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2.4微生物检测的基本技术染色观察划线接种,分离纯化生化反应Foodmate2004/3/13染色观察革兰氏染色1884年丹麦医师Gram所发明革兰氏染色法1.涂片固定2.单染—结晶紫染液第一次染色1min3.媒染—碘-碘化钾溶液浸湿30S4.脱色—95%乙醇溶液进行颜色洗脱5.复染—红色的藩红染液第二次染色呈现第二次染色的效果红色;称革兰氏阴性菌(红阴G-)细菌呈现第一次染色的效果紫色,革兰氏阳性菌(紫阳G+);划线接种,分离纯化Inoculatinganagarplatetoobtainsinglecolonies灼烧生化反应来测定微生物的代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。微生物生化反应:糖酵解试验淀粉水解试验V-P试验甲基红(MethylRed)试验靛基质(Imdole)试验枸椽酸盐试验:尿素酶(Urease)试验三糖铁(TSI)琼脂试验糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后,遇碘不再变蓝色。V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇,后者在强碱环境下,被空气中氧氧化为二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物,称V-P(+)反应。甲基红(MethylRed)试验肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖,在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸,进一步分解中,由于糖代谢的途径不同,可产生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物,可使培养基PH值下降至pH4.5以下,使甲基红指示剂变红。靛基质(Imdole)试验某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合,形成玫瑰吲哚,为红色化合物。枸椽酸盐试验某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源,及磷酸铵作为氮源,将枸椽酸盐分解为二氧化碳,培养基反应后成碱性,由于指示剂的作用,培养基变为兰色。尿素酶(Urease)试验有些细菌能产生尿素酶,将尿素分解、产生2个分子的氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色。1、未接种2、尿素酶阳性3、尿素酶阴性三糖铁(TSI)琼脂试验本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气(变黄);产生硫化氢(变黑)。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄色。a.uninoculatedb.littlechange/alkaline/-/-c.alkaline/acid/-/+d.acid/acid/+/+e.acid/acid/+/-slantcolor/buttcolor/gasproduction/hydrogensulfideproduction沙门氏菌的TSI试验
本文标题:微生物检测的基本技术(1)
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