分子生物复习题(整理版)副本

microRNA研究1、比较miRNA和siRNA的异同。miRNAsiRNA产生细胞内RNA的固有（正常）病毒感染和人工插入后诱导产生来源内源转录本转基因或病毒RNA（外源）互补性不完全互补，存在错配现象完全互补途径miRNA途径RNAi途径对RNA的影响在RNA代谢的各个层面进行调控降解靶mRNA功能调节内源基因的表达，在蛋白质合成水平发挥作用，与mRNA的稳定性无关抑制转座子活性和病毒感染，在转录后水平发挥作用,影响mRNA的稳定性相同：均为Dicer的产物，长度基本相同，均需Argonaute家族蛋白的存在，同为RISC的组分。2、简述miRNA加工成熟的主要步骤。据体内外实验研究表明miRNA的生成需要两个步骤：1)细胞核中，基因组转录形成长链RNA分子pri-miRNA，pri-miRNA经双链RNA核酸酶Drosha酶作用生成70nt左右的pre-miRNA。2)Pre-miRNA在Exportin5介导作用下转运出胞核至胞质中进行下一步加工。2)细胞质中，将pre-miRNA经双链RNA核酸酶Dicer酶作用加工为成熟的单链miRNA。3、名词解释：microRNA：广泛存在于真核生物中的一组短小的、不编码蛋白质的RNA家族，表达具有组织特异性和阶段特异性。与靶mRNA结合，在转录后水平调控基因的表达，在胚胎发生、发育时序、器官分化、程序性细胞死亡和癌症等过程中发挥着重要作用基因工程名词解释:1.基因工程（geneengineering）：在体外条件下，人工将DNA分子“剪切”并重新“拼接”，形成一个新的杂合的DNA分子，然后将它导入微生物或真核细胞中表达，产生人类所需要的基因产物或改造、创造新的生物类型的生物技术2.载体（vector）：载体是供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达和复制的运载工具。一般为质粒，噬菌体或病毒，通常大多经过人工改造。为了便于获得阳性克隆，载体上常有筛选标记，如抗菌素的抗性，某些基因产物的显色反应等。问答题:1.基因工程的基本程序？1.目的基因的获得2.目的基因与载体的连接3.连接产物转化至宿主细胞4.阳性重组体的扩增、筛选与鉴定5.目的基因在细胞中的表达6.表达产物的分离、鉴定等总述复习题:1.简述mRNA、tRNA的功能.mRNA的功能：携带遗传密码，作为蛋白质生物合成的模板。把DNA所携带的遗传信息，按碱基互补配对原则，抄录并传送至核糖体，用以决定其合成蛋白质的氨基酸排列顺序。tRNA的功能：活化、搬运氨基酸到核糖体，参与蛋白质的翻译。2.核酸的变性、复性的概念.DNA变性(denaturation)：DNA二级结构和三级结构受到物理化学因素的破坏而解体，但其一级结构核苷酸间共价键并不断裂。DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。凡能破坏双螺旋稳定性的因素，如加热、极端的pH、有机试剂等，均可引起核酸分子变性。复性(renaturation)：变性DNA在适合的条件下，又可使两条彼此分开的链重新缔合，按原来的碱基对配对形成双螺旋结构的过程。3.DNA复制的基本规律（50）1)半保留复制：每个子代DNA双链都是由一条亲代和另一条新合成的核苷酸链组成。2)DNA新生链按5′→3′方向复制。3)复制的半不连续性：一条新生链是连续复制，另一条新生链是不连续复制。4)RNA引物引发复制：DNA复制是由模板链特定序列上RNA引物合成起始。5)有复制起点、复制方向和复制子6）DNA复制具有高度忠实性。DNA聚合酶的校正功能，错配修复系统，RNA引物作用。4.名词：端粒（Telomere）：真核生物染色体末端由许多简单重复序列和相关蛋白质组成的复合结构，具有维持染色体结构完整性和解决其末端复制难题的作用。端粒酶（Telomerase）：由蛋白质和RNA组成的一种逆转录酶，以自身RNA为模板，合成端粒重复序列，加到新合成DNA链末端。人体内端粒酶出现在大多数的胚胎组织、生殖细胞、炎性细胞、更新组织的增生细胞以及肿瘤细胞中。端粒酶活性的缺失将导致端粒缩短。半保留复制：新合成的每个子代DNA双链都是由一条保留的亲代和另一条新合成的核苷酸链组成，称为半保留复制。复制叉：DNA开始复制时，亲本DNA双链在复制起点处解开，DNA分子上产生“Y”形连接区段，新生链在此合成，此部位称为复制叉。