时间后观察生长情况并记录。五、实验结果及分析结果观察：(1):渗透压对实验的影响2.0%NaCl试管液面有菌膜，中部有沉淀物5.0%NaCl试管中部有少量沉淀7.5%NaCl试管底部有少量沉淀，液体少许浑浊10%NaCl试管液体比较清澈结果分析：在2.0%NaCl的培养基中培养，菌体长势良好，表明2.0%NaCl适合枯草杆菌的生长。但随着NaCl的浓度的升高，枯草杆菌的生长也逐渐受到抑制，当浓度升高到10%时，菌体几乎完全不能生长。因为环境渗透压过高，这样就直接作用细胞壁、细胞膜，导致细胞内的渗透压的改变，当渗透压很大时，细胞会严重的脱水，因失水其代谢功能会下降，甚至丧失而不能存活。结果观察(2):生物因素（抗生素）对微生物生长的影响结果分析：埃希氏大肠杆菌（Escherichiacoli）、枯草杆菌（Bacillussubtilis）金黄色葡萄球菌（Staphylococcusareus）分别是革兰氏G-杆菌、革兰氏G+杆菌、革兰氏G+球菌的代表，由观察图可知，革兰氏G+菌的生长受到抑制，因为革兰氏G+的细胞壁含有大量的磷壁酸。所以金黄色葡萄球菌（Staphylococcusareus）埃希氏大肠杆菌（Escherichiacoli）产生的菌株普带比枯草杆菌（Bacillussubtilis）的短，其中金黄色葡萄球菌（Staphylococcusareus）产生的谱带最短。同时这也是区别革兰氏阴性菌和阳性菌的重要指标，革兰氏G+菌对抗生素过敏，当其生长环境中有抗生素存在时，抗生素会破坏其细胞壁，使其细胞壁透性改变，不能正常维持其细胞内正常代谢功能，因此就会影响其生长繁殖。因此，革兰氏阳性菌不能存活或存活微弱。在图中生长良好的是埃希氏大肠杆菌（Escherichiacoli），它是革兰氏G-菌，其细胞壁中不含磷壁酸，因而其生长不受抗生素抑制，所以能在培养基看到起菌落。