利用小麦内生真菌生物防治小麦全蚀病研究

河南大学硕士学位论文利用小麦内生真菌生物防治小麦全蚀病研究姓名：李文峰申请学位级别：硕士专业：遗传学指导教师：王刚20090501利用小麦内生真菌生物防治小麦全蚀病研究作者：李文峰学位授予单位：河南大学相似文献(10条)1.期刊论文曹荣花.刘晓光.高克祥.MendgenK.康振生.CaoRonghua.LiuXiaoguang.GaoKexiang.MendgenK.KangZhensheng芦苇内生真菌ChoiromycesaboriginumMü1w1c6的拮抗作用及其生物防治潜力-植物保护学报2008,35(2)Choiromycesaborig.inumMü1w1c6是一株分离自芦苇的拮抗内生真菌.通过离体平板对峙培养检测和光学、电子显微镜观察,以及测定在活体植物上的拮抗活性,研究芦苇内生真菌Choiromy-cesaboriginumMü1w1c6与病原菌及其寄主植物黄瓜之间的相互作用.对峙培养显示出较强的营养和空间竞争能力,对病原菌菌丝生长抑制率多高于60%,对立枯丝核菌Rhizoctoniasolani的抑制率达到100%.显微观察证明它与多种病原菌有缠绕等重寄生现象.在互作研究中,CaboriginumMü1w1c6可成功定殖于黄瓜苗的根部,预先接种能有效抑制瓜果腐霉Pythiumaphanidermatum在黄瓜根部组织细胞内的扩展和定殖,对P.aphanidermatum引起的黄瓜苗期猝倒病有良好的防效,接种一次内生菌防治效果为44.29%,接种两次生防效果高达88.49%.结果表明,C.aboriginumMü1w1c6对多种植物病原真菌具有广谱的拮抗活性,对黄瓜苗期猝倒病具有较好的生防潜力.2.学位论文张晓娟高羊茅内生真菌的分离、鉴定及其生物防治的初步研究2006禾草内生真菌在寄主体内渡过全部或几乎全部生活周期而不表现任何症状，与宿主互惠互利，提高宿主对生物胁迫(抗虫、抗菌等)和非生物胁迫抗性的能力，使得共生体系具有较强的竞争力。禾草内生真菌产生丰富多样的次生代谢产物，具有多种生物活性，对害虫和植物病原菌起到抑制和灭杀作用，这些优良特征能够使内生真菌有望成为生物农药。因此对禾草内生真菌在植物病害生物防治方面的研究不但具有经济价值和生态学意义，还有现实的理论意义。本文从高羊茅交战II的植物组织中分离内生真菌，利用形态学和分子生物学的方法对之鉴定，筛选内生真菌抑菌谱，并对抑菌机理做了研究，试验结果如下：1．高羊茅内生真菌的分离与鉴定采用苯胺兰染色法检测多年生黑麦草和高羊茅部分商业品种的种子，高羊茅交战II种子的内生真菌感染率最高，达到73[％]。用组织捣碎的固液分离法从高羊茅交战II植株分离得到6株白色菌株，通过组织印迹以及孢子灭活试验证明所分离的菌株为内生的。从形态学和分子生物学两方面鉴定6株内生真菌。6株真菌按形态划分为2个菌群，菌l(J21、J22、J25、J26)电镜扫描观察孢子形状为肾形，长约6.4-10μm，分子生物学鉴定采用AP-PCR的方法，在0.7，0.9，2.1kb左右出现条带。菌II(J23、J24)电镜扫描观察分生孢子形状为长卵形，4.1-7.2×1.2-1.5μm.，分子鉴定采用18SrDNA法，进行系统发育分析。综合形态学和分子生物学鉴定结果，菌Ⅰ为禾草内生真菌的优势菌株Neotyphodiumcoenophialum，菌Ⅱ与Acremoniumalternatum有非常高的相似性。本文首次从高羊茅株中分离得到Acremoniumalternatum，Acremoniumalternatum-F.arundinace是一种新的稳定的共生体系，这对于研究禾草及其内生真菌的共生体系提供了宝贵的资料。2．6株内生真菌的生物学特征对6株内生真菌利用碳源的能力做了初步研究，结果表明6株菌可以利用果糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖等碳源MS改良培养基，生长良好。