辛酸硫酸铵纯化方法

所需溶液配制：1.0.06mol/LpH=4.8醋酸盐缓冲液：无水醋酸钠0.29g，冰醋酸0.141mL，纯水定容至100mL。2.2mol/L氢氧化钠溶液：16g氢氧化钠固体用于200ml纯水中。3.2mol/L盐酸溶液：取33mL36.4%的浓盐酸定容至200mL纯水中。4.0.1mol/LPBS缓冲液：80.0NaCl，KCl2.0g，Na2HPO4·12H2O29.0g，KH2PO42.0g，加超纯水定容至1L。单克隆抗体采用辛酸-硫酸铵方法纯化，具体步骤如下：（1）将腹水从-20°C冰箱拿出室温解冻。腹水用双层滤纸过滤，初步除去杂质、脂肪及细胞碎片。4°C,12000r/min，离心15min，收集上清，弃沉淀。精确定量腹水体积。（2）一份体积的腹水与2-4份体积的醋酸盐缓冲液磁力搅拌混匀，用2mol/LHCL调PH至4.5-4.8。（3）磁力搅拌下缓慢加入正辛酸，33μL/mL腹水，加完后室温磁力搅拌半小时，后置4°C静置2h以上。（4）4°C,12000r/min，离心5min，收集上清，双层滤纸过滤，收集滤液。（5）量取滤液体积，加入1/10体积的0.1MpH=7.4的PBS,用2mol/LNaOH（记录NaOH体积）调pH至7.4。（6）将上清冰浴预冷，加硫酸铵固体至0.277g/mL，边加边搅拌，并于30min内加完，置4°C过夜。（7）12000r/min，离心15min，弃上清。用一定体积的0.01mol/LPBS溶解沉淀。用PB透析两天后换0.01mol/LPBS透析两天。收集透析液，12000r/min，离心15min，取上清，置-20°C预冻后真空冻干成粉保存。张道宏师姐版本：用1/10原腹水体积的0.01mol/LpH值7.4PBS溶解沉淀；对0.01mol/LpH值7.4的PBS透析一天，离心去掉不溶杂质，用纯水进行透析，优球蛋白析出后离心收集澄清抗体溶液，置于-20°C预冻；冻干保存。