微生物控制检测

Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20091微生物控制检测MrsRobynIsaacsonManufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20092微生物检测目的•回顾环境控制和质量控制的微生物检测–微生物环境监测–容器完整性测试–灭菌前微生物负载测试–培养基灌装促生长试验–无菌测试–其他微生物实验室事项Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20093环境监测级别空气取样(CFU/m3)沉降碟(90mm直径)(个/4小时)接触碟(55mm直径)(个/碟)手指印(5个手指)(个/手套)A3333B10555C1005025-D20010050-表3–这些数据是平均值–单个沉降碟在空气中暴露小于4小时•这些数据是指导性的，并不是代表标准•必须建立微生物污染的水平（限度），这样就可以起到警戒、纠偏的目的，并监控整个工厂的空气质量趋势。微生物限度值Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20094环境监测方法•表面监测–应当对产品接触表面、地面、墙以及设备进行定期监测–接触碟–用于平整表面•取样面积25cm2•培养基要凸起，高于碟子边缘•培养基中含有中和剂–表面擦试法-用于非规则表面•擦拭面积大约为25cm2•定性或定量表面取样必须遵循无菌取样操作（使污染生产过程的关键表面的风险最小化）–擦拭法和接触碟法都可以使用Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20095环境监测方法–浮游菌监测•撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪•必须取一定体积的空气（取样体积必须有代表性）•仪器必须经过校验–沉降菌监测•沉降碟在空气中的暴露时间为30-60分钟（时间过长可能导致琼脂干掉），在灌装过程中需要更换。•只能给出定性和半定量的数据•数据必须结合空气浮游菌的取样结果进行评价Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20096环境监测取样地点–必须基于微生物污染的风险–取样点必须在产品或组件暴露的区域周围取样，比如：•在灌装针头处•冻干机产品装载处•胶塞锅•部件无菌连接操作部位•操作人员活动频繁处（但不会影响生产进程）–低级别的区域以较低频率进行监测并监控趋势Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20097环境监测人员•每次进入，手套都必须取样（但不能在消毒过后马上取样）•定期的对着装的其他部位进行取样•洁净室的操作人员必须定期的验证来表明自己在更衣时衣服未受污染（更衣资质确认）。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20098环境监测污染水平与趋势•GMP法规上的限度值仅供参考。•企业必须根据不同的区域制定警戒和纠偏限度值。•必须考虑单个结果值--平均值可能掩盖了不可接受的情况•必须要有书面的操作规程规定数据回顾和超过限度所采取的行动•趋势分析报告–对于人员和环境的短期和长期结果分析报告–环境监测结果必须归档在批生产记录里–微生物菌群的明显改变必须引起重视。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November20099环境监测消毒剂•消毒剂的适用性、有效性、局限性以及消毒规程程都必须评估–必须制定最少接触时间•对于A/B级区的消毒剂必须是无菌级别的，包装在无菌容器内，并在明确的效期内使用•必须证明对工厂内的常规菌群有效•必须使用杀孢子剂（如果在环境中发现孢子），可以“喷雾”的形式消毒部件和设备•消毒的操作规程必须足够的详尽，以确保重现性–配制，工作顺序，接触时间•从不良趋势中检出的微生物必须检测它们对于日常使用消毒剂的耐受性。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200910环境监测制药用水•制药用水的微生物水平是非常重要•必须要有一个广泛且全面的水系统监测方案•工厂源水，预处理水，反渗透水，去离子水，纯化水/超纯水和注射用水都必须被监测•企业必须设定警戒和纠偏限度。•WHO推荐（下一页）•对于纯化/水超纯水和注射用水，药典的限度如下：–纯化水100CFU/mL–超纯水和注射用水10CFU/100mL（但通常高温循环）Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200911环境监测取样地点目标值警戒纠偏源水200300500初滤后100300500软化后100300500活性炭过滤后50300500反渗透进水20200500反渗透出水1050100使用点110100制药用水微生物限度参考值（CFU/mL）Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200912环境监测制药用水•如果条件允许，需检测大肠菌群及或假单胞菌群（该菌群可能会导致生物膜的产生）。