基因（gene）：一段有功能的DNA片段，生物细胞中DNA分子的最小功能单位。基因表达1.基因转录的基本特征。对于一个基因组（genome），转录只发生在一部分基因，而且每个基因的转录都受到相对独立的控制。转录是不对称的，基因转录只能以双链DNA分子中的一条链作为模板，而另一条链不能作模板。RNA的核苷酸序列由DNA模板的核苷酸序列决定。与DNA聚合酶不同，RNA聚合酶在RNA合成的起始阶段不需要引物参与。RNA链与模板DNA链方向相反。2.基因转录的过程。转录的起始：RNA聚合酶与DNA模板特殊区域的结合与起始转录的延伸：RNA链延伸转录的终止：合成终止与新生RNA链释出。3.试述蛋白质生物合成的三个阶段。肽链合成的起始：1.氨基酸活化2.起始复合物生成肽链的延长肽链合成的终止4.遗传密码子及其特征。遗传密码(geneticcode)：能编码蛋白质氨基酸序列的基因中的核苷酸体系密码子：mRNA分子上从5′→3′方向，由起始密码子AUG开始，每3个核苷酸组成的三联体，决定肽链上某一个氨基酸或蛋白质合成的起始、终止信号，称为三联体密码。遗传密码的特点：简并性：指一个氨基酸具有2个或2个以上的密码子摆动性：密码子与反密码子配对，有时会出现不遵从碱基配对规律的情况，称为遗传密码的摆动现象通用性：除个别细胞器的特殊密码子外，蛋白质生物合成的整套密码，从简单生物到人类都通用连续性：mRNA的读码方向从5‘→3’，两个密码子之间无任何核苷酸隔开偏爱性：密码子使用频率的差异5.名词解释transcription转录：以DNA为模板，在RNA聚合酶作用下合成RNA的过程。promoter启动子(promoter)：与基因转录启动有关的特定保守序列；启动子本身不被转录基本转录因子：是RNA聚合酶结合启动子所必需的一组蛋白因子，决定三种RNA(mRNA、tRNA及rRNA)转录的类别。特异转录因子：为个别基因转录所必需，决定该基因的时间、空间特异性表达。基因表达调控1，名词解释顺式作用元件(cis-actingelement,CAE)：就是指存在于基因旁侧序列中可影响基因表达的序列，主要包括启动子、增强子、负调控序列和可诱导元件等；反式作用因子(trans-actingfactor,TAF)：则指参与基因表达调控的蛋白因子，它们可以与靶基因的顺式作用元件相结合而起作用，反式作用因子一般具有DNA结合域和蛋白—蛋白相互作用结构域。2.基因表达调控从哪些环节发挥作用？四个基本的调控点：1.基因结构的活化。DNA暴露碱基后RNA聚合酶才能有效结合。2.转录起始。最有效的调节环节，通过DNA元件与调控蛋白相互作用来调控基因表达。3.转录后加工及转运。RNA编辑、剪接、转运。4.翻译及翻译后加工。翻译水平可通过特异的蛋白因子阻断mRNA翻译；翻译后对蛋白的加工、修饰也是基本调控环节。3.原核生物和真核生物基因表达调控各有何特点？(21)(57)原核基因转录调节特点1、转录起始是主要的调节环节2、σ因子决定RNA聚合酶识别特异性3、操纵子调控模式的普遍性4、操纵子受阻遏蛋白的负性调节真核基因至少有三点区别与原核基因：（1）转录的激活与被转录区的染色质结构变化有关；（2）尽管正负调控元件都有，但正调控机制占主导地位；（3）真核基因的转录和翻译有物理分割，分属于核内行为及胞质行为，这种时空差别使真核基因的调控更为复杂、有序。基因诊断1、基因诊断的优点和应用如何？(8)高特异性：诊断目标高灵敏性：分子生物学方法早期诊断性：分子遗传学规律应用广泛性：疾病与非疾病检查临床意义既可对症状后的某些疾病做出诊断；还可提供预防性治疗措施。预测性遗传筛查，可预防和阻止各种严重的遗传性或先天性疾病的发生，对推动人口优生优育中有重大意义。对分析某些重大传染性流行病病原体的优势流行株、新毒株的地域来源、病原体进化过程的规律，有独特优势。扩大了临床诊断实验室的功能范围。使法医物证检验提高到新水平。2、基因治疗的概念和策略是什么？根据对致病基因或相关基因的了解程度决定基因诊断的技术途径选择。1）基因置换2）基因添加3）基因干预4）自杀基因治疗5）基因免疫治疗3、名词解释：基因诊断：利用分子生物学技术，通过检测基因及基因表达产物的存在状态，对人体疾病作出诊断的方法。基因诊断检测的目标分子是DNA、RNA，也可以是蛋白质或者多肽。基因治疗：指将目的基因通过基因转移技术（病毒载体介导或者非病毒载体介导的基因转移技术）导入靶细胞内，目的基因表达产物对疾病起治疗作用。