牛奶石蕊试验菌落周围无明显的透明圈，说明分离的内生真菌不具备水解蛋白的能力。3．内生真菌抑菌谱试验抑菌谱的筛选发现6株内生真菌对核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)、番茄灰霉病原菌(Botrytiscinerea)、番茄晚疫病原菌(Phytophthorainfestans)等植物致病菌有一定的抑制作用。其中J24对核盘菌抗性较为明显，与核盘菌之间有明显的拮抗带，宽为13ram，可以作为潜在的生防菌深入研究。4．J24对核盘菌抗性的初步研究采用玻璃纸条法研究J24寄生能力，J24不是核盘菌的寄生菌。J24难挥发性代谢产物的抑菌作用的研究(采用圆盘滤膜法)，发现可以抑制核盘菌菌丝生长，抑制率达到69％：平板上形成菌核的重量减少率为49.7％，菌核萌发率为69.2％。上述研究表明J24对核盘菌的生物拮抗的机理不是通过重寄生破坏菌丝，而是次级代谢产物的存在产生作用。J24有望成为核盘菌的生防菌。5．J24活性物质发酵条件的优化：从不同的初始pH、温度、转速、装液量、接种量5方面优化培养条件为：温度28℃，转速200rpm，初始pH6，接种量10％，装液量30％。3.期刊论文邓祖军.曹理想.谭红铭.周世宁一株秋茄内生真菌(MF59)对植物病原真菌拮抗活性的研究-中国高新技术企业2007,(7)从红树林植物秋茄茎部中分离到一株内生真菌MF59.经鉴定为曲霉属.平板对峙实验结果表明,它对茄熊棱菌、尖孢镰刀菌、蜡叶枝霉等多种植物病原真菌表现出良好的拮抗活性,它有可能成为对由这些病原真菌引起的植物病害进行生物防治的良好的微生物菌株.4.期刊论文王丽娟.刘苏萌.司艳红.何培新油菜内生真菌的分离及其抑菌活性的研究-安徽农业科学2008,36(10)[目的]探讨油菜内生真菌的抑菌活性.[方法]从油菜的不同组织内分离内生真菌,研究它们对植物病原真菌的抑制作用,并对活性菌株进行了初步鉴定.[结果]从油菜的根、茎、叶中共分离出12株内生真菌,其中2株(WG5和WJ2)对病原真菌均有不同程度的抑制作用,尤其对油菜菌核病菌和小麦黄斑叶枯病菌的抑制率最高,而且其发酵滤液经高温处理后活性不丧失,对病原真菌仍有较强的抑制作用,具有一定的生防潜能.[结论]油菜内生真菌可以产生具有抑菌活性的次生代谢产物,为新型活性物质的筛选提供新的途径.5.学位论文古燕翔内生真菌和外源诱导物水杨酸对草坪型高羊茅弯孢霉叶斑病的影响2002生物防治是草坪病害防治的一种重要途径,该研究以生物防治草坪草弯孢霉叶斑病为出发点,从种植的草坪型高羊茅（FestucaarundinaceaSchreb.）交战Ⅱ（CrossfireⅡ)(以下简称交战Ⅱ）植株中,分检并分栽含有内生真菌（简称带菌）和不含内生真菌植株（简称不带菌）,对带菌和不带菌植株接种新月弯孢霉（CurvularialunateBoed）病原菌,进行致病性的测定,得出影响新月弯孢霉致病性的因素.在最适宜弯孢霉叶斑病发病的条件下,对带菌和不带菌植株接种新月弯孢霉,测定内生真菌影响交战Ⅱ抗病性的有关生理指标.6.期刊论文游玲.王涛.王松.杜江两株油樟内生真菌抗真菌活性与降解纤维素研究-安徽农学通报2009,15(13)为了研究两株油樟内生真菌对植物病原真菌的抑制作用,并对其生防能力做出评价,采用对峙生长法研究了油樟内生真菌YY6、YG48对辣椒疫霉病原真菌(PhytophthoraCapsici)、杨树溃疡病原真菌(Dothiorellagregaria)、苹果炭疽病原真菌(Glomerellacingulata)、棉花枯萎病原真菌(Fusariumoxysporum)、玉米大斑病原真菌(Fusariumgraminearu)、水稻纹枯病原真菌(Corticiumsasakii)的抗菌活性,同时采用滤纸酶活测定法检测其发酵液的纤维降解能力.发现油樟内生真菌YY6对辣椒疫霉、杨树溃疡、苹果炭疽、棉花枯萎及玉米大斑这5种常见植物病害的病原真菌具有明显抑制作用,其发酵液的滤纸酶活性可达0.327U/mL,YG48对辣椒疫霉病原菌、玉米大斑病原菌及水稻纹枯病原菌具有明显抑制作用,很难降解利用纤维素.因此,YY6具备开发为多种植物病害生防菌的潜力.7.学位论文曹荣花芦苇内生真菌的拮抗作用及生防效果初探2008内生真菌ChoiromycesaboriginumMu1W1C6、StachybotryselegansMt2W1C1和Cylindrocarponsp5/97-12Mt2W3C4是从德国康斯坦茨波登湖区芦苇中分离的优势菌株。本文通过研究三株内生菌与多种植物病原菌的拮抗活性及对温室植物病害的防治,为进一步明确其生防机制奠定了良好的理论基础,同时也为研究内生真菌与病原物和寄主植物之间的互作,为Mt2W1C1、Mt2W3C4和Mu1W1C6应用于植物病害生物防治并提高其生防效果提供了理论依据。研究内容及结果如下：1.平皿对峙试验。结果表明,Mu1W1C6,Mt2W1C1和Mt2W3C4对11种植物病原菌菌丝的生长有不同程度的抑制作用,有四种类型是型互作用：(a)菌落接触后成僵持状态,都不再生长；(b)僵持状态后内生菌部分覆盖病原菌的菌落；(c)僵持状态后内生菌的菌落会完全覆盖病原菌菌落；(d)两菌落生长均不受影响。显微观察表明内生菌Mu1W1C6、Mt2W1C1和Mt2W3C4单独培养时没有寄生现象发生,而当和病原菌对峙培养时,内生菌可以贴生和缠绕病原菌的菌丝、侵入到寄主菌丝体内部生长、甚至可以穿透寄主菌丝。病原真菌由于内生真菌的寄生作用,菌丝往往表现为变形、干瘪甚至消解等现象。2.细胞壁降解酶的测定。内生真菌经SMCS培养基以胶体几丁质做碳源,纤维素培养基以微晶纤维素(CM)、羧甲基纤维素(CMC)、立枯丝核菌(R.solani)或瓜果腐霉(P.aphanidermatum)的细胞壁做碳源,诱导测定了几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶、滤纸酶(FPA)、β-葡萄糖苷酶(BG)、内切-1,4-β-D-葡聚糖酶(EG)和外切-1,4-β-D-葡聚糖酶(CBH)的活性。结果显示β-1,3-葡聚糖酶活性最高,最佳培养基为SMCS培养基,立枯丝核菌的细胞壁也是很好的碳源；纤维素酶和几丁质酶活均较低。3.内生真菌在温室对部分植物病害的防治试验。选取室内拮抗活性较好的两个菌株Mu1W1C6和Mt2W1C1,在温室采取根部接菌法,将内生菌接种于黄瓜、番茄、菜豆、小麦和玉米幼苗根部,发现Mu1W1C6对蔬菜灰霉病、黄瓜苗期猝倒病和白绢病有很好的防效:Mu1W1C6在菜豆上对灰霉病的防效达48.94％,对黄瓜猝倒病防效达88.49％,对黄瓜白绢病的防效为53.83％；而Mt2W1C1虽对灰霉病有一定的生防潜力,但对种子出苗率及秧苗生长有不良影响。4.内生真菌Mu1W1C6与病原菌在植物体内的互作。光学显微镜和电子显微镜观察了Mu1W4C6与瓜果腐霉P.aphanidermatum在黄瓜根部的侵染互作,结果显示,Mu1W1C6可成功定殖于黄瓜苗的根部,提前接种Mu1W1C648h可有效抑制瓜果腐霉P.aphanidermatum在黄瓜根部组织细胞内的扩展和定殖。8.期刊论文何美仙.梅忠.HeMei-xian.MeiZhong植物内生真菌研究概况及其在农业上的应用前景-生物学通报2005,40(12)主要概述了植物内生真菌的研究状况、内生真菌的种类及分类地位;分析了内生真菌感染植物后对植物的生长、抗逆性、抗病能力、抗虫能力的影响;提出了植物内生真菌在农业上的应用前景.9.学位论文程中山两株海洋红树林内生真菌的鉴定与生物防治应用2009海洋红树林内生真菌No.1403和No.1893是由香港城市大学Vrijmoed教授等分离的，中山大学林永成教授所带领的研究小组已分别从这两种菌中分离出多种蒽醌类抗生素和具有杀虫活性的物质，这些物质都具有很好的应用前景。本文主要以这两种真菌为研究对象，在生物学特性方面，对其进行了种属鉴定和生长条件优化；在生物防治应用方面，通过对峙培养，测定了这两种真菌对水稻稻瘟病菌(Magnaporthegrisea)