•非肠道用药制剂用水必须检测热原。–限度必须小于0.25EU/mL•水的微生物检测用R2A琼脂（此种培养基对于水中的微生物的复活提供低养分）在30-35°C至少培养5天。•取样程序必须遵循生产过程中的操作规程。压缩空气/氮气/CO2•必须监测非活性粒子和微生物。•取样时使用减压口以提供稳定的气流，验证时必须考虑这些要求Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200913容器完整性测试•密闭系统的完整性–初始验证用无菌培养基注入容器中，然后将容器浸入106CFU/mL的高浓度菌悬液中。–对真空下进行密封的容器必须定期进行真空度检测，以证明在整个有效期内仍能维持真空度。–建立规程，在制造过程剔除密闭性不好的产品。–进行灯检的操作人员必须经常休息，并且定期进行视力检查。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200914微生物负载/过程控制IPC检测•对于灭菌前的生物负载测试，过程控制和原材料的测试都必须建立相应的书面规程•必须对测试方法进行验证，来证明少量微生物也能够复活。•如果环境中有厌氧菌存在，就要考虑使用厌氧培养基。•必须有文件来规定微生物限度的目标值，警戒和纠偏值，并且文件中应规定超过纠偏值时，所必须采取的措施。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200915微生物促生长试验•用于微生物检测的培养基必须先对其进行营养试验来证明它是可以支持微生物的生长–培养基灌装验证用的培养基必须能够支持大多数微生物的生长（细菌和真菌）。–通常选用大豆酪蛋白酶消化培养基。有时如果环境中存在厌氧菌，需要考虑使用厌氧性培养基。–在培养基灌装结束以后，必须用实验证明培养基能够支持环境环境分离菌的生长。–进行营养试验时，需要接种10-100CFU的菌液。菌株包括枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉等，以及环境分离菌。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200916微生物促生长试验培养基–接种的培养基必须在3天内有微生物的生长。–用于环境监测的培养基也必须对其促生长特性进行测试。必须进行验证证明培养基对残留消毒剂的中和能力，能够持在测试条件下的微生物的复活（培养基中必须有中和剂）。–外部购买的培养基也必须进行测试。–用于培养基灌装和环境监测的培养基必须经过预培养来证明其无菌性。–培养基必须有经过验证的保存期限。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200917无菌检测•无菌检测是无菌产品释放时进行的一项质量控制检测–该方法有有显著统计学局限性–只能检测大范围的污染•取样–药典中规定了检测样品的数量及体积。–在无菌工艺生产的产品，必须对灌装过程的前、中、后以及生产过程有干扰和中断后生产的产品进行取样。–对于最终灭菌的产品，必须在先前识别的冷点处进行取样。–取样数量必须能够满足复检。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200918无菌检测•设施–无菌检测必须在和无菌工艺生产过程相同的条件下进行。•B级区背景的A级区层流（也可以在隔离器中进行）•空气经过高效过滤器HEPA过滤，必须监控压差，并有超限报警•进入该区域必须经过气闸室•操作人员必须进行正确的无菌更衣•操作人员必须经过适当的培训并对其进行人员资质确认•必须制定相应的清洁，消毒，杀菌规程•应对其环境进行监测Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200919无菌检测•药典中已规定了方法–如果产品可以过滤，推荐使用膜过滤方法–直接接种法可作为备选•培养基类型–通常使用大豆酪蛋白酶消化培养基(SCD)和液体硫乙醇酸盐培养基(用于检测需氧和厌氧微生物)–必须验证该培养基能够支持产品中曾经出现过的一系列微生物的生长，通常这些微生物数量（浓度）较少，可能需要中和抑菌剂。•细菌3天内能够生长，霉菌5天内能够生长–购买的或自制的培养基必须灭菌，灭菌程需经过验证。Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200920无菌检测•培养基–使用前必须通过营养试验（低数量的微生物）–必须有批号和有效期•培养周期–至少14天的培养–培养基SCD中30-35°C培养,FTM培养基中20-25°C培养–培养物进行定期检查–对温度进行监控，温度监控设备必须经过校验–如果产品产生浑浊、絮凝或沉淀，14天后应将适当比例的培养物（2-5%）接种到新鲜的培养基中继续培养7天Manufactureofsterilemedicines–AdvancedworkshopforSFDAGMPinspectors-Nanjing,November200921无菌检测•阴性对照–对于同一批培养基，应部分或全部预先培养